Name: Évaluation ex vivo de la contractilité, fatigabilité et isolées du Alternans muscles squelettiques (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-01T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 2 s
Description: Apprenez à mesurer la contractilité, la fatigabilité et l'alternans des muscles squelettiques isolés chez la souris. Cette méthode ex vivo par stimulation de champ évalue les propriétés intrinsèques du muscle.

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<li>Ringer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Further+experiments+regarding+the+influence+of+small+quantities+of+lime%2C+and+other+salts+on+muscular+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Further experiments regarding the influence of small quantities of lime, and other salts on muscular tissue.</a> J. Physiol. 7, 291-308 Forthcoming.</li>
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<li>Ringer, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regarding+the+action+of+lime%2C+potassium+and+sodium+salts+on+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Regarding the action of lime, potassium and sodium salts on skeletal muscle.</a> J. Physiol. 8, 20-24 (1887).</li>
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<li>Smith, M. A., Reid, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Redox+modulation+of+contractile+function+in+respiratory+and+limb+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Respir+Physiol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Redox modulation of contractile function in respiratory and limb skeletal muscle.</a> Respir Physiol Neurobiol. 151, 229-241 (2006).</li>
<li>Bagni, M. A., Cecchi, G., Colomo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myofilament+spacing+and+force+generation+in+intact+frog+muscle+fibres%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Myofilament spacing and force generation in intact frog muscle fibres.</a> J. Physiol. 430, 61-75 (1990).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

Mesure de la force contractile et la fatigabilité est important pour l&#39;évaluation globale de la fonction du muscle squelettique. Le but principal de cet essai est d&#39;identifier les changements dans la force musculaire et la fatigue engendrée par les propriétés sous certaines conditions pathologiques, comme la sarcopénie et la fatigue musculaire, et de tester l&#39;effet de la drogue / réactifs sur la contractilité musculaire. Puisque la force musculaire est étroitement liée avec intracellulaire Ca 2 +,...

Attacher les muscles du squelette à os du squelette et de générer des forces de contraction sous le contrôle du système nerveux central. Couplage excitation-contraction (CEC) se réfère au processus de conversion d&#39;un stimulus électrique à une réponse mécanique. Ca 2 + signalisation est une composante essentielle de la fonction contractile dans le muscle squelettique. Efficace de mobilisation de Ca 2 + du réticulum sarcoplasmique (SR) est une composante importante de la CPE en 1, 2 cellules musculaires, et les variations de Ca 2 + intracellulaire de signalisation sous-tendent la dysfonction contractile correspondant à un certain nombre de 3-5 maladies musculaires. Une évaluation correcte de la contractilité musculaire est essentiel et complémentaire à Ca 2 + imagerie et d&#39;autres analyses afin de mieux comprendre en fonction du muscle squelettique, et pas seulement au niveau contractile, mais aussi au niveau cinétique. La force et la vitesse peuvent également être obtenus à informer la propriété importante d&#39;la force musculaire et l&#39;état du processus des CEC dans différentes conditions physiologiques et physiopathologiques. Ce champ fécond de la recherche a une histoire très riche et de nombreuses théories de la contraction musculaire est apparu plus de deux millénaires 6. Recherche sur les muscles moderne commence probablement en 1674-1682 avec l&#39;observation microscopique des stries transversales et des myofibrilles dans les fibres musculaires par Leeuwenhoek 6. Près d&#39;un siècle plus tard, Luigi Galvani observer que les contrats de muscle de grenouille vigoureusement quand le nerf est touché avec un scalpel lors d&#39;une décharge d&#39;étincelles d&#39;une machine distante électrique 7-9. Contraction pourrait également être produite en connectant le nerf au muscle jambe par un conducteur métallique. Les détails du mécanisme de signalisation électrique complexe préconisées par Galvani ont finalement été formulée par Hodgkin, Huxley et Katz dans leur fameuse équation 10, 11, qui est devenu le fondement de l&#39;électrophysiologie. Les observations remarquables de Ringer sur les effets de Ca 2 + extracellulaire sur la contractilité du cœur et les muscles squelettiques de grenouille 12-15 représentent la première étape importante dans la reconnaissance de Ca 2 + comme un régulateur clé de 16 contractilité du muscle, 17. A partir des années 1980 à nos jours un afflux de découvertes dans le domaine de la contractilité du muscle a été réalisé grâce à l&#39;introduction de la contractilité musculaire et fatigabilité protocoles dans les muscles squelettiques murines 18. Jones et Edwards ont été les premiers à suggérer que la fatigue de basse fréquence intermittente (induite par l&#39;exercice de réduction des effectifs) 19 a été associée à des changements dans la machinerie ECC et non l&#39;appareil contractile. Dans la fin des années 1980 et au début des années 1990, Kolkeck et al 20, Kolbeck et Nosek 21, et Reid 22 ont été en utilisant le muscle du diaphragme à partir des modèles de rongeurs pour étudier les effets de la théophylline, cortiosterone, et des radicaux libres sur la contractilité du muscle squelettique, tandis que Brooks et Faulkner ont été les premiers à faire rapport sur ​​les mesures de force répétées et des mesures de puissance en rapide et lente des muscles de souris 22. En outre, Lannegren, Westerblad, Agneau, et Westerblad ont été les premiers à relier directement la contractilité ex vivo avec Ca 2 + intracellulaire réglementation et a commencé à s&#39;interroger sur le rôle de l&#39;acidose dans 23 la fatigue musculaire, 24. Nos laboratoires ont contribué de manière significative depuis le début des années 2000 vers la compréhension de nouveaux gènes avec modulateur et de la réglementation sur le muscle ECC avec des rôles critiques dans la contractilité des muscles, fatigabilité, et le vieillissement en utilisant une combinaison d&#39;études sur les souris intactes contractilité musculaire, concentration intracellulaire de Ca 2 Surveillance + dans fibres musculaires intactes et sans peau et de génétique moléculaire des manipulations 3-5, 25-29. Ici, nous avons détaillé le protocole expérimental de mesure de la contractilité du muscle soléaire murins isolés et extenseur commun des orteils (EDL) muscles, qui correspondent à une lente surtout-oxydant (de type I et des fibres musculaires IIa) et surtout un muscle rapide glyocolytic (type IIb et IIx fibres musculaires) ayant des propriétés contractiles. Dans ce protocole, intactes de muscle-tendon complexes ont été isolés et baigné dans un système ADI PowerLab Radnotti chambre alimentée en oxygène pur ou un mélange d&#39;oxygène (95%) et de CO 2 (5%). Forces contractiles ont été générés par des stimulations électriques provenant d&#39;un stimulateur Grass et détectés à l&#39;aide d&#39;un capteur de force qui a été intégré à un système ADI PowerLab/400, permettant la personnalisation des routines macro pour contrôler l&#39;acquisition, la collecte, la numérisation et le stockage des données. Cette configuration permet de mesurer la force musculaire, la force musculaire, ainsi que la relation force fonction de la fréquence, de la fatigue musculaire, la récupération de la fatigue musculaire, la vitesse et l&#39;ensemble des propriétés cinétiques de la contraction musculaire. En outre, les effets des drogues sur la contraction musculaire peut être contrôlé grâce à ces expériences. </p&gt; Avantages de cette méthode réside dans l&#39;élimination des composants neuronaux et vasculaires loin du muscle squelettique, ce qui permet une évaluation directe des propriétés intrinsèques de contracter le muscle. En outre, les anciens tests in vivo contractilité permettre la manipulation du milieu extracellulaire qui entoure les muscles isolés, ce qui permet l&#39;utilisation de manipulations pharmacologiques des différents canaux ioniques et des transporteurs de perméation afin de définir leurs rôles physiologiques de la fonction du muscle squelettique. Ce système ex vivo nous a permis de découvrir récemment un comportement alternane distincte dans certaines préparations de muscle mutant, qui étaient liées aux altérée Ca 2 + intracellulaire propriétés de manipulation 4. Alternance sont définis comme des épisodes d&#39;éclatement fluctuation de la force contractile durant la phase de déclin du profil fatigant. Lors de ces événements forces contractiles augmenter momentanément au-dessus de son niveau précédent de la force du cours de la stimulation pénible, peut-être parce soit plus de Ca 2 + est relâché ou que la machinerie contractile est devenue plus sensible à Ca 2 + 30. Le traitement de l&#39;acide cyclopiazonique (CPA), un bloqueur réversible de sarcoplasmique de calcium du réticulum endoplasmique-ATPase (SERCA), la caféine, un agoniste de la ryanodine canal (RyR) et répété fatigue stimulations peuvent tous provoquer une alternance mécanique 4, ce qui suggère que l&#39;alternance sont directement liés à modulation du processus de couplage CE. Démonstration de la méthode pour induire et enregistrer alternance mécaniques dans la contractilité in vitro dans la configuration sert d&#39;exemple pour montrer les paramètres expérimentaux diversifiés qui pourraient être obtenus avec ce système ou d&#39;autres similaires, fondées sur des intérêts individuels de recherche. Cette méthode peut être intéressante pour les chercheurs qui étudient la physiologie musculaire. Configuration similaire peut également être utilisé pour des complexes isolés muscle-tendon/ligament squelettiques provenant d&#39;autresemplacements anatomiques, ainsi que pour les fibres individuelles et des bandes de muscle.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> 2-APB </td><td> Tocris </td><td> 1224 </td><td> Bloqueur d&#39;un certain nombre de Ca 2 + canaux d&#39;entrée, y compris SOC et TRP etc </td></tr><tr><td> SKF96365 </td><td> Sigma </td><td> SKF-96365 </td><td> Bloqueur d&#39;un certain nombre de canaux Ca 2 +, y compris l&#39;entrée SOC et médiée par les récepteurs d&#39;entrée de Ca 2 +, etc </td></tr><tr><td> BTP-2 </td><td> Millipore </td><td> 203890-5MG </td><td> Relativement spécifique bloquant SOC </td></tr><tr><td> CPA </td><td> Sigma </td><td> C1530 </td><td> Réversible bloqueur SERCA </td></tr><tr><td> caféine </td><td> Sigma </td><td> C0750 </td><td> Rapide agoniste RyR d&#39;action </td></tr><tr><td> Radnoti Quatre tissus Unité bain de systèmes d&#39;organes </td><td> Radnoti </td><td> 159920 </td><td></td></tr><tr><td> Soutien tissus Combinaison / électrode de stimulation </td><td> Radnoti </td><td> 160151 </td><td> Vertical Type de Zig Zag avec le soutien des tissus </td></tr><tr><td> Quad Pont Amp </td><td> ADInstruments </td><td> FE224 </td><td></td></tr><tr><td> PowerLab/400 </td><td> ADInstruments </td><td></td><td> Ce produit n&#39;est plus disponible. Choisir une autre version du système d&#39;acquisition de données. </td></tr><tr><td> Capteurs de force (5 mg - 25 g) </td><td> ADInstruments </td><td> MLT0201/RAD </td><td></td></tr><tr><td> Tableau v4.02 </td><td> ADInstruments </td&gt; <td></td><td> LabChart 7.3 est la dernière version du logiciel graphique. </td></tr><tr><td> S8800 double impulsion numérique Stimulator </td><td> TECHNOLOGIES GRASS </td><td></td><td> Ce produit n&#39;est plus disponible. S88X double sortie impulsion carrée Stimulator est un nouveau stimulateur. </td></tr><tr><td> Unité RF transformateur d&#39;isolement </td><td> TECHNOLOGIES GRASS </td><td> Modèle SIU5 </td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Évaluation ex vivo de la contractilité, fatigabilité et isolées du alternans muscles squelettiques

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Décrit ici est une méthode de mesure de la contractilité des muscles squelettiques isolés. Des paramètres tels que la force musculaire, la force musculaire, de la cinétique contractile, la fatigabilité, la fatigue et la récupération après peuvent être obtenues à évaluer des aspects spécifiques du couplage excitation-contraction (ECC) de processus tels que l&#39;excitabilité, contractile machines et Ca 2 + capacité de manutention. Cette méthode supprime l&#39;innervation et de sang et se concentre sur le muscle squelettique isolé lui-même. Nous avons l&#39;habitude d&#39;utiliser cette méthode pour identifier les composantes génétiques qui altèrent la propriété contractile du muscle squelettique si moduler Ca 2 + voies de signalisation. Ici, nous décrivons un phénotype musculaire squelettique nouvellement identifiés, à savoir l&#39;alternance mécanique, comme par exemple des informations diverses et riche qui peut être obtenu en utilisant le test in vitro avec la contractilité du muscle. Combinaison de ce test avec des dosages de cellules simples, des approches génétiques et biochimiquestests strY peut fournir des indications importantes sur les mécanismes de ECC dans le muscle squelettique.

Nous décrivons une méthode pour mesurer directement la force musculaire, la force musculaire, de la cinétique contractile et la fatigabilité des muscles squelettiques isolés dans un<em&gt; In vitro</em&gt; Système en utilisant une stimulation de champ. Des informations précieuses sur Ca<sup&gt; 2 +</sup&gt; Propriétés de manipulation et de la machinerie contractile du muscle peuvent être obtenues en utilisant différents protocoles de stimulation.

Évaluation ex vivo de la contractilité, fatigabilité et isolées du Alternans muscles squelettiques

Une méthode permettant de mesurer la contractilité de muscles squelettiques isolés est décrite ici. Des paramètres tels que la force musculaire, la puissance musculaire, la cinétique contractile, ...

L'objectif général de cette procédure est d'isoler des muscles sains et intacts afin d'étudier leur fonction contractile in vitro. Cela est réalisé en premier lieu en isolant les muscles extenseur digitorum long ou EDL et soléaire ou soléus de la souris. La deuxième étape consiste à lier les ligaments et tendons des muscles EDL et soléaire à l'aide d'un fil chirurgical.Ensuite, monter les muscles isolés sur le transducteur de force et dans la chambre de contraction. La dernière étape consiste à stimuler le muscle par des impulsions électriques de champ afin d'induire des contractions. En fin de compte, les forces résultantes sont transmises au transducteur de force et enregistrées ; diverses manipulations physiologiques et pharmacologiques peuvent alors être effectuées afin de comparer leurs effets sur la contractilité musculaire.Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes d'évaluation de la fonction musculaire, telles que la mesure de la contractilité in situ, le traitement des performances mâles, etc., est qu'elle élimine les composants neuronaux et vasculaires du muscle squelettique, permettant ainsi une évaluation directe des propriétés intrinsèques du muscle contractile. Généralement, les personnes novices dans cette méthode éprouvent des difficultés, car la dissection de muscles inspiratoires intacts exige une dextérité et une patience particulières. Cette procédure sera réalisée d'une part par une technicienne de mon laboratoire et d'autre part par Keyhole Park, chercheur postdoctoral dans le laboratoire du Dr. Jma.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car la dissection musculaire et le montage sur la chambre contractile sont des manipulations difficiles à réaliser. Ainsi, cette vidéo permet de comprendre la structure anatomique du muscle et d'apprécier l'échelle requise pour le montage du muscle isolé. Dans cette procédure, sacrifiez une souris de type sauvage C 57 black six, ou un modèle murin de maladie, par dislocation cervicale, puis placez-la en position latérale.Pour disséquer le muscle EDL, effectuez une incision cutanée superficielle. Ouvrez la fascia située entre le tibia antérieur et le groupe musculaire postérieur. Repérez l'origine proximale où le ligament est attaché au condyle latéral du tibia ainsi qu'à la partie supérieure, correspondant aux trois quarts de la surface fibulaire antérieure.Ensuite, coupez le ligament avec des ciseaux ophtalmiques délicats aussi distamment que possible par rapport au muscle afin de libérer l'origine proximale du muscle EDL. Après cela, tenez le ligament avec une pince effilée et tirez lentement pour libérer le muscle EDL. Il peut être nécessaire de sectionner une partie du paracétium entourant le muscle EDL ainsi que d'autres muscles situés autour du muscle EDL.Cette étape doit être effectuée délicatement afin d'éviter d'endommager le muscle EDL. Ensuite, au niveau de la région d'insertion où les quatre tendons distaux s'insèrent dans les phalanges moyennes et distales des doigts deux à cinq, sectioner les tendons le plus loin possible des muscles. Transférer le muscle EDL isolé dans une boîte de dissection contenant une solution de Tyrode isotonique sans calcium.Le muscle EDL est un muscle rapide de type glycolytique, de couleur rose pâle, d'une longueur d'environ 10 à 13 millimètres et d'un poids de huit à 11 milligrammes. Ensuite, faites un nœud chirurgical bien serré aux deux extrémités du muscle EDL isolé à l'aide d'un fil de suture 6/0, le plus éloigné possible du muscle et légèrement au-dessus du point médian en longueur du ligament ou du tendon. Puis transférez le muscle EDL dans la chambre du bain tissulaire saturé en oxygène.Monter le muscle dans la rainure d'échantillon du transducteur de force et sur le crochet fixe au bas de la chambre de bain. Répéter le processus d'isolement et de montage pour le muscle EDL de l'autre jambe afin de disséquer le muscle soléaire situé à la face postéro-latérale de la jambe. Déplacer le muscle gastrocnémien qui le recouvre habituellement.Le muscle soléaire est un muscle oxydatif lent de couleur rouge foncé, d'environ un millimètre plus court que le muscle EDL, mais pesant légèrement plus que ce dernier. À l'origine proximale, sectionner le ligament qui relie la moitié proximale de la partie postérieure du tibia le long de la ligne du soléaire et le tiers proximal de la fibula postérieure.Ensuite, au niveau de l'insertion distale, sectionez le tendon d'Achille qui s'insère dans le calcanéum postérieur. Dégagez soigneusement le muscle soléaire par la suite. Montez correctement le muscle soléaire dans la chambre de bain.Une fois les muscles montés dans des chambres individuelles de bain tissulaire, commencez l'enregistrement des données. N'oubliez pas de réinitialiser la ligne de base du transducteur de force. Cela facilitera l'observation des modifications de la ligne de base et simplifiera la comparaison des contractions musculaires entre différentes conditions expérimentales.Ensuite, stimulez les muscles isolés à l'aide d'impulsions en onde carrée. Utilisez des courants électriques compris entre 60 et 300 milliampères, des durées individuelles d'impulsions en onde carrée comprises entre 0,3 et 1 milliseconde, et des durées de trains de stimulation de 350, 500 ou 1000 millisecondes. L'étape suivante consiste à choisir une fréquence de stimulation capable de produire une force tétrique maximale lorsque le muscle isolé est étiré à sa longueur optimale à température ambiante.Cette fréquence est généralement d'environ 100 hertz pour le muscle EDL et de 60 hertz. Pour le muscle soleus, étirez lentement le muscle et attendez 30 secondes, puis stimulez-le à 100 hertz ou à 60 hertz. Ensuite, étirez-le à nouveau.Attendre encore 30 secondes, puis stimuler à nouveau lors de l'étirement. Si la force n'augmente plus, cela signifie généralement que la force maximale a été atteinte. Pendant ce temps, une diminution de la force observée au cours de cycles répétés d'étirement et de stimulation suggère que les muscles ont été trop étirés. Dans cette situation, relâcher le muscle au niveau d'étirement précédent et stimuler à nouveau le muscle jusqu'à ce que la force maximale soit observée.Obtenez maintenant la relation force en fonction de la fréquence. Stimulez le muscle avec des fréquences allant de un à 140 hertz, par incréments de cinq à 10 hertz et avec une périodicité de 30 à 60 secondes. Lorsque les expériences sont réalisées à 25 degrés Celsius, et lorsque les expériences sont effectuées à 37 degrés Celsius, étendez la relation FF à des fréquences plus élevées, allant jusqu'à 300 hertz pour le muscle diaphragmatique, de 180 à 200 hertz pour le muscle soléaire et de 220 à 250 hertz pour le muscle EDL.Ensuite, en comparant la quantité de force générée par chaque fréquence de stimulation, identifier la fréquence qui produit une force tétra­nique maximale et environ la moitié de la force tétra­nique maximale. La valeur Tmax fournit des informations importantes sur la modulation du mécanisme contractile. Tandis que la moitié de Tmax fournit des informations plus pertinentes concernant la régulation calcique et le processus de couplage excitation-contraction (ECC).Le muscle est ensuite stimulé à la fréquence tmax à intervalles d'une minute pendant 30 minutes, un processus appelé équilibration permettant d'étudier la contribution du réticulum sarcoplasmique. La libération de calcium contribuant à la contractilité musculaire après l'équilibration fatigue les muscles en appliquant une stimulation à la moitié de Tmax à intervalles de deux secondes pendant cinq minutes. Ici, nous avons utilisé une durée d'impulsion de 500 millisecondes, ce qui correspond à un cycle de travail de 25 %. Puis, le muscle est récupéré à la moitié de Tmax à intervalles d'une minute.Pendant 30 minutes ou jusqu'à ce que la force soit stable, un protocole supplémentaire d'épuisement peut être effectué. L'épuisement réalisé à Tmax est désormais considéré comme un test précis de l'état de la machinerie contractile. Répétez ensuite les procédures d'obtention de la FF afin d'observer les différences phénotypiques entre différentes souches, modèles de maladie ou traitements médicamenteux.En analysant le FF avant et après la fatigue afin d'évaluer la contribution de l'entrée de calcium extracellulaire à la contractilité musculaire, on peut remplacer la solution de bain par une solution ne contenant pas de calcium, mais 0,1 millimolaire d'EGTA. Alternativement, différents bloqueurs des canaux activés par le stockage peuvent être ajoutés à la solution de bain. À la fin de l'expérience, mesurer la longueur expérimentale des muscles, puis les peser individuellement à l'aide d'une balance analytique, les congeler rapidement dans l'azote liquide et les conserver à moins 80 degrés Celsius pour des analyses biochimiques.Étalonnez maintenant le transducteur de force. Convertissez la force musculaire enregistrée en millivolts en gramme-force en fonction des résultats d'étalonnage. Normalisez-la ensuite à la surface transversale physiologique.Cette figure montre les forces contractiles induites par cinq hertz, 20 hertz et la force tétrique maximale ; voici un tracé de la force contractile d'un muscle endommagé. Il s'agit d'un exemple représentatif montrant les contractions individuelles d'une relation force-fréquence dans le muscle EDL et la courbe tracée résultant de la ff. Il s'agit d'un profil typique de fatigue à déclin rapide du muscle EDL et d'un profil de fatigue à déclin lent du muscle soléaire.Une stimulation fatigante entraîne l'apparition d'alternances mécaniques dans un muscle de type « trick », un muscle invalidé présentant des propriétés altérées de gestion du calcium. Une fois maîtrisée, cette technique peut être réalisée en deux heures. Si elle est correctement exécutée, l'expérience entière durera davantage et dépendra du nombre d'interventions effectuées. Lorsque vous réalisez cette procédure, il est très important d'isoler et de monter le muscle DL aussi rapidement que possible, car l'environnement in vitro pauvre en oxygène pourrait causer des dommages irréversibles aux fibres musculaires rapides.Après cette procédure, des analyses géniques, des immunoblottings, des études d'immunohistochimie et des analyses structurales peuvent être réalisées sur les mêmes muscles expérimentaux afin de répondre à des questions supplémentaires. Par exemple, le niveau d'expression et la localisation d'une protéine particulière ou de composants des protéines musculaires régulant la contractilité ou la signalisation calcique, ainsi que les altérations morphologiques ou ultrastructurales des muscles résultant de conditions spécifiques après leur développement. Cette technique a ouvert la voie aux chercheurs dans le domaine de la physiologie musculaire pour explorer les défauts génétiques affectant la fonction du muscle squelettique dans divers modèles, y compris les souris, les rats et les hamsters.

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