Name: En temps réel dimagerie numérique de leucocytes-endothélial interaction dans lischémie-reperfusion (IRI) du muscle Cremaster Rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 7 s
Description: Découvrez la microscopie intravivante pour étudier les interactions leucocyte-endothélium lors de l'ischémie-reperfusion dans le muscle crémastère du rat. Cette méthode permet d'analyser l'activation des leucocytes en temps réel.

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Ce travail a été soutenu par une subvention de la «Deutsche Forschungsgemeinschaft» pour SU Eisenhardt (AE 866/1-1).

<ol><li>Cetin, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effect+of+fucoidin+%28a+neutrophil+rolling+inhibitor%29+on+ischemia+reperfusion+injury%3A+experimental+study+in+rat+epigastric+island+flaps%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Plast.+Surg%22%5BJournal%5D)">Protective effect of fucoidin (a neutrophil rolling inhibitor) on ischemia reperfusion injury: experimental study in rat epigastric island flaps.</a> Ann. Plast. Surg. 47, 540-546 (2001).</li>
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<li>Dumont, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+imaging+of+apoptotic+cell-membrane+changes+at+the+single-cell+level+in+the+beating+murine+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Med%22%5BJournal%5D)">Real-time imaging of apoptotic cell-membrane changes at the single-cell level in the beating murine heart.</a> Nat Med. 7, 1352-1355 (2001).</li>
<li>Baez, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+open+cremaster+muscle+preparation+for+the+study+of+blood+vessels+by+in+vivo+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">An open cremaster muscle preparation for the study of blood vessels by in vivo microscopy.</a> Microvasc Res. 5, 384-394 (1973).</li>
<li>Woeste, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Octreotide+attenuates+impaired+microcirculation+in+postischemic+pancreatitis+when+administered+before+induction+of+ischemia%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Octreotide attenuates impaired microcirculation in postischemic pancreatitis when administered before induction of ischemia.</a> Transplantation. 86, 961-967 (2008).</li>
<li>Schultz, J. E., Hsu, A. K., Gross, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+mimics+the+cardioprotective+effect+of+ischemic+preconditioning+via+a+glibenclamide-sensitive+mechanism+in+the+rat+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Morphine mimics the cardioprotective effect of ischemic preconditioning via a glibenclamide-sensitive mechanism in the rat heart.</a> Circ. Res. 78, 1100-1104 (1996).</li>
<li>Dobschuetz, E. von <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+intravital+fluorescence+microscopy--a+novel+method+for+the+assessment+of+microvascular+permeability+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc+Res%22%5BJournal%5D)">Dynamic intravital fluorescence microscopy--a novel method for the assessment of microvascular permeability in acute pancreatitis.</a> Microvasc Res. 67, 55-63 (2004).</li>
<li>Vutskits, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adverse+effects+of+methylene+blue+on+the+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Adverse effects of methylene blue on the central nervous system.</a> Anesthesiology. 108, 684-692 (2008).</li>
<li>Takasu, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+survival+time+with+combined+early+blood+transfusion+and+fluid+administration+in+uncontrolled+hemorrhagic+shock+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Trauma%22%5BJournal%5D)">Improved survival time with combined early blood transfusion and fluid administration in uncontrolled hemorrhagic shock in rats.</a> J. Trauma. 8, 312-316 (2010).</li>
<li>Proctor, K. G., Busija, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relationships+among+arteriolar%2C+regional%2C+and+whole+organ+blood+flow+in+cremaster+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Relationships among arteriolar, regional, and whole organ blood flow in cremaster muscle.</a> Am. J. Physiol. 249, 34-41 (1985).</li>
<li>Bagher, P., Segal, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Mouse+Cremaster+Muscle+Preparation+for+Intravital+Imaging+of+the+Microcirculation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">The Mouse Cremaster Muscle Preparation for Intravital Imaging of the Microcirculation.</a> J. Vis. Exp. (52), e2874(2011).</li>
<li>Kanwar, S., Hickey, M. J., Kubes, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postischemic+inflammation%3A+a+role+for+mast+cells+in+intestine+but+not+in+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Postischemic inflammation: a role for mast cells in intestine but not in skeletal muscle.</a> Am. J. Physiol. 275, 212-218 (1998).</li>
<li>Leoni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inflamed+phenotype+of+the+mesenteric+microcirculation+of+melanocortin+type+3+receptor-null+mice+after+ischemia-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Inflamed phenotype of the mesenteric microcirculation of melanocortin type 3 receptor-null mice after ischemia-reperfusion.</a> FASEB J. 22, 4228-4238 (2008).</li>
<li>Simoncini, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+oestrogen+receptor+with+the+regulatory+subunit+of+phosphatidylinositol-3-OH+kinase%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Interaction of oestrogen receptor with the regulatory subunit of phosphatidylinositol-3-OH kinase.</a> Nature. 407, 538-541 (2000).</li>
<li>Woollard, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathophysiological+levels+of+soluble+P-selectin+mediate+adhesion+of+leukocytes+to+the+endothelium+through+Mac-1+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Pathophysiological levels of soluble P-selectin mediate adhesion of leukocytes to the endothelium through Mac-1 activation.</a> Circ. Res. 103, 1128-1138 (2008).</li>
<li>Mori, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ischemia-reperfusion+induced+microvascular+responses+in+LDL-receptor+-%2F-+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ischemia-reperfusion induced microvascular responses in LDL-receptor -/- mice.</a> Am. J. Physiol. 276, H1647-H1654 (1999).</li>
<li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+Molecular+Changes+Induced+by+Ischemia%2FReperfusion+in+Human+Free+Muscle+Flap+Tissue+Samples%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Plast.+Surg%22%5BJournal%5D)">Monitoring Molecular Changes Induced by Ischemia/Reperfusion in Human Free Muscle Flap Tissue Samples.</a> Ann. Plast. Surg. , (2011).</li>
<li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+activation-specific+human+anti-%7Balpha%7DM%7Bbeta%7D2+single-chain+antibodies+as+potential+diagnostic+tools+and+therapeutic+agents%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Generation of activation-specific human anti-{alpha}M{beta}2 single-chain antibodies as potential diagnostic tools and therapeutic agents.</a> Blood. 109, 3521-3528 (2007).</li>
<li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissociation+of+pentameric+to+monomeric+C-reactive+protein+on+activated+platelets+localizes+inflammation+to+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22Circ+Res%22%5BJournal%5D)">Dissociation of pentameric to monomeric C-reactive protein on activated platelets localizes inflammation to atherosclerotic plaques.</a> Circ Res. 105, 128-137 (2009).</li>
<li>Eisenhardt, S. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C-reactive+protein%3A+how+conformational+changes+influence+inflammatory+properties%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Cycle%22%5BJournal%5D)">C-reactive protein: how conformational changes influence inflammatory properties.</a> Cell Cycle. 8, 3885-3892 (2009).</li>
<li>Granger, D. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGranger%2C+DN+%22Physiology+and+pathophysiology+of+leukocyte+adhesion%22">Physiology and pathophysiology of leukocyte adhesion</a>. , Oxford University Press. New York. 520(1995).</li>
<li>Baatz, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Kinetics+of+white+blood+cell+staining+by+intravascular+administration+of+rhodamine+6G%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Microcirc.+Clin.+Exp%22%5BJournal%5D)">Kinetics of white blood cell staining by intravascular administration of rhodamine 6G.</a> Int. J. Microcirc. Clin. Exp. 15, 85-91 (1995).</li>
<li>Mempel, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+leukocyte+trafficking+in+blood+vessels+and+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Opin.+Immunol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of leukocyte trafficking in blood vessels and tissues.</a> Curr. Opin. Immunol. 16, 406-417 (2004).</li>
<li>Abbitt, K. B., Rainger, G. E., Nash, G. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+fluorescent+dyes+on+selectin+and+integrin-mediated+stages+of+adhesion+and+migration+of+flowing+leukocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Effects of fluorescent dyes on selectin and integrin-mediated stages of adhesion and migration of flowing leukocytes.</a> J. Immunol. Methods. 239, 109-119 (2000).</li>
</ol>

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

Leukocyte-endothélial interaction, de production d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène et l&#39;activation du système du complément sont les principales caractéristiques de la dysfonction des tissus IRI-induite. 26 La microcirculation du tissu affecté est considéré comme le site intégrante de l&#39;apparition inflammatoire. Mis à part des expériences ex vivo tels que des tests de chambre d&#39;écoulement 27, 28, il est obligatoire de fournir des modèles bien établis de l&#39;imagerie in...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom de l&#39;équipement: </td><td> Société: </td><td> No de catalogue: </td><td> Commentaires: </td></tr><tr><td> Forene 100% (V / V) </td><td> Abbé </td><td> B506 </td><td> API isoflurane </td></tr><tr><td> Terylene Suture </td><td> Serag Weissner </td><td> OC108000 </td><td></td></tr><tr><td> Portex fine pour injection tubes en polyéthylène </td><td> Smiths Medical </td><td> 800/100/100 </td><td> 0,28 mm de diamètre intérieur </td></tr><tr><td> 0,9% de solution saline </td><td> Fresinus Kabi </td><td> 808771 </td><td></td></tr><tr><td> Change-A-tip luxe kit cautérisation </td><td> Bovie médicale </td><td> DEL1 </td><td></td></tr><tr><td> Abbocath-T 14G </td><td> Venisystems </td><td> G713- A01 </td><td> utilisée comme tube à lentille </td></tr><tr><td> 900C Ventilateur Servo </td><td> Maquet </td><td></td><td> utilisée comme ventialtor animale </td></tr><tr><td> Transducteur de pression logique </td><td> Smiths Medical </td><td> MX1960 </td><td></td></tr><tr><td> Sirecust 404 Moniteur </td><td> Siemens </td><td></td><td></td></tr><tr><td> ABL 700 de paillasse Analyzer </td><td> Radiomètre </td><td></td><td> pour la mesure des gaz du sang </td></tr><tr><td> Coussin chauffant </td><td> Effenberger </td><td> 8319 </td><td></td></tr><tr><td> Stade de l&#39;aluminium </td><td> Alfun </td><td> AW7022 </td><td></td></tr><tr><td> Microscope chirurgical OPMI 6-SDFC </td><td> Carl Zeiss </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Microchirurgicale instruments de laboratoire set </td><td> S &amp; T </td><td> 767 </td><td></td></tr><tr><td> Clip navire Biemer </td><td> Diener </td><td> 64.562 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;application de forceps </td><td> Diener </td><td> 64.568 </td><td> pour le clip de navire Biemer </td></tr><tr><td> Rhodamine 6G </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> R4127 </td><td></td></tr><tr><td> Vaseline blanche DAB </td><td> Winthrop </td><td> 2726853 </td><td></td></tr><tr><td> Couvrir verres </td><td></td><td></td><td> 32x32 mm </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Configuration intravitale </td></tr><tr><td> Zeis Axio Scope A-1 MAT </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 490036 </td><td> microscope à épifluorescence </td></tr><tr><td> 470 nm LED </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 423052 </td><td> source de lumière de fluorescence </td></tr><tr><td> Colibri 2 Système </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 423052 </td><td></td></tr><tr><td> W Plan-Apochromat 20x / 1,0 DIC </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 421452 </td><td> objectif à immersion de l&#39;eau </td></tr><tr><td> AxioCam MRM Rev 3 FireWire </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 426509 </td><td> caméra numérique haute résolution </td></tr><tr><td> Axio LE logiciel de vision </td><td> Carl Zeiss ® </td><td> 410130 </td><td> utiliser pour l&#39;analyse hors-ligne </td></tr></tbody></table>

en temps réel d&#39;imagerie numérique de leucocytes-endothélial interaction dans l&#39;ischémie-reperfusion (iri) du muscle cremaster rat

Real-time Digital Imaging of Leukocyte-endothelial Interaction in Ischemia-reperfusion Injury (IRI) of the Rat Cremaster Muscle

D&#39;ischémie-reperfusion (IRI) a été impliqué dans un large éventail de conditions pathologiques telles que l&#39;accident vasculaire cérébral, infarctus du myocarde, l&#39;ischémie intestinale ainsi que suite à la greffe et de la chirurgie cardio-vasculaire. Une reperfusion des tissus ischémiques précédemment, si elle est indispensable pour la prévention de l&#39;irréversible lésion des tissus, provoque une inflammation excessive du tissu affecté. Adjacent à la production d&#39;espèces réactives de l&#39;oxygène, l&#39;activation du système du complément et augmentation de la perméabilité microvasculaire, l&#39;activation des leucocytes est l&#39;un des principaux acteurs dans la cascade pathologique de la lésion tissulaire inflammatoire lors de la reperfusion. 2, 3 l&#39;activation des leucocytes est un processus en plusieurs étapes consistant du matériel, l&#39;adhésion ferme et la transmigration et est médiée par une interaction complexe entre les molécules d&#39;adhérence en réponse à chimiotactiques tels que les facteurs du complément, des chimiokines, ou facteur d&#39;activation plaquettaire 4. &lt;p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Bien roulement des leucocytes dans veinules post-capillaires est principalement médiée par l&#39;interaction des sélectines 5 avec leurs ligands contre, l&#39;adhérence ferme des leucocytes à l&#39;endothélium est la sélectine-contrôlé via une liaison à des molécules d&#39;adhésion intercellulaire (ICAM) et vasculaire cellulaires molécules d&#39;adhésion (VCAM). 6, 7 Étalon-or pour la observation in vivo de leucocytes-endothélium interaction est la technique de microscopie intravitale, décrite pour la première en 1968 8. Bien que différents modèles de l&#39;IRI (ischémie-reperfusion) ont été décrits pour différents organes, 9-12 seulement quelques-uns sont adaptés à la visualisation directe de recrutement des leucocytes dans le lit microvasculaire sur un niveau élevé de qualité de l&#39;image 8. Nous avons ici de promouvoir le numérique microscopie intravitale épifluorescence de la veinule postcapillaire dans la microcirculation crémastériendu rat 13, comme une méthode pratique pour analyser qualitativement et quantitativement le recrutement des leucocytes pour l&#39;IRI-recherche dans le tissu musculaire strié et de fournir un manuel détaillé pour la réalisation de la technique. Nous illustrons les pièges courants et fournir des conseils utiles qui devraient permettre au lecteur de vraiment apprécier, et effectuer en toute sécurité la méthode. Dans une étape par étape le protocole que nous dépeignent la façon de commencer avec une anesthésie respiration contrôlée sous surveillance suffisante pour maintenir fermement l&#39;animal anesthésié pendant de longues périodes de temps. Nous décrivons ensuite la préparation crémastérien comme une feuille plate et mince pour la résolution optique exceptionnelle et de fournir un protocole pour l&#39;imagerie des leucocytes dans l&#39;IRI qui a été bien établi dans nos laboratoires.

Numérique intravitale microscopie à épifluorescence des veinules post-capillaires de la microcirculation crémastérien est une méthode pratique pour obtenir un aperçu de leucocytes-endothélial interaction<em&gt; In vivo</em&gt; En cas d&#39;ischémie-reperfusion (IRI) du tissu musculaire strié. Nous avons ici de fournir un protocole détaillé pour effectuer en toute sécurité de la technique et de discuter de ses applications et ses limites.

En temps réel d&#39;imagerie numérique de leucocytes-endothélial interaction dans l&#39;ischémie-reperfusion (IRI) du muscle Cremaster Rat

L'ischémie-reperfusion (IR) est impliquée dans un grand nombre de conditions pathologiques telles que l'accident vasculaire cérébral, l'infarctus du myocarde, ...

La microscopie intravitale de la microcirculation du tissu matriciel CRE est une méthode pratique pour étudier l'ischémie et les lésions de reperfusion du tissu musculaire strié. Dans un protocole étape par étape, nous montrons comment débuter une anesthésie contrôlée par la respiration, sous surveillance adéquate par canulation artérielle, afin de maintenir l'animal profondément anesthésié pendant de longues périodes. Nous illustrons la technique de canulation de la veine jugulaire, puis décrivons la préparation du tissu matriciel CRE sous forme d'une fine lame plane, offrant une excellente résolution optique.Nous fournissons un protocole d'imagerie des leucocytes dans la lésion de perfusion ischémique qui est bien établi dans nos laboratoires. Ce modèle peut être utilisé pour analyser l'activation des leucocytes lors d'une ischémie. Recherche sur la lésion de reperfusion.La lésion de reperfusion est impliquée dans un large éventail de conditions pathologiques, telles que l'infarctus du myocarde, l'ischémie intestinale, ainsi que suite à une transplantation et à une chirurgie cardiovasculaire. L'hyperperfusion d'un tissu précédemment ischémique, bien qu'essentielle pour prévenir u

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Nous rapportons ici une technique expérimentale de la microscopie de fluorescence intravitale de visualiser hétérotypiques plaquettes neutrophiles interactions sur l'endothélium activé lors de l'inflammation vasculaire et la formation de thrombus chez des souris vivantes. Cette technologie microscopique seront très utiles pour étudier le mécanisme moléculaire de la maladie vasculaire et de tester des agents pharmacologiques dans des conditions physiopathologiques.

Imagerie en temps réel des hétérotypique plaquettes neutrophiles interactions sur l&#39;endothélium activé lors de l&#39;inflammation vasculaire et la formation de thrombus chez des souris vivantes

Microscopie intravitale de la microcirculation souris crémaster M. offre un service unique et bien normalisé modèle in vivo pour l'analyse de la moelle osseuse migration de cellules souches périphériques.

Microscopie intravitale de la microcirculation dans le muscle de souris Cremaster pour l&#39;analyse des souches périphériques migration cellulaire

Nous détaillons un protocole pour surveiller le comportement des neutrophiles et des monocytes dans les veines mésentériques à l’état d’équilibre et dans des conditions inflammatoires en utilisant la microscopie confocale intravitale sur des souris anesthésiées.

Imagerie neutrophiles et des monocytes dans les veines mésentérique par Microscopie intravitale sur des souris anesthésiées en temps réel

Cette étude démontre la préparation chirurgicale du muscle crémaster du rat pour la visualisation de la couche acellulaire in vivo. Des facteurs considérables affectant la précision de la mesure de la largeur de la couche acellulaire sont discutés dans cette étude.

Visualisation et quantification de la couche acellulaire en artérioles du muscle Cremaster Rat

Ce protocole décrit l'induction d'un modèle d'ischémie-reperfusion (IR) sur la peau de l'oreille de la souris utilisant un aimant de serrage. En utilisant un modèle d'imagerie intravitale sur mesure, nous étudions dans les réponses inflammatoires in vivo post-reperfusion. La raison derrière le développement de cette technique est d'étendre la compréhension de la façon dont les leucocytes réagissent aux blessures IR de la peau.

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Ici, nous montrons comment effectuer la microscopie intravitale sur les venules post-capillaires du muscle de cremaster de souris. Communément appliqués à différents modèles d’inflammation et de septicémie, en particulier ceux induits par les chimiothérapeutiques et les cytokines, nous soulignons sa pertinence dans l’étude des muscolopathies impliquant l’infiltration musculaire exagérée de leucocyte.

Infiltration de Leukocyte de Cremaster Muscle chez les souris évaluées par microscopie intravitale

Les lésions d’ischémie-reperfusion rénale sont associées à une morbidité et une mortalité élevées chez les patients hospitalisés. Ici, nous présentons un modèle murin simple et efficace de lésion unilatérale d’ischémie rénale-reperfusion et fournissons un aperçu séquentiel des changements pathologiques représentatifs observés dans le rein.

Un modèle murin efficace de lésion unilatérale d’ischémie rénale-reperfusion

Le recrutement des leucocytes et des plaquettes constitue un composant essentiel nécessaire à la croissance efficace des artères collatérales au cours de l’artériogenèse. La microscopie multiphotonique est un outil efficace pour suivre la dynamique cellulaire avec une résolution spatio-temporelle élevée in vivo et moins photo-toxicité pour étudier le recrutement et l’extravasation des leucocytes au cours de l’artériogenèse.

Imagerie intravitale multiphotonique pour la surveillance du recrutement leucocytaire au cours de l’artériogenèse dans un modèle murin de membre postérieur

Le présent protocole décrit un modèle unique et cliniquement pertinent de maladie artérielle périphérique qui combine l’électrocoagulation de l’artère fémorale et des veines avec l’administration d’un inhibiteur de l’oxyde nitrique synthase pour induire la gangrène des membres postérieurs chez les souris FVB. La perfusion intracardiaque DiI est ensuite utilisée pour l’imagerie tridimensionnelle à haute résolution du système vasculaire du coussinet plantaire.

Imagerie tridimensionnelle haute résolution de la vascularisation du repose-pieds dans un modèle murin de gangrène postérieure

Ce protocole présente une méthode pour induire une lésion d’ischémie-reperfusion mésentérique et visualiser les pièges extracellulaires neutrophiles (TNE) dans les veinules mésentériques à l’aide de la microscopie intravitale. Le flux sanguin dans l’artère mésentérique supérieure a été limité pendant 1 h, suivi d’une reperfusion, permettant une quantification directe de l’adhésion leucocytaire et de la NETose.

Visualisation de pièges extracellulaires de neutrophiles dans les veinules mésentériques après une lésion d’ischémie-reperfusion mésentérique par microscopie intravitale

Un système d’imagerie laser à contraste de tapets a été utilisé pour surveiller les changements du flux sanguin microvasculaire rénal lors de l’ischémie rénale unilatérale après la résection du rein droit chez la souris.

Perfusion microvasculaire surveillée par imagerie laser à contraste de speckles lors d’une lésion ischémie-rénale de réperfusion chez la souris

Découvrez la microscopie intravivante pour étudier les interactions leucocyte-endothélium lors de l'ischémie-reperfusion dans le muscle crémastère du rat. Cette méthode permet d'analyser l'activation des leucocytes en temps réel.

En temps réel dimagerie numérique de leucocytes-endothélial interaction dans lischémie-reperfusion (IRI) du muscle Cremaster Rat (Vidéo) | JoVE Journal

En temps réel d'imagerie numérique de leucocytes-endothélial interaction dans l'ischémie-reperfusion (IRI) du muscle Cremaster Rat

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