Production en masse d’Aedes aegypti génétiquement modifié pour les disséminations sur le terrain au Brésil

Le contrôle d’Aegypti peut être réalisé à l’aide d’insectes qui contiennent une modification génétique qui provoque la mort de leur progéniture. Lorsque les mâles sont relâchés, ils s’accouplent avec la progéniture femelle produite par ces accouplements, tandis que les femelles produites par ces accouplements meurent. Le contrôle de la population peut être réalisé en relâchant continuellement des mâles génétiquement stériles.

Le gène qui cause la mort peut être contrôlé par l’ajout d’un antidote dans l’alimentation, permettant aux insectes avec la modification génétique de survivre. Pour parvenir à la suppression de la population d’aegypti. En utilisant une lignée de moustiques génétiquement modifiée, un grand nombre de moustiques mâles doivent être libérés.

Cela nécessite l’utilisation de techniques d’élevage de masse pour obtenir le maximum de moustiques mâles de la meilleure qualité et de la meilleure condition physique possible. L’élevage de masse d’OX 5 1 3 A peut être divisé en trois domaines principaux, la production d’œufs, la production de mâles et l’émergence et la maturation des mâles avant leur libération. Il s’agit d’un schéma de l’installation arrière utilisée pour la production d’OX 5 1 3 A.Mâles à Moscamed au Brésil, des œufs de haute qualité sont continuellement produits dans la salle de production d’œufs.

Ces œufs sont ensuite élevés jusqu’aux pupi dans la zone de production mâle où les pupi sont ensuite triés par sexe. Pour les mâles, une zone dédiée est prévue pour les travaux de contrôle de la qualité. Les mâles sont ensuite placés dans des dispositifs de libération et laissent émerger et mûrir avant d’être relâchés.

Les techniques présentées dans cette vidéo sont applicables aux zones de production d’œufs et de production masculine. Pour obtenir des œufs Pour la production masculine, nous utilisons une alimentation par membrane artificielle à partir de sang animal provenant d’un abattoir local. Les matériaux nécessaires à ce processus sont le biofilm et la plaque d’anin d’environ 10 centimètres carrés avec un motif de bande de roulement en relief.

D’un côté, du sang et un pouf rempli d’environ 250 grammes de grains de blé. Le système d’alimentation en plaques utilise la paraforme comme membrane à travers laquelle les moustiques peuvent se nourrir pour encourager l’alimentation. Le paramètre est volé sur la peau humaine.

Le paramètre est ensuite soigneusement étiré pour réduire son épaisseur. Le côté motif de la plaque d’aluminium est ensuite recouvert de paraforme sur trois côtés, en faisant attention de ne pas endommager la paraforme et de bien sceller les bords. Du sang est ensuite ajouté par le côté ouvert de la plaque et du paraforme.

La mangeoire est remplie à environ un tiers de sang. Le biofilm est ensuite soigneusement scellé en place pour empêcher le sang de s’échapper. Les plaques d’alimentation de sang sont ensuite placées sur le dessus des cages adultes.

Les poufs sont chauffés au micro-ondes pendant 10 secondes et placés sur la plaque pour chauffer le sang. Si nécessaire, le pouf peut être réchauffé toutes les 10 à 15 minutes. Un site de position FU est fourni trois jours après l’alimentation sanguine.

Le site de position de l’ovaire est du papier filtre à l’intérieur d’un récipient en plastique rond à moitié rempli d’eau. Placez le site de position d’opération dans la cage des adultes pour que les femelles puissent pondre leurs œufs. Deux jours plus tard, retirez le papier à œufs et placez-le sur du papier absorbant pour qu’il sèche dans des conditions insectivores.

Une fois secs, les œufs sont retirés du papier. À l’aide d’un pinceau, badigeonnez doucement les œufs dans un grand plateau, en faisant attention de ne pas endommager les œufs. En brossant trop fort, les œufs sont passés à travers un tamis pour éliminer les insectes morts et autres débris afin d’aider à prévenir la formation de moisissures.

Et pour un comptage plus précis des œufs en poids, les œufs séchés sont mis en aliquotes d’un gramme. Cela équivaut à 100 000 œufs. À l’aide d’une balance analytique dans de petits récipients en plastique, les œufs peuvent être conservés dans ces récipients dans des conditions insectifiques jusqu’à six semaines.

Pour faire éclore des œufs, les bocaux sont mis en place en ajoutant de l’eau bouillie, en scellant le couvercle et en les laissant refroidir. Cela réduit l’oxygène dans l’eau pour induire l’éclosion des œufs. Un gramme d’œufs est ajouté dans le pot et le couvercle est refermé.

Pendant une heure, transférez le contenu du pot dans un plateau avec deux litres d’eau et laissez reposer toute la nuit. Dans des conditions insectorielles. Le lendemain de l’éclosion, les larves sont sorties du plateau à travers un tamis en acier inoxydable de grade 200.

Le diamètre des trous dans le tamis est d’environ 0,075 millimètre au nord. Les larves sont ensuite placées dans un bécher de deux litres. Ensuite, le bécher est complété à deux litres avec de l’eau.

Placez le bécher sur un agitateur magnétique et ajoutez une grosse puce magnétique. Réglez la vitesse d’agitation pour bien mélanger les larves, mais pas trop vite. Comme cela peut causer des dommages à l’agitation, une larve doit être effectuée pendant le moins de temps possible pour aider à prévenir les dommages pour le contrôle de la qualité.

Le taux d’éclosion est déterminé après que les œufs ont été éclos lors du tirage au sort pendant une heure et le lendemain, trois, un million d’aliquotes sont placées sur une feuille de papier absorbant blanc avec une éponge absorbante. En dessous, le papier absorbant a une grille de carrés qui sont utilisés pour compter. Comptez le nombre d’œufs éclos et non éclos à partir de trois carrés de grille différents.

Un œuf éclos est facile à identifier. Comme la calotte de l’œuf est absente du haut de l’œuf, nous nous attendrions à un taux d’éclosion d’environ 80 à 90 %. Pour obtenir le nombre désiré de larves par plateau, prélevez trois aliquotes d’un mil chacune et placez-les dans des boîtes de Pétri séparées.

Ajoutez 10 à 20 mils d’eau supplémentaires pour disperser les larves afin de faciliter le comptage. Comptez les larves à l’aide d’un fond noir, car les larves sont blanches, ce qui facilite le comptage. L’utilisation d’un compteur, d’une pipette et d’une main ferme est recommandée pour consigner.

Le nombre total de larves par mil, le volume approprié d’eau et les larves sont ensuite aliquotes dans des gobelets. Attention à prélever les larves au même endroit dans le bécher. À chaque fois, les larves sont ensuite ajoutées aux plateaux qui ont été pré-remplis d’eau.

Les plateaux contiennent l’antidote tétracycline à une concentration de 30 microgrammes par mil. La densité des larves dans un plateau doit être optimisée en fonction de la profondeur, de la surface et de la taille des adultes. Nous avons trouvé que la densité optimale se situe entre une et trois larves par mil.

Nous utilisons de la nourriture pour poissons en flocons pour nourrir les larves. La nourriture pour poissons est écrasée dans un mélangeur. Pour obtenir une poudre fine et consistante, chaque étape de la vie nécessite des quantités de nourriture légèrement différentes.

Ainsi, le régime a été optimisé pour chaque jour et un poids spécifique est utilisé par plateau pour réduire le travail. Nous avons conçu et construit des cuillères volumétriques qui distribuent la quantité requise de nourriture facilement et efficacement. Le pube mâle commence à apparaître le septième jour, et au huitième jour, environ 70 % des mâles auront mangé.

Les femelles mangent plus tard que les mâles, mais il y a encore une proportion significative de femelles présentes le huitième jour. Le tri du Pube mâle est effectué les huitième et neuvième jours. Pour récupérer le maximum d’EPI masculins possible, le contenu d’un plateau est tamisé et placé dans une cruche prête à être triée par l’assiette.

Le séparateur utilise les différences morphologiques et de taille entre les larves et les pubis mâles et femelles pour les séparer. L’instrument se compose de deux plaques de verre parallèles. La plaque extérieure peut être déplacée vers l’avant et vers l’arrière à l’aide de quatre vis de réglage.

Les vis de réglage permettent de régler la plaque extérieure en biais, de sorte qu’un espace en forme de coin peut être formé entre les plaques en s’amincissant vers le bas. Le séparateur à plaques est configuré avec un récipient en dessous pour récupérer l’eau. Les larves et les voyous d’un plateau sont versés dans le haut du séparateur de plaques entre les plaques de verre.

Les femmes papes sont plus grandes que les papes masculines et elles se séparent au-dessus d’elles. Les larves ont une forme aplatie qui est plus mince que le pubis mâle, et elles se séparent plus bas en rinçant à l’eau et en ajustant l’angle Les larves et le pub mâle et femelle peuvent être séparés davantage avec un rinçage continu et en ajustant l’angle de la plaque. À l’aide des vis de réglage du fond, les larves peuvent être évacuées dans un récipient.

Le récipient contenant les larves est retiré et un nouveau récipient est ensuite placé sous le séparateur à plaques. Le puy mâle peut ensuite être rincé dans le nouveau récipient. Veillez à ne pas laisser une femelle se faire débusquer par les mâles.

Retirez le récipient avec un caca mâle et remplacez-le par un nouveau. Et enfin, les EPI femelles sont rincés dans le récipient frais. Les pupi mâles sont de qualité contrôlée pour la contamination femelle.

Après le tri, trois aliquotes de 500 pupi mâles sont prélevées et le nombre de femelles présents est compté au microscope. Les femelles peuvent être identifiées en regardant la forme du lobe génital. Le lobe génital féminin est beaucoup plus petit et arrondi que celui du mâle.

S’il y a plus de 1 % de femelles, le lot doit être retraité et vérifié à nouveau. Les pupi mâles triés sont répartis dans des dispositifs de libération pour émerger et mûrir avant d’être relâchés dans le champ. Résultats de plus de six mois de tri des mâles et des femelles.

Les Pupi montrent que la contamination féminine était en moyenne de 0,02 %Ce taux de contamination ne représente que 400 femelles relâchées chaque mois. Ce graphique montre les données moyennes sur la nymphose des mâles et des femelles sur une période de production de six mois. Le mâle se nymphose principalement le huitième jour et les femelles le neuvième jour.

La taille des pupies a été mesurée et comparée à l’aide de la largeur du celo thorax mesurée en prenant des photos de pupis flottant dans l’eau et en utilisant un greico comme échelle. Les mâles sont toujours plus petits que les femelles, avec très peu de chevauchement de taille, ce qui montre que des paramètres d’élevage cohérents ont été obtenus à partir de l’installation de production d’œufs. Sur une superficie d’environ 19 mètres carrés, plus de 4 millions d’œufs par semaine ont été produits à partir de la zone de production masculine.

En moyenne, 571 000 mâles par semaine ont été produits. L’efficacité de la production de l’œuf au pupi mâle trié était d’environ 26 %Une certaine perte de mâles s’est produite pendant l’émergence, et le nombre total de mâles relâchés par semaine était en moyenne de 543 000.