Name: Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-07T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 3 s
Description: Apprenez la greffe de tube neural dorsal de caille dans un embryon de poulet pour tracer la migration des cellules de la crête neurale. Cette technique permet d'étudier leur différenciation dans les embryons chimériques.

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Les auteurs tiennent à remercier les membres du laboratoire Lwigale pour la critique du manuscrit. SLG est soutenu par une bourse de Ruth L. Kirschstein NRSA du National Eye Institute (F32 EY02167301). PYL est soutenu par le National Eye Institute (EY018050).

Les auteurs n&#39;ont rien à révéler.

Le greffage du tube neural de caille dans des embryons de poulet d&#39;accueil décrit ici est une technique simple et peu coûteuse pour le traçage des sous-populations spécifiques de la migration CCN émanant de différentes régions le long de l&#39;axe rostro-caudal 21,67-69. Cette technique tire avantage de la facilité d&#39;accès aux embryons d&#39;oiseaux (par rapport aux embryons de mammifères) et peuvent être combinés avec d&#39;autres techniques, telles que l&#39;ablation des tissus, l&#39;injection de m...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif </td><td> Entreprise </td><td> Le numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Le poussin oeufs </td><td> Divers - nous utilisons la Texas A &amp; M University Poultry Science Department, TX. </td><td></td></tr><tr><td> Les oeufs de caille </td><td> Divers - nous utilisons Société Egg Ozarks, MO. </td><td></td></tr><tr><td> Egg incubateur (affichage numérique 1502 Sportsman Incubateur w / Humidité alternatif de 110-120 volts) </td><td> <a href="http://www.poultrysupply.com" target="_blank">www.poultrysupply.com</a> </td><td> 1502 </td></tr><tr><td> Dumont AA forceps, Inox revêtement époxy </td><td> Outils belle science </td><td> 11210-10 </td></tr><tr><td> Ruban adhésif </td><td> N&#39;importe quel magasin de fournitures de bureau </td><td></td></tr><tr><td> Courbé Iris pince </td><td> Outils belle science </td><td> 11065-07 </td></tr><tr><td> Jende d&#39;encre </td><td> Tout magasin de fournitures artistiques </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep (pénicilline, streptomycine) Solution </td><td> VWR International </td><td> 101447-068 </td></tr><tr><td> Clair ruban d&#39;emballage </td><td> N&#39;importe quel magasin de fournitures de bureau </td><td></td></tr><tr><td> Aiguille appareil de traction </td><td> Narashige, le Japon </td><td> PE-21 </td></tr><tr><td> Aiguille de verre tiré, fait de 1,5 à 1,8 x tube de verre de borosilicate 100mm capillaire </td><td> Kimble Chase </td><td> 34500 99 </td></tr><tr><td> Tiré de verre pipette, fabriqué à partir de 5 ¾ &quot;pipette Pasteur </td><td> Fisher Scientific </td><td> 13-678-6A </td></tr><tr><td> Bouche pipette appareil (tube aspirateur pour pipettes microcapillaire calibré) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5177-52A </td></tr><tr><td> Dumont # 5 forceps </td><td> Outils belle science </td><td> 11251-30 </td></tr><tr><td> Tonneaufil gsten, diamètre 0,1 mm </td><td> VWR International </td><td> AA10404-H2 </td></tr><tr><td> Porte-aiguilles (support de broche nickelé) </td><td> Outils belle science </td><td> 26018-17 </td></tr><tr><td> QCPN antisérum </td><td> Des études de développement de la Banque d&#39;hybridome, Université de l&#39;Iowa </td><td> QCPN </td></tr><tr><td> Alexa Fluor anticorps secondaire (par exemple, Alexa Fluor 594 chèvre anti-souris IgG1) </td><td> Invitrogen </td><td> A21125 </td></tr><tr><td> Une solution de Ringer (2L): <ul><li> 14,4 g de NaCl </li><li> 0,34 g de CaCl 2 </li><li> 0.74g KCl </li><li> 0.230g Na 2 HPO 4 </li><li> 0,04 g de KH 2 PO 4 </li><li> ddH 2 O à 2L </li><li> Filtre à l&#39;autoclave </li></ul></td><td> Tous les réactifs de Fisher Scientific </td><td><ul><li> 7647-14-5 </li><li> 10043-52-4 </li><li> 7447-40-7 </li><li> 7558-79-4 </li><li> 7778-77-0 </li></ul></td></tr></tbody></table>

analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la croix-espèces transplantation

Analysis of Neural Crest Migration and Differentiation by Cross-species Transplantation

Embryons aviaires fournir une plate-forme unique pour l&#39;étude de nombreux vertébrés processus de développement, en raison de la facilité d&#39;accès des embryons dans l&#39;œuf. Chimériques embryons aviaires, dans lequel le tissu des bailleurs de fonds de caille est transplanté dans un embryon de poulet in ovo, combiner la puissance de l&#39;étiquetage génétique indélébile de populations de cellules avec la facilité de manipulation présenté par l&#39;embryon aviaire. Quail-chiches chimères sont un outil classique pour tracer migratoires des cellules de la crête neurale (CCN) 1-3. CCN sont une population de passage migratoire des cellules dans l&#39;embryon, qui sont originaires de la région dorsale de la 4 du tube neural en développement. Ils subissent une transition épithélio-mésenchymateuse et migrent vers d&#39;autres régions de l&#39;embryon, où ils se différencient en différents types cellulaires, y compris le cartilage 5-13, 11,14-20 mélanocytes, les neurones et cellules gliales 21-32. CCN sont multipotentes, et leur sort ultime est influencéeexpérimentés par 1) la région du tube neural dont ils sont issus le long de l&#39;axe rostro-caudale de l&#39;embryon 11,33-37, 2) des signaux provenant des cellules voisines de leur migration 38-44, et 3) le micro-ultime de leur destination à l&#39;intérieur de l&#39;embryon 45,46. Suivre ces cellules à partir de leur point d&#39;origine à du tube neural, à leur position finale et le sort au sein de l&#39;embryon, donne un aperçu important dans les processus de développement qui régulent structuration et de l&#39;organogenèse. Transplantation des régions complémentaires du tube neural des bailleurs de fonds (homotopes greffage) ou différentes régions du tube neural des bailleurs de fonds (hétérotopique greffage) peut révéler des différences dans pré-spécification de CCN le long de l&#39;axe rostro-caudal 2,47. Cette technique peut être en outre adapté pour transplanter un compartiment unilatérale du tube neural, de telle sorte que d&#39;un côté est dérivé du tissu du donneur, et les restes côté controlatéral imperturbable dans l&#39;embryon d&#39;accueil, yiElding un contrôle interne au sein du même échantillon 2,47. Il peut également être adapté pour la transplantation de segments du cerveau chez les embryons plus tard, après HH10, lorsque le tube neural antérieur a fermé 47. Nous rapportons ici les techniques pour générer des cailles-chiches chimères par transplantation du tube neural, qui permettent de tracer des CNC migratoires provenant d&#39;un segment distinct du tube neural. Spécifique à l&#39;espèce marquage des cellules dérivées des bailleurs de fonds avec l&#39;anticorps spécifique à la caille QCPN 48-56 permet au chercheur de distinguer des donateurs et des cellules hôtes au point de fin d&#39;expérimentation. Cette technique est simple, peu coûteux, et a de nombreuses applications, y compris le sort de cartographie, la lignée cellulaire de traçage et l&#39;identification des pré-patterning événements le long de l&#39;axe rostro-caudal 45. En raison de la facilité d&#39;accès à l&#39;embryon aviaire, la technique de greffe caille-poussin peut être combiné avec d&#39;autres manipulations, y compris mais non limité à 4 ablation lentille0, l&#39;injection de molécules inhibitrices 57,58, ou la manipulation génétique par électroporation de plasmides d&#39;expression 59-61, afin d&#39;identifier la réponse de certains flux migratoires de CCN à des perturbations dans le programme de développement de l&#39;embryon. En outre, cette technique de greffage peut aussi être utilisé pour générer d&#39;autres embryons interspécifiques chimériques tels que la caille-canard chimères d&#39;étudier la contribution de la CCN à la morphogenèse cranio-faciale, ou la souris-chiches chimères de combiner la puissance de la génétique de la souris avec la facilité de manipulation de l&#39;embryon aviaire 62.

Une approche pour l&#39;analyse des migrations et le destin éventuel de cellules aviaires de la crête neurale chez la caille-poulet embryons chimériques est décrite. Cette méthode est une technique simple et directe pour le traçage des cellules de la crête neurale au cours de la migration et la différenciation qui seraient autrement difficiles à distinguer au sein d&#39;un embryon de poulet non manipulée.

Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation

Les embryons aviaires constituent une plateforme unique pour l'étude de nombreux processus de développement des vertébrés, en raison de la facilité d'accès aux embryons à l'intérieur de l'œuf. ...

L'objectif général de cette procédure est de greffer un explant de tube neural dorsal provenant d'un embryon de caille dans un embryon de poulet de stade correspondant, afin de suivre la migration et le devenir des cellules de la crête neurale. Cette opération s'effectue en commençant par déchirer un petit trou dans la membrane IGN de l'embryon de poulet hôte pour accéder au tube neural. L'embryon de caille donneur est ensuite retiré de son œuf afin de le préparer à l'excision du greffon.À l'étape suivante, la région d'intérêt est excisée du tube neural de l'embryon hôte. Une région similaire est ensuite excisée du tube neural du donneur pour la greffe. Ensuite, le tube neural du donneur est transplanté dans le tube neural de l'hôte.Enfin, l'embryon chimérique est incubé jusqu'au stade souhaité afin de détecter les cellules arrivées de la crête neurale dans l'organe choisi. En définitive, la migration et la différenciation des cellules de la crête neurale issues du donneur vers divers emplacements dans l'embryon hôte peuvent être visualisées par microscopie en immunofluorescence. La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car les étapes de microdissection et de gre

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Recherche

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Neuroscience

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Pour cultiver des cellules souches neurales de crête (NCSC) in vitro, un milieu spécial (NCSCM) est nécessaire. Partie essentielle de NCSCM est extrait d'embryon de poulet (PECO). Nous décrivons ici les techniques précises pour produire une quantité maximisée de qualité pure et de haute PECO, y compris des détails comme l'isolement, la macération, la centrifugation et la filtration.

Production d&#39;extrait d&#39;embryon de poulet pour la culture des neurones murins Cellules souches Crest

Une approche pour analyser la migration de cellules issues d'explants (cellules de la crête neurale trunkale) est décrite. Cette méthode est peu coûteuse, douce et capable de distinguer la chimiotaxie à la fois de la chimokinèse et des autres influences sur la polarité migratoire, telles que celles provenant des interactions entre cellules au sein de la culture primaire de cellules de la crête neurale trunkale.

Analyse de la migration cellulaire Tronc Crête neurale en utilisant une modification Zigmond Chambre Assay

Isolement de la crête neurale embryonnaire à partir du tube neural facilite l'utilisation...

Isolement et culture de cellules de crêtes neurales de tube neural embryonnaire murin

Le mésenchyme crânienne subit des mouvements morphogénétiques dramatiques qui fournit sans doute une force motrice pour l'élévation des plis...

Un test pour évaluer le comportement des explants cellulaires du mésenchyme crânienne

Ce protocole décrit comment disséquer la crête neurale crânienne prémigratoire (NC) de Xenopus laevis neurulas. Ces explants peuvent être étalées sur la fibronectine et cultivées in vitro, ou greffés retour dans des embryons hôtes. Cette technique permet d'étudier les mécanismes de la NC transition épithélium-à-mésenchyme, la migration et la différenciation.

Dissection de<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Crête neurale pour<em&gt; In vitro</em&gt; Culture explantation ou<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantation

Une combinaison des techniques optiques avancées de lecture avec excitation de fluorescence multi-photons longue longueur d’onde de laser a été mis en œuvre pour capturer l’imagerie haute résolution, en trois dimensions, en temps réel de la migration de la crête neurale en Tg (sox10:EGFP) et les embryons de poissons zèbres Tg (foxd3:GFP).

Multiphotonique Time Lapse imagerie de visualiser le développement en temps réel : visualisation de la migration des cellules neurales de crête dans des embryons de poisson-zèbre

Ce protocole décrit la dissection et la culture des cellules de crête neurale crânienne des modèles de souris, principalement pour l'étude de la migration cellulaire. Nous décrivons les techniques d'imagerie en direct utilisées et l'analyse des changements de vitesse et de forme cellulaire.

Dissection, culture et analyse des cellules neurales primaires de crête neurale de la souris pour l'étude de la délamination et de la migration neurales de cellules de crête

Cet article décrit une technique de transplantation de tissus conçue pour tester les propriétés de signalisation et de structuration du cerveau antérieur basal au cours du développement craniofacial.

Création de chimères du cerveau antérieur aviaire pour évaluer le développement facial

Ce protocole polyvalent décrit l’isolement des cellules de la crête neurale prémigratoire (CCN) par l’excision des plis neuraux crâniens des embryons de poussins. Lors du placage et de l’incubation, les NCC migrateurs émergent des explants de plis neuraux, ce qui permet d’évaluer la morphologie et la migration des cellules dans un environnement 2D simplifié.

Préparation et analyse morphologique de cultures de cellules de crête neurale crânienne de poussin

Nous présentons un protocole de différenciation in vitro tridimensionnel (3D) générant des neurosphères de taille reproductible pour produire des cellules de crête neurale crânienne à partir de cellules souches embryonnaires de souris. Nous montrons que cette méthodologie réduit la variabilité par rapport aux protocoles précédents et comment elle peut être utilisée pour le dosage multiplexé afin d’étudier le développement des cellules de la crête neurale crânienne.

Cellules de crête neurale crânienne : protocole de différenciation in vitro tridimensionnelle pour le dosage multiplexé

Apprenez la greffe de tube neural dorsal de caille dans un embryon de poulet pour tracer la migration des cellules de la crête neurale. Cette technique permet d'étudier leur différenciation dans les embryons chimériques.

Analyse de la migration des crêtes neurales et la différenciation par la Croix-espèces transplantation

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