Tests cliniques et retrait de la moelle épinière dans un modèle de souris pour la sclérose latérale amyotrophique (SLA)

Un modèle de souris pour la sclérose latérale amyotrophique (SLA) est un examen clinique et comportemental. Comme condition préalable à une analyse qui l'accompagne immunohistologique la préparation de la moelle épinière est représentée en détail.

Bonjour, je m’appelle Lar Turner. Je suis postdoctorant au département de neurologie de l’Université d’Ingham, en Allemagne. Bonjour, je m’appelle Lin Gunda.

Je suis étudiant en médecine et je fais mon travail de thèse dans ce laboratoire. Aujourd’hui, nous allons vous montrer les tests cliniques du SODG 93, un modèle Moss de la sclérose latérale atrophique. De plus, nous ferons une démonstration du test de la fonction motrice avec ce que l’on appelle un test de rotor et en plus, un autre test de la fonction motrice avec la poignée Hanging Wire afin d’effectuer une analyse immunologique.

Après le test fonctionnel des souris, une procédure nécessaire consiste à retirer la moelle épinière, le nerf STIC et le muscle gastroc. Nous voulons montrer ces procédures chirurgicales en détail et présenter à la fin quelques résultats immunologiques exemplaires. D’accord, mais commençons maintenant par les tests cliniques.

Il s’agit d’un MOE de type sauvage qui ne présente aucun symptôme clinique comme le tremblement musculaire ou le Parsis dans notre système de classification clinique. Ce serait le quatrième score. Il s’agit d’un moe transgénique A LS.

À un stade précoce de la maladie, il présente un tremblement sévère du membre hin droit qui le classe comme SCORE trois E.Les anomalies graves de la marche classent cet animal comme score deux. Le traînage d’au moins un membre postérieur est classé comme score clinique un dans le test du fil de suspension, la force musculaire brute des côtes est évaluée. Chaque souris est placée sur un fil CustomMade et soigneusement retournée au-dessus du bouton recouvert de paille.

Après trois entraînements consécutifs d’au moins 180 secondes, la latence des chutes a été mesurée. Chaque souris a jusqu’à trois tentatives pour tenir le couvercle inversé pendant un maximum de 180 secondes, et la période la plus longue est enregistrée par rapport à la souris de type fil blanc sur le côté droit. La plaque de souris transgénique à gauche est très faible et tombe du couvercle avant d’atteindre le maximum.

L’appareil à tige Rotor est utilisé pour mesurer la coordination motrice, l’équilibre et la capacité d’apprentissage moteur. Une bonne performance nécessite un degré élevé de coordination sensorimotrice. Il se compose d’une broche rotative commandée par ordinateur, entraînée par moteur, et de cinq voies sur cinq m.

Les défauts des souris sont détectés automatiquement par pression sur la plaque de plastique inférieure. Après s’être entraîné trois fois consécutives d’au moins 180 secondes à une vitesse constante de 15 tours par minute, le temps pendant lequel un animal peut rester sur la pourriture tournante est mesuré. Chaque animal subit trois épreuves et la plus longue latence sans chute est enregistrée.

Le mos de type sauvage en bonne santé sur le côté gauche fonctionne sans difficulté sur la tige du rotor. En revanche, l’a s mo transgénique sur le côté droit a de graves problèmes pour rester même sur la tige du rotor et glisse après un certain temps observé par derrière. Vous voyez les graves difficultés de fonctionnement de la souris retre gauche.

Par rapport à la souris à fil de fer en bonne santé, elle n’est pas capable de suivre la vitesse de la tige du rotor et ne peut pas pousser vers le haut avec les membres HIN. Afin d’effectuer une analyse immunochimique de la moelle épinière, les animaux doivent être sacrifiés. Il est très important de toujours suivre strictement les directives locales pour la bonne conduite des expériences sur les animaux.

Dans ce contexte, dans cet aperçu très simplifié de la colonne vertébrale et de ses tissus environnants, les principales structures anatomiques sont représentées. Nous placerons l’animal sur sa face ventrale et commencerons à préparer les muscles du sac dorsal. Une fois le tissu musculaire retiré, nous accéderons à la colonne vertébrale qui entoure la moelle épinière.

Une fois que l’animal a été sacrifié et perfusé avec une solution contenant une hauteur de paraforme, la moelle épinière peut être retirée. L’animal est placé sur une table d’opération et les membres complets sont fixés sur les côtés et ordonnent d’exposer le dos de la souris. L’animal est mouillé pour aplatir le pelage et faciliter l’incision cutanée suivante.

Pour cela, un scalpel bien aiguisé est utilisé. Veillez à étirer la peau des deux côtés. Pour faciliter la coupe, le muscle de la jambe doit être préparé.

Leur peau doit également être incisée. Une fois l’incision cutanée terminée, elle est doucement écartée. Avec une pince à épiler ayant enlevé les muscles de la jambe et le nerf sciatique, nous continuons à approcher la moelle épinière et plaçons l’animal sur une nouvelle table d’opération.

Il est maintenant facile d’identifier le crâne, le cou, les muscles et la colonne vertébrale. Après avoir identifié toutes ces structures, il est facile de passer à l’étape suivante. Les muscles du cou et du ligament nu doivent être retirés.

Attention à ne pas inciser trop profondément et à ne pas diriger la colonne vertébrale. Dans l’étape suivante, les muscles paravertébraux sont entièrement retirés pour exposer la colonne vertébrale. Afin d’accéder à la colonne vertébrale, plusieurs ectomies doivent être effectuées.

Nous commençons par la partie cervicale de la colonne vertébrale, y compris l’articulation occipitale atlantique. Pour effectuer la laminectomie, nous devons couper l’arc vertébral pour pouvoir retirer tous les processus vertébraux du corps vertébral. Comme expliqué précédemment, la laminectomie commence par la coupe des arcs vertébraux.

Ensuite, la laina peut être retirée. Encore une fois, veillez à ne pas lésionner la moelle épinière car beaucoup plus de ral doivent être enlevés. Il est très utile d’utiliser des ciseaux inclinés et d’inci plusieurs arcs vertébraux des deux côtés à la fois.

Tirez ensuite sur les apophyses dorsales pour éliminer entièrement la lamine vertébrale et le gros plan. Vous voyez que la paire de ciseaux doit être soigneusement insérée le plus latéralement sur le côté du canal rachidien. Les parties latérales restantes de la colonne vertébrale doivent être enlevées pour faciliter l’ablation complète ultérieure de la moelle épinière.

Un repère anatomique de la moelle épinière sont ce que l’on appelle l’esencia cervicale et lombaire. Après avoir terminé les ectomies de toute la moelle épinière, assurez-vous de transecter également toutes les racines ventrales de la moelle épinière et de la libérer de la matière dure des méninges. Ensuite, la moelle épinière cervicale est coupée.

Cranialement et son ablation est recommencée. Touchez la moelle épinière très prudemment afin de ne pas endommager ce tissu, car cela pourrait entraîner de graves limitations pour une analyse immuno-immunochimique ultérieure. L’ablation de la moelle épinière se poursuit au niveau thoracique et se poursuit à la partie lombaire.

Il est finalement coupé à nouveau cette fois-ci sur le côté du cordon équin. Maintenant, nous sommes en mesure de le libérer complètement. Ici, vous voyez la moelle épinière placée juste à côté de son emplacement d’origine dans la colonne RAL.

En fin de compte, il est placé dans une solution de post-fixation Paraform Hyde. À titre d’exemple classique pour l’analyse immunohistochimique de la moelle épinière, vous pouvez appliquer un anticorps qui reconnaît la choline, l’acétyl transférase pour identifier les motoneurones dans la corne antérieure de la moelle épinière. Ici, vous voyez un grand nombre de motoneurones chez un animal sain de type sauvage.

En revanche, l’animal transgénique a LS en phase terminale présente un nombre beaucoup plus petit de motoneurones dans la corne antérieure. En regardant cet article vidéo, vous devriez avoir appris l’examen clinique de base du SODG 93. Un modèle murin de sclérose latérale atrophique.

Deux tests de comportement moteur ont été démontrés : le test du rotor et le test du fil suspendu. Ils offrent une bonne possibilité d’évaluer la fonction motrice de base. Ils sont faciles à réaliser, sensibles à la détection du déficit moteur et rapides et efficaces.

La partie principale de cette vidéo consiste en une démonstration de la technique de préparation de la moelle épinière. Cela peut bien sûr être appliqué à n’importe quel autre modèle de maladie chez la souris et constitue une étape essentielle pour l’analyse immunochimique ultérieure de la pathologie de la moelle épinière. Merci d’avoir regardé.

Nous espérons que cet article vidéo vous sera utile pour vos futures expériences.