Name: Imagerie gliome Initiation In Vivo Grâce à une poli et renforcé mince crâne fenêtre crânienne (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-11-20T12:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 44 s
Description: Découvrez l'imagerie de l'initiation des gliomes in vivo par injection de cellules de glioblastome marquées au GFP chez la souris. Cette méthode utilise une fenêtre crânienne mince polie et renforcée pour visualiser les interactions entre cellules tumorales et endothéliales vasculaires.

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Ce travail est soutenu par le Grant Jackson Laboratory Cancer Center et The Pilot Fondation du cancer du Maine.

1. Protocole <ol><li> Anesthésier la souris avec la kétamine et de xylazine à une dose de 0,1 mg de kétamine et de xylazine 0,01 mg par 1 g de poids corporel. Carprofène (0,005 mg par 1 g de poids corporel) est utilisé pour l&#39;analgésie et est administré avant l&#39;opération. </li><li> Tous les outils chirurgicaux, y compris la mèche dentaire, sont stérilisés à la vapeur dans un autoclave. Si chirurgies lots doivent être effectués, les pointes des instruments chirurgicaux doivent être stérilisés avec un stérilisateur à billes de verre (Fine Outils scientifiques FST 250) avant chaque intervention chirurgicale ultérieure. </li><li> Une fois que la souris a atteint un plan chirurgical de l&#39;anesthésie, évaluée par l&#39;absence d&#39;une réponse à un pincement de l&#39;orteil, il est placé sur un tampon de coton qui est ensuite placé sur un coussin chauffant pour maintenir une température corporelle de 37 ° C ~ La profondeur de l&#39;anesthésie est contrôlé fréquemment pendant la chirurgie. </li><li> Fourrure est retiré de la tête dorsal dans une zone à peu près triangulaire ~ 3 mm caudal dans les narines et s&#39;étendant caudalement à la CErvical vertèbres. Pommade ophtalmique est appliqué sur les yeux pour les protéger de la déshydratation et l&#39;irritation. </li><li> La souris est placée dans décubitus ventral et la peau est désinfectée avec de l&#39;iode chirurgical, de l&#39;éthanol 70%, et des tampons stériles. Un lambeau 0,8 x 1,0 cm de peau qui recouvre la face dorsale de l&#39;os frontal et pariétal du crâne est retiré à l&#39;aide de ciseaux fins. </li><li> Un analgésique topique, 0,5% de lidocaïne, est appliqué localement sur le périoste et les tissus exposés à la périphérie de la blessure. Le périoste est enlevé en grattant doucement le crâne avec une lame de scalpel, ce qui permettra à la colle cyanoacrylate d&#39;adhérer à l&#39;os. </li><li> La zone corticale d&#39;intérêt est décrite sur le crâne avec un marqueur. La zone d&#39;intérêt ne doit pas être située au-dessus des lignes de suture du crâne, pour éviter d&#39;endommager les gros vaisseaux sous-jacents. </li><li> Une fine couche de colle cyanoacrylate est appliqué sur les bords de la plaie, pour empêcher l&#39;infiltration de fluide sérosanguin, et à l&#39;exception de crânela zone d&#39;intérêt. </li><li> Activé par la lumière de ciment dentaire est utilisé dans notre protocole pour assurer l&#39;étanchéité de la boîte crânienne. Avant l&#39;application du ciment dentaire, tous crâne exposé à l&#39;exception de la zone prévue pour l&#39;éclaircissage est traitée avec des amorces et ensuite avec l&#39;agent de liaison du kit activé par la lumière du ciment dentaire. Une fois l&#39;agent de liaison est séché, le ciment dentaire activé par la lumière est appliquée pour couvrir le crâne. Pour stabiliser la tête de la souris pour la chirurgie et l&#39;imagerie par suite, une solution stérile # 00-90 écrou hexagonal est incorporé dans le ciment dentaire à distance de la zone à être éclaircis. L&#39;utilisation de la lumière activé par du ciment dentaire nous permet de préparer le crâne sans avoir à se précipiter pour terminer la procédure. Une fois la préparation du ciment dentaire sur le crâne est terminée, le ciment dentaire est durcie par la lumière visible. </li><li> Après que le ciment dentaire est durcie, un support de pièce de tête du dispositif de stéréotaxie est monté sur l&#39;écrou hexagonal sur la tête de la souris à l&#39;aide d&#39;une vis # 00-90. </li><li> A drop de la température ambiante, 0,9% de solution saline stérile est appliqué sur la surface du crâne à amincir. À l&#39;aide d&#39;un stéréomicroscope, d&#39;un haut débit de micro-perçage est utilisée pour diluer une zone circulaire de la boîte crânienne (typiquement ~ 4-5 mm de diamètre) au-dessus de la région d&#39;intérêt. Forage et l&#39;application d&#39;une solution saline à la surface forés sont effectuées de façon intermittente au cours de la procédure d&#39;amincissement pour éviter une lésion thermique du tissu sous-jacent cérébrale. Saline absorbe la chaleur et contribue également à adoucir l&#39;os. </li><li> Le crâne souris comprend deux couches minces d&#39;os compact, prenant en sandwich une couche d&#39;épaisseur de l&#39;os spongieux. La couche externe de l&#39;os compact et plus de l&#39;os spongieux sont enlevées à l&#39;aide de la perceuse. </li><li> Après que la majorité de l&#39;os spongieux est supprimé, les cavités restantes dans l&#39;os spongieux peut être vu sous un microscope à dissection, indiquant que le forage se rapproche de la couche d&#39;os compact interne. A ce stade, l&#39;épaisseur du crâne doit toujours être supérieure à 50 um. Crâne éclaircie doit êtrecontinué soigneusement pour obtenir une préparation très mince (~ 20 m) et lisse. </li><li> Une fois l&#39;épaisseur désirée est atteinte du crâne (~ 20 mm), le crâne est d&#39;abord polie à l&#39;aide d&#39;un fouet en silicone sur mesure à la pâte diamantée (6-15 um) pendant environ 10 min. Le polissage de diamants pâte sert à deux fins. Tout d&#39;abord, il amincit davantage le crâne sans appliquer de pression sur le crâne aminci, évitant ainsi les dommages accidentels au tissu cérébral sous-jacent. Deuxièmement, elle sert d&#39;étape de polissage initial pour le crâne amincie avant l&#39;oxyde d&#39;étain fine est utilisée pour le polissage crâne plus loin. </li><li> Après le polissage de diamants pâte, le crâne amincie est polie avec l&#39;oxyde d&#39;étain pendant environ 10 min. Une fois que le crâne est poli, l&#39;oxyde d&#39;étain est rincé loin avec une solution saline jusqu&#39;à ce que le crâne aminci semble propre. </li><li> À cette étape, si la fenêtre crânienne doit être utilisé pour l&#39;imagerie in vivo longitudinale, la surface du crâne mince nettoyé est séché. Une petite goutte de clairecolle cyanoacrylate est appliqué pour sceller la fenêtre crânienne. La couche de colle cyanoacrylate entre le crâne amincie et la lamelle doit être aussi mince que possible. </li><li> Si une injection doit être effectuée après la création d&#39;une fenêtre ports crânienne, à cette étape, une aiguille de seringue de calibre 26 est utilisé pour créer une petite ouverture sur un côté de la lame mince polie-crâne fenêtre. Cette ouverture est utilisée pour l&#39;injection de cellules GBM. </li><li> Une pipette en verre stérile avec une pointe d&#39;ouvrir environ 50 um de diamètre est tiré à l&#39;aide d&#39;un extracteur de pipette. Cette pipette est utilisée pour l&#39;injection de cellules GBM, et est chargée sur un micromanipulateur. La pipette est chargée à un angle de 30 degrés afin que le site d&#39;injection de cellules GBM sera loin du site final d&#39;imagerie. La pointe de la pipette est éliminé sous un microscope à dissection. La suspension de cellules GBM est à chargement frontal dans la pipette par aspiration à l&#39;aide d&#39;une seringue. </li><li> Une fois la pipette d&#39;injection est chargé avec des cellules de glioblastome, la souris est déplacé en arrière sous eMicroscope électronique. La pipette d&#39;injection est abaissé vers la petite ouverture dans la fenêtre crânienne et finalement introduite dans le cerveau à travers l&#39;ouverture à l&#39;aide d&#39;un micromanipulateur. 1 pi d&#39;une suspension de cellules GBM est injecté dans les 100-200 um cerveau de la surface du cerveau (vitesse: 0,1 l / min, durée: 10 min). </li><li> Le crâne est séché, une petite goutte de colle cyanoacrylate transparent est appliqué sur le crâne sec, et un morceau de 3 mm de taille n ° 1 lamelle est collée à la zone de vulnérabilité de la victime et poli. L&#39;espace entre la lamelle et adjacente ciment dentaire est scellé avec de la colle cyanoacrylate. </li><li> Après la chirurgie, la souris est injecté par voie sous cutanée avec 1 ml de solution saline stérile chaude et muni de chauffage d&#39;appoint pour maintenir la température du corps jusqu&#39;à guérison complète de l&#39;anesthésie. </li><li> Pour l&#39;imagerie, les souris sont anesthésiées avec de la kétamine et de xylazine à la dose de 0,1 mg de kétamine et de xylazine 0,01 mg pour 1 g de poids corporel. Les souris sont immobilisés à l&#39;aide d&#39;un cadre stéréotaxique personnaliséesous le microscope. Si répétitif imagerie in vivo est effectuée sur une base quotidienne, isofluorane sera une meilleure option, car les souris présentent des signes de dépendance à l&#39;utilisation répétitive de la kétamine. </li></ol> 2. Les résultats représentatifs Une chirurgie réussie ports fenêtre crânienne permet à la fenêtre crânienne rester à l&#39;écart pendant des semaines ou des mois. La figure 1 montre la vascularisation sous une fenêtre ports crânienne visualisées en utilisant la lumière rétrodiffusée. Ces images vasculaire ont été utilisés comme points de repère pour localiser les mêmes aires cérébrales pour l&#39;imagerie répétitive. Pour visualiser à la fois les cellules endothéliales et les cellules du système vasculaire GBM, nous avons traversé la B6.Cg-Tg (Tek-cre) 1Ywa / J souris, qui marque les cellules endothéliales vasculaires avec le B6.Cg-Gt (ROSA) 26Sor TM9 (CAG-tdTomato ) HZE / J souris et souris générés par les cellules endothéliales vasculaires étiquetés avec la protéine fluorescente rouge tdTomato. Nous avons ensuite effectué la procédure craniotomie sur ces ports kmCE, et injecté GFP cellules marquées GBM dans leur cerveau à travers une petite ouverture sur le côté d&#39;une fenêtre crânienne. Nous avons ensuite effectué in vivo d&#39;imagerie à deux photons longitudinalement sur ​​les souris injectées. La longueur d&#39;onde d&#39;excitation laser a été fixée à 910 nm, ce qui a entraîné à la fois l&#39;excitation de la GFP et tdTomato. Imagerie biphotonique a été réalisée sur un custom-built deux photons microscope à balayage laser avec deux détecteurs pour la capacité de détection simultanée vert / rouge fluorescence. Figure 2 montre un exemple de gliome in vivo de l&#39;initiation à partir de cellules de glioblastome injecté près de la vascularisation. La fenêtre ports crânienne est également un excellent choix pour les maladies chroniques time-lapse imagerie in vivo. La figure 3 montre une coloration GFAP des sections corticales provenant d&#39;une souris sans chirurgie ports, une souris 7 jours suivant la chirurgie ports, et une souris 7 jours après la chirurgie et les ports injection de solution saline. Il est évident à partir des images que la souris sans chirurgie et de la souris avec PoRTS chirurgie n&#39;ont pas gliose, alors que suite à l&#39;injection saline, gliose est observée dans les tissus du cerveau de la souris, en raison de la pénétration et pipeter injection de sérum physiologique dans le cerveau. Ce résultat démontre que la gliose ne se produit pas sous la fenêtre crânienne ports, fournissant une validation indépendante que les ports fenêtre crânienne décrites ici ne conduit pas à la gliose qui est généralement associée à un &quot;crâne ouvert&quot; fenêtre chronique crânienne. La figure 4 montre à haute résolution imagerie des épines dendritiques de la même souris sur le jour de l&#39;intervention (jour 0) et 32 jours après la création de la fenêtre Ports (Jour 32), ce qui démontre que la fenêtre des ports est également un excellent choix pour haute résolution d&#39;imagerie in vivo. <img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig1.jpg" /> Figure 1. Visualisation de la vascularisation sous une fenêtre crâne aminci poli et renforcé crânienne en utilisant la lumière rétrodiffusée. Jours représentent t<html> il certain nombre de jours après la chirurgie, les images ont été prises à partir du jour de l&#39;opération immédiatement après l&#39;achèvement de l&#39;injection de cellules GBM. Barre d&#39;échelle:. 0,5 mm <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig1large.jpg" target="_blank">Cliquez ici pour agrandir la figure</a> . <img alt="Figure 2" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig2.jpg" /> Figure 2. Visualisation des cellules injectées GBM et vasculaire in vivo. Les souris portant à la fois Tek-Cre et ROSA26 CAG-tdTomato ont été utilisées pour l&#39;injection de cellules GBM. Les cellules endothéliales vasculaires ont été marquées avec tdTomato (rouge), et les cellules de glioblastome ont été marquées avec la GFP (green). Les images ont été acquises à partir de 24 heures après l&#39;injection de cellules GBM. Un total de 10-12 champs adjacents de vue ont été prélevés et ont été assemblés côte à côte, avec les cellules identifiées GBM injecté dans le centre du champ total, pour produire les images finales. Jours représentent le nombre de jours après la chirurgie. Barre d&#39;échelle: 100 um.href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig2large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Cliquez ici pour agrandir la figure. <img alt="Figure 3" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig3.jpg" /> Figure 3. Gliose ne se produit pas après une chirurgie ports fenêtre crânienne. Panneaux supérieurs: section coronale du cerveau de la souris sous faible grossissement. Panneau de gauche: une souris sans chirurgie fenêtre crânienne; aucune activation GFAP est observée dans le tissu cérébral. Panneau du milieu: une souris avec une fenêtre crânienne ports généré sur le côté droit du cerveau; aucune activation GFAP est observée dans le tissu cérébral. Panneau de droite: une souris avec une fenêtre crânienne ports et injection de solution saline sur le côté de la fenêtre de ports. Activation GFAP est observé sur le côté de la fenêtre ports, mais pas sur le côté du tissu cérébral intact. Barre d&#39;échelle: 1 mm. Panneau inférieur: plus grande puissance des images des tissus du cerveau dans les zones comme indiqué dans la case blanche des images supérieure du panneau. Barre d&#39;échelle: 100 um. <ahref = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/4201/4201fig3large.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; Cliquez ici pour agrandir la figure. <img alt="Figure 4" src="/files/ftp_upload/4201/4201fig4.jpg" /> Figure 4. Imagerie haute résolution des épines dendritiques de souris Thy-1 YFPH. Les images ont été acquises le jour de la chirurgie ports, et 32 ​​jours après la chirurgie ports. Il est évident à partir des images que la plupart des épines présentent au jour 0 sont clairement visibles 32 jours après la chirurgie ports. Barre d&#39;échelle: 2 um.

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</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

La clé de la réussite d&#39;une fenêtre ports crânienne est l&#39;amincissement et le polissage. Alors que la première éclaircie peut être réalisée rapidement, des précautions doivent être prises pour assurer homogène amincissement du crâne sur une grande surface. En général, nous appliquer une fine couche de solution saline pour le crâne, puis mince du crâne une passe à un moment, de sorte que la solution saline s&#39;évapore peu de temps après la micro-foret a passé au-dessus du crâne une fois. Cela nous permet lentem...

<table border="1"><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td><td> Commentaires (optionnel) </td></tr><tr><td> DMEM/F12 (1:1) avec pyruvate de sodium </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Supplément Sérum Gratuit (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> Glutamax-1 Supplement </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> Solution de pénicilline-streptomycine </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Accutase-Enzyme moyen détachement cellulaire </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 flacons-vent bouchon vert </td><td> SARSTEDT </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;alcool à 70% </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% de polyvidone iodée solution topique </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> La kétamine HCl </td><td> Alimentation Butler santé animale </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Xylazine </td><td> Akorn, Inc </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofène </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Pommade ophtalmique </td><td> Dechra Veterinary Products </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5% chlorhydrate de lidocaïne </td><td> REGENT, Inc </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> Colle cyanoacrylate </td><td> Henkel Corp </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> Ecouvillons stériles </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> Pâte de diamant </td><td> Alimentation Widget </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> L&#39;oxyde d&#39;étain </td><td> LORTONE, Inc </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> Liner Bond 2V </td><td> Kuraray Medical Inc </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> Kuraray Medical Inc </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> Saline </td><td> LAHS JAX </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Couverture en verre </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> Ecrou à six pans </td><td> Petites pièces, Inc </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> Pompe à seringue </td><td> Syringepump.com </td><td> NE-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Système d&#39;imagerie à deux photons </td><td> Construit sur mesure (Tout système commercial seraittravail) </td><td></td><td></td></tr></table>

imagerie gliome initiation<em&gt; in vivo</em&gt; grâce à une poli et renforcé mince crâne fenêtre crânienne

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Le gliome est l&#39;une des formes les plus mortelles de cancer chez l&#39;homme. La thérapie des gliomes la plus efficace à ce jour, la chirurgie suivie de radiothérapie au traitement offre aux patients que des avantages modestes, comme la plupart des patients ne survivent pas plus de cinq ans après le diagnostic en raison d&#39;une rechute de gliome 1,2. La découverte des cellules souches cancéreuses dans les tumeurs cérébrales de l&#39;homme promet d&#39;avoir un impact énorme sur le développement de nouvelles stratégies thérapeutiques pour le gliome 3. Les cellules souches cancéreuses sont définis par leur capacité à la fois à se renouveler et de se différencier, et sont pensés pour être les seules cellules dans une tumeur qui ont la capacité d&#39;initier de nouvelles tumeurs 4. Gliome rechute après une radiothérapie est considéré comme provenant de la résistance des cellules souches de gliomes (CSS) à la thérapie 5-10. In vivo, les CSS sont présentés à résider dans une niche périvasculaire qui est important pour le maintien de cellules souches de leurs caractéristiques telles que 11-14 . Au centre de l&#39;orgation de la niche CGC sont les cellules endothéliales vasculaires 12. Les preuves existantes suggèrent que les CSS et leur interaction avec les cellules endothéliales vasculaires sont importants pour le développement des tumeurs, et d&#39;identifier les CSS et leur interaction avec les cellules endothéliales comme d&#39;importantes cibles thérapeutiques pour les gliomes. La présence de CSS est déterminée expérimentalement par leur capacité à initier de nouvelles tumeurs sur la transplantation orthotopique 15. Cette opération est généralement réalisée par injection d&#39;un nombre spécifique de cellules isolées à partir de GBM tumeurs humaines dans le cerveau de gravement immunodéprimés, souris ou des cellules de glioblastome souris dans le cerveau des souris congéniques d&#39;accueil. Les tests pour la croissance des tumeurs sont ensuite effectuées après le temps suffisant pour permettre CSS entre les cellules de glioblastome injectés pour donner naissance à de nouvelles tumeurs, généralement plusieurs semaines ou mois. Par conséquent, les tests actuels ne permettent pas l&#39;examen de l&#39;important processus pathologique de l&#39;initiation des tumeurs de CSS unique in vivo. Par conséquent, essentiel insights dans les rôles spécifiques des CSS et de leur interaction avec les cellules endothéliales vasculaires dans les premières étapes de l&#39;initiation des tumeurs font défaut. De telles idées sont essentiels pour développer de nouvelles stratégies thérapeutiques pour les gliomes, et aura des répercussions importantes pour la prévention de la rechute de gliome chez les patients. Ici, nous avons adapté les ports procédure de fenêtre crânienne 16 et in vivo microscopie à deux photons pour permettre la visualisation de l&#39;initiation tumorale des cellules de glioblastome injectées dans le cerveau d&#39;une souris vivante. Notre technique permet de préparer le terrain pour les futurs efforts visant à élucider les mécanismes clés de signalisation entre les CSS et les cellules endothéliales vasculaires lors de l&#39;initiation du gliome.

En combinant une poli et renforcé vulnérabilité de la victime (ports) crânienne injection fenêtre et le glioblastome cellule (GBM), on peut observer l&#39;initiation gliome et la croissance des cellules de glioblastome injectées dans le cerveau d&#39;une souris vivante longitudinalement.

Imagerie gliome Initiation<em&gt; In Vivo</em&gt; Grâce à une poli et renforcé mince crâne fenêtre crânienne

Le gliome est l'une des formes de cancer humain les plus létales. Le traitement du gliome le plus efficace à ce jour — la chirurgie suivie d'une radiothérapie — offre...

L'objectif général de cette procédure est de visualiser les stades initiaux de l'initiation d'un gliome à partir de cellules uniques de glioblastome injectées in vivo. Cela est réalisé en amincissant d'abord une zone du crâne de souris jusqu'à une épaisseur adaptée à l'imagerie in vivo. Ensuite, la zone du crâne amincie est polie.Ensuite, des cellules de glioblastome marquées avec la GFP sont injectées dans le cerveau de la souris et la fenêtre crânienne est scellée pour l'imagerie in vivo. Enfin, les cellules de glioblastome injectées sont observées quotidiennement afin de visualiser l'initiation du gliome à partir des cellules de glioblastome injectées, in vivo. En définitive, des résultats peuvent être obtenus qui montrent l'initiation in vivo d'un gliome à partir d'une injection unique de cellules de glioblastome et sa relation avec les cellules endothéliales vasculaires, grâce à une microscopie à deux photons in vivo en double coloration.Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine des cellules souches cancéreuses, telles que le rôle essentiel de l'interaction entre les cellules souches de gliome et les cellules endothéliales vasculaires, ainsi que

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L'implantation intracrânienne d'GL261 cellules en souris C57BL / 6 produit gliomes malins qui récapitulent plusieurs des caractéristiques de glioblastome humain. Nous avons utilisé des cellules exprimant de façon stable GL261 luciférase pour nous permettre...

Implantation intracrânienne avec 3D ultérieures In Vivo Bioluminescent imagerie des gliomes murin

Nous présentons une méthode pour former une fenêtre d'imagerie dans le crâne de la souris qui s'étend millimètres et est stable pendant des mois sans inflammation du cerveau. Cette méthode est bien adaptée pour les études longitudinales de la circulation sanguine, la dynamique cellulaire et cellulaire / structure vasculaire en utilisant la microscopie à deux photons.

Une poli et renforcé Diluée-crâne fenêtre for Long-term imagerie du cerveau de souris

Cette vidéo présente une procédure chirurgicale visant à implanter une fenêtre crânienne dans un modèle de souris pour un accès optique stable à différentes régions du cerveau.

Implantation d’une fenêtre d’imagerie crânienne dans un modèle murin : une procédure chirurgicale pour implanter une lamelle à base de verre pour un accès optique stable aux régions du cerveau murin

Nous présentons une méthode de création d'une fenêtre corticale amincie crâne (TSCW) dans un modèle de souris...

Diluée-skull Technique fenêtre corticale pour<em&gt; In Vivo</em&gt; Tomographie par cohérence optique d&#39;imagerie

A Novel haute résolution<em&gt; In vivo</em&gt; Technique d&#39;imagerie pour étudier la réponse dynamique des structures intracrâniennes à la croissance tumorale et de thérapeutique

Nous avons établi un modèle de glioblastome orthotopique corticale chez la souris pour intravitale microscopie à deux photons qui récapitule les contraintes biophysiques normalement en jeu au cours de la croissance de la tumeur. Une fenêtre en verre chronique remplaçant le crâne au-dessus de la tumeur permet le suivi de la progression de la tumeur au cours du temps par microscopie à deux photons.

Un modèle de souris orthotopique glioblastome maintien contraintes physiques et parenchyme cérébral Convient pour intravitale deux microscopie biphotonique

Ici nous décrivons une méthode pour l'imagerie multiphoton de time-lapse de haute résolution des cellules de tumeur de cerveau avant et après l'intervention chirurgicale invasive (par exemple, biopsie) dans le même animal vivant. Cette méthode permet d'étudier l'impact de ces procédures chirurgicales invasives sur le comportement migratoire, invasif et proliférant des cellules tumorales à un seul niveau cellulaire.

Imagerie longitudinale intravitale du comportement cellulaire de tumeur cérébrale en réponse à une biopsie chirurgicale invasive

Ce protocole décrit une technique chronique d’implantation de fenêtre crânienne qui peut être employée pour l’imagerie longitudinale des structures neuro-glio-vasculaires, des interactions, et de la fonction dans les conditions saines et malades. Il sert d’alternative complémentaire à l’approche d’imagerie transcrânienne qui, bien que souvent préférée, possède certaines limites critiques.

Cartographie précise du cerveau pour effectuer l’imagerie in vivo répétitive de la dynamique neuro-immune chez les souris

Présenté ici est un protocole pour l’implantation d’une fenêtre crânienne chronique pour l’imagerie longitudinale des cellules du cerveau chez des souris éveillées et retenues par la tête.

Implantation d’une fenêtre crânienne pour l’imagerie in vivo répétée chez des souris éveillées

Cette étude démontre l’administration d’un traumatisme crânien répétitif à des souris et l’implantation simultanée d’une fenêtre crânienne pour l’imagerie intravitale ultérieure d’un EGFP exprimé par neurone à l’aide de la microscopie à deux photons.

Imagerie intravitale de l’expression de protéines fluorescentes chez des souris présentant un traumatisme crânien à crâne fermé et une fenêtre crânienne à l’aide d’un microscope à deux photons

Nous présentons une nouvelle approche pour la microscopie à deux photons de l’administration tumorale de nanoparticules d’oxyde de fer marquées par fluorescence au glioblastome dans un modèle murin.

Microscopie intravitale à deux photons du glioblastome dans un modèle murin

Découvrez l'imagerie de l'initiation des gliomes in vivo par injection de cellules de glioblastome marquées au GFP chez la souris. Cette méthode utilise une fenêtre crânienne mince polie et renforcée pour visualiser les interactions entre cellules tumorales et endothéliales vasculaires.

Imagerie gliome Initiation

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