Tests cliniques et retrait de la moelle épinière dans un modèle de souris pour la sclérose latérale amyotrophique (SLA)

Bonjour, je m'appelle Lar Turner. Je suis postdoctorant au Département de neurologie de l'Université d'Ingham, en Allemagne. Bonjour, je m'appelle Lin Gunda.

Je suis étudiant en médecine et je réalise mon travail de thèse dans ce laboratoire. Aujourd'hui, nous allons vous présenter les tests cliniques du SODG 93, un modèle murin de la sclérose latérale amyotrophique. Par ailleurs, nous démontrerons un test de fonction motrice appelé test du rotarod, ainsi qu'un autre test de fonction motrice utilisant la grille suspendue, afin de réaliser une analyse immunologique.

Après le test fonctionnel des souris a s, une procédure nécessaire consiste à retirer la moelle épinière, le nerf STIC et le muscle gastrocnémien. Nous souhaitons détailler cette procédure chirurgicale et présenter quelques résultats immunologiques exemplaires à la fin. Très bien, mais commençons d'abord par les tests cliniques.

Il s'agit d'un MOE de type sauvage à déplacement libre qui ne présente aucun symptôme clinique tel qu'un tremblement musculaire ou un Parsis dans notre système de classification clinique. Cela correspondrait à un score de quatre. Il s'agit d'un MOE transgénique de type A LS.

Au stade précoce de la maladie, il présente un tremblement sévère du membre postérieur droit, ce qui le classe comme SCORE trois E. Les anomalies sévères de la démarche classent cet animal comme score deux. Le traînement d'au moins un membre postérieur est classé comme score clinique un lors du test du fil suspendu, où l'on évalue la force musculaire globale des membres postérieurs. Chaque souris est placée sur un fil sur mesure puis retournée précautionneusement tête en bas au-dessus du bouton recouvert de paille.

Après un entraînement effectué trois fois de suite pendant au moins 180 secondes, la latence à la chute est mesurée. Chaque souris dispose d'au maximum trois tentatives pour se maintenir accrochée au couvercle retourné pendant un maximum de 180 secondes, et la durée la plus longue est enregistrée par rapport à la souris de type fil blanc située à droite. La souris transgénique porteuse de plaques située à gauche est très faible et tombe du couvercle avant d'atteindre le maximum.

L'appareil à barre rotative est utilisé pour mesurer la coordination motrice, l'équilibre et la capacité d'apprentissage moteur. Une bonne performance nécessite un haut degré de coordination sensori-motrice. Il se compose d'un axe rotatif motorisé commandé par ordinateur et de cinq voies destinées à cinq m.

Les chutes des souris sont détectées automatiquement par pression sur la plaque en plastique inférieure. Après un entraînement de trois fois consécutives d'au moins 180 secondes à une vitesse constante de 15 tours par minute, on mesure la durée pendant laquelle un animal peut rester sur le rotarod en rotation. Chaque animal subit trois essais et la latence la plus longue sans chute est enregistrée.

Le moustique sain de type sauvage à gauche court sans difficulté sur la tige rotative. En revanche, le moustique transgénique as mo du côté droit présente de graves difficultés à rester sur la tige rotative et finit par en glisser, comme observé depuis l'arrière. Vous constatez les graves difficultés de course de la souris retre gauche.

Par rapport à la souris témoin en bonne santé, elle est incapable de suivre la vitesse de la tige rotative et ne peut pas pousser vers le haut avec les membres HIN. Afin d'effectuer une analyse immunochimique de la moelle épinière, les animaux doivent être sacrifiés. Il est très important de toujours respecter strictement les directives locales concernant la conduite appropriée des expériences sur les animaux.

Dans ce contexte, dans cette vue très simplifiée de la colonne vertébrale et des tissus environnants, les principales structures anatomiques sont représentées. Nous placerons l'animal sur son côté ventral et commencerons à préparer les muscles à partir du sac dorsal. Une fois le tissu musculaire retiré, nous accéderons à la colonne vertébrale qui renferme la moelle épinière.

Après que l'animal a été sacrifié et perfusé avec une solution contenant du paraformaldéhyde, la moelle épinière peut être retirée. L'animal est placé sur une table d'opération et les membres entiers sont fixés sur les côtés afin d'exposer le dos de la souris. L'animal est humidifié pour aplatir le pelage et faciliter l'incision cutanée suivante.

Pour cela, un scalpel bien aiguisé est utilisé. Veillez à étirer la peau vers les deux côtés. Pour faciliter la découpe, le muscle de la jambe doit être préparé.

Leur peau doit également être incisée. Une fois l'incision cutanée terminée, elle est doucement écartée. À l'aide d'une paire de pinces ayant retiré les muscles des pattes et le nerf sciatique, nous continuons de nous approcher de la moelle épinière et plaçons l'animal sur une nouvelle table d'opération.

Il est désormais facile d'identifier le crâne, le cou, les muscles et la colonne vertébrale. Une fois toutes ces structures identifiées, il est aisé de passer à l'étape suivante. Les muscles du cou et le ligament nu doivent être retirés.

Veillez à ne pas inciser trop profondément et atteindre la colonne vertébrale. À l'étape suivante, les muscles paravertébraux sont entièrement retirés afin d'exposer la colonne vertébrale. Pour accéder à la colonne vertébrale, plusieurs ostéotomies doivent être réalisées.

Nous partons de la partie cervicale de la colonne vertébrale, y compris l'articulation occipito-atloïdienne. Pour réaliser la laminectomie, nous devons couper l'arc vertébral afin de pouvoir retirer toutes les apophyses vertébrales du corps vertébral. Comme expliqué précédemment, la laminectomie commence par la section des arcs vertébraux.

Ensuite, on peut retirer la lame. Là encore, faites attention de ne pas lésionner la moelle épinière, car de nombreux ral doivent encore être retirés. Il est très utile d'utiliser des ciseaux angulés et d'inciser plusieurs arcs vertébraux des deux côtés simultanément.

Ensuite, tirez sur les apophyses dorsales pour retirer entièrement les lames vertébrales et le plan rapproché. Vous constatez que la paire de ciseaux doit être insérée avec précaution le plus latéralement possible sur le côté du canal rachidien. Les parties latérales restantes de la colonne vertébrale doivent être retirées afin de faciliter le retrait ultérieur complet de la moelle épinière.

Un repère anatomique de la moelle épinière correspond aux renflements cervical et lombaire. Après avoir terminé les laminectomies sur toute la longueur de la moelle épinière, assurez-vous également de sectionner toutes les racines ventrales de la moelle épinière et de la libérer de la dure-mère des méninges. Ensuite, on coupe la moelle épinière cervicale.

Vers la partie crâniale et la suppression est reprise. Toucher très prudemment la moelle épinière afin de ne pas endommager ce tissu, car cela pourrait entraîner de graves limitations pour les analyses immuno-immunochimiques ultérieures. La suppression de la moelle épinière se poursuit au niveau thoracique puis s'étend à la partie lombaire.

Il est finalement coupé à nouveau, cette fois au niveau de la queue de cheval. Nous sommes maintenant en mesure de le libérer complètement. Ici, vous voyez la moelle épinière placée juste à côté de sa position d'origine dans la colonne vertébrale.

Enfin, il est placé dans une solution de post-fixation au paraformaldéhyde. Comme exemple classique d'analyse immunohistochimique de la moelle épinière, vous pouvez appliquer un anticorps dirigé contre la choline acétyltransférase afin d'identifier les motoneurones dans la corne antérieure de la moelle épinière. Ici, vous observez un grand nombre de motoneurones chez un animal sauvage sain.

En revanche, l'animal transgénique atteint de SLA à un stade terminal présente un nombre nettement plus faible de motoneurones dans la corne antérieure. Après avoir visionné cet article vidéo, vous devriez avoir appris les bases de l'examen clinique du modèle murin SODG93.A de la sclérose latérale amyotrophique.

Deux tests comportementaux moteurs ont été utilisés : le test du rotorod et le test du fil suspendu. Ils offrent une bonne possibilité d'évaluer la fonction motrice de base. Ils sont faciles à réaliser, sensibles pour la détection des déficits moteurs et efficaces en termes de temps.

La partie principale de cette vidéo consiste en une démonstration de la technique de préparation de la moelle épinière. Cette technique peut bien sûr être appliquée à tout autre modèle de maladie chez la souris et constitue une étape essentielle pour l'analyse immunochimique ultérieure de la pathologie de la maladie dans la moelle épinière. Merci d'avoir regardé.

Nous espérons que cet article vidéo sera utile pour vos futurs expériences.