Name: Hétérotypique tridimensionnelle In Vitro Modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de linitiation et la progression du cancer des ovaires (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-08-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 42 s
Description: Découvrez la modélisation 3D hétérotypique pour étudier les interactions stroma-épithéliales dans le cancer de l'ovaire. Cette méthode permet d'explorer les mécanismes d'initiation tumorale et de progression.

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Cette recherche a été effectuée à la Keck School of Medicine, University of California, Etats-Unis, et l&#39;University College London, Royaume-Uni. KL est financé par l&#39;Institut national de la Santé subvention de 5 U19 CA148112-02. BG a été financé par une subvention de projet de la charité appel Eve oncologie gynécologique (Royaume-Uni). Certains de ces travaux entrepris à UCLH / UCL a été en partie le financement du ministère de la Santé INDH recherche biomédicale système de financement du Centre.

<ol><li>Jelovac, D., Armstrong, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recent+progress+in+the+diagnosis+and+treatment+of+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22CA+Cancer+J.+Clin%22%5BJournal%5D)">Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer.</a> CA Cancer J. Clin. , (2011).</li>
<li>Office for National Statistics. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cancer+Statistics+registrations%3A+registrations+of+cancer+diagnosed+in+2008%22">Cancer Statistics registrations: registrations of cancer diagnosed in 2008</a>. , England. (2011).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Santos, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+type+and+substage+predict+survival+in+stage+I+and+II+ovarian+carcinoma%3A+insights+and+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Tumor type and substage predict survival in stage I and II ovarian carcinoma: insights and implications.</a> Gynecol. Oncol. 116, 50-56 (2010).</li>
<li>Köbel, M., Kalloger, S. E., Boyd, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+carcinoma+subtypes+are+different+diseases%3A+implications+for+biomarker+studies%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Med%22%5BJournal%5D)">Ovarian carcinoma subtypes are different diseases: implications for biomarker studies.</a> PLoS Med. 5, e232(2008).</li>
<li>Smith, L. H., Morris, C. R., Yasmeen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ovarian+cancer%3A+can+we+make+the+clinical+diagnosis+earlier%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer%22%5BJournal%5D)">Ovarian cancer: can we make the clinical diagnosis earlier.</a> Cancer. 104, 1398-1407 (2005).</li>
<li>Aviv, A., Hunt, S. C., Lin, J., Cao, X., Kimura, M., Blackburn, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impartial+comparative+analysis+of+measurement+of+leukocyte+telomere+length%2FDNA+content+by+Southern+blots+and+qPCR%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Impartial comparative analysis of measurement of leukocyte telomere length/DNA content by Southern blots and qPCR.</a> Nucleic Acids Res. 39, e134(2011).</li>
<li>Kim, N. W., Wu, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+quantification+and+characterization+of+telomerase+activity+by+the+telomeric+repeat+amplification+protocol+%28TRAP%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in quantification and characterization of telomerase activity by the telomeric repeat amplification protocol (TRAP.</a> Nucleic Acids Res. 25, 2595-2597 (1997).</li>
<li>Lawrenson, K., Grun, B., Benjamin, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Senescent+fibroblasts+promote+neoplastic+transformation+of+partially+transformed+ovarian+epithelial+cells+in+a+three-dimensional+model+of+early+stage+ovarian+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Senescent fibroblasts promote neoplastic transformation of partially transformed ovarian epithelial cells in a three-dimensional model of early stage ovarian cancer.</a> Neoplasia. 12, 317-325 (2010).</li>
<li>Lawrenson, K., Benjamin, E., Turmaine, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three-dimensional+modelling+of+human+ovarian+surface+epithelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">In vitro three-dimensional modelling of human ovarian surface epithelial cells.</a> Cell Prolif. 42, 385-393 (2009).</li>
<li>Lawrenson, K., Sproul, D., Grun, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+genetic+and+clinical+heterogeneity+in+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Carcinogenesis%22%5BJournal%5D)">Modelling genetic and clinical heterogeneity in epithelial ovarian cancers.</a> Carcinogenesis. 32, 1540-1549 (2011).</li>
<li>Grun, B., Benjamin, E., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Three-dimensional+in+vitro+cell+biology+models+of+ovarian+and+endometrial+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Prolif%22%5BJournal%5D)">Three-dimensional in vitro cell biology models of ovarian and endometrial cancer.</a> Cell Prolif. 42, 219-228 (2009).</li>
<li>Zietarska, M., Maugard, C. M., Filali-Mouhim, A., Alam-Fahmy, M., Tonin, P. N., Provencher, D. M., Mes-Masson, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+description+of+a+3D+in+vitro+model+for+the+study+of+epithelial+ovarian+cancer+%28EOC%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Carcinog%22%5BJournal%5D)">Molecular description of a 3D in vitro model for the study of epithelial ovarian cancer (EOC.</a> Mol. Carcinog. 46, 872-885 (2007).</li>
<li>Shield, K., Ackland, M. L., Ahmed, N., Rice, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multicellular+spheroids+in+ovarian+cancer+metastases%3A+Biology+and+pathology%5BTitle%5D)+AND+%22Gynecol+Oncol%22%5BJournal%5D)">Multicellular spheroids in ovarian cancer metastases: Biology and pathology.</a> Gynecol Oncol. 113, 143-148 (2009).</li>
<li>Dafou, D., Grun, B., Sinclair, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microcell-mediated+chromosome+transfer+identifies+EPB41L3+as+a+functional+suppressor+of+epithelial+ovarian+cancers%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">Microcell-mediated chromosome transfer identifies EPB41L3 as a functional suppressor of epithelial ovarian cancers.</a> Neoplasia. 12, 579-589 (2010).</li>
<li>Levanon, K., Crum, C., Drapkin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+insights+into+the+pathogenesis+of+serous+ovarian+cancer+and+its+clinical+impact%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Oncol%22%5BJournal%5D)">New insights into the pathogenesis of serous ovarian cancer and its clinical impact.</a> J. Clin. Oncol. 26, 5284-5293 (2008).</li>
<li>Kurman, R. J., Shih, I. eM. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+pathogenesis+and+extraovarian+origin+of+epithelial+ovarian+cancer--shifting+the+paradigm%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Molecular pathogenesis and extraovarian origin of epithelial ovarian cancer--shifting the paradigm.</a> Hum. Pathol. 42, 918-931 (2011).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

La biologie du stade précoce de cancer ovarien épithélial (COE) est mal comprise. Peut-être l&#39;un des principaux obstacles dans ce domaine depuis de nombreuses années a été le manque de compréhension des origines tissulaires spécifiques de la maladie, et de l&#39;importance du rôle du microenvironnement dans le développement des COE. Au cours des dernières années, est devenu clair que des COE est une maladie hétérogène avec de multiples sous-types distincts histophathological, probablement avec différentes origines c...

<table border="1"><tbody><tr><td> Réactif </td><td> Fournisseur </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> PolyHEMA, adapté pour la culture cellulaire </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P3932 </td></tr><tr><td> Moléculaire éthanol de qualité biologie </td><td> Sigma Aldrich </td><td> E7023 </td></tr><tr><td> Eau stérile pour culture cellulaire </td><td> VWR </td><td> 12001-356 </td></tr><tr><td> MCDB105 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M6395 </td></tr><tr><td> Milieu 199 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> M2154 </td></tr><tr><td> Hyclone sérum fœtal bovin </td><td> Thermo Scientific </td><td> SH30088.03 </td></tr><tr> &lt;td&gt; gentamicine </td><td> Sigma Aldrich </td><td> G1397 </td></tr><tr><td> L&#39;amphotéricine B </td><td> Sigma Aldrich </td><td> A2942 </td></tr><tr><td> pBABE-hygro-hTERT </td><td> Addgene </td><td> 1773 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> VWR </td><td> 12001-766 </td></tr><tr><td> 0,25% de trypsine-EDTA </td><td> Invitrogen </td><td> 25200-072 </td></tr><tr><td> Cellule filtre (40 ou 70 microns) </td><td> VWR </td><td> 21008-949 21008-952 </td></tr><tr><td> Anti-anticorps protéine de surface des fibroblastes, clone 1B10 </td><td> Sigma </td><td> F4771 </td></tr><tr><td> Anti-pan-cytokératine anticorps (C11) </td><td> Santa Cruz </td><td> sc-8018 </td></tr><tr><td> Polybrène (hexadiméthrine bromure) </td><td> Sigma </td><td> 107689 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG télomérase PCR ELISA PLUS </td><td> Roche </td><td> 12013789001 </td></tr><tr><td> TeloTAGGG Assay longueur des télomères </td><td> Roche </td><td> 12209136001 </td></tr></tbody></table> Réactifs Tableau 1. Et du matériel visés dans la présente étude.

hétérotypique tridimensionnelle<em&gt; in vitro</em&gt; modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de l&#39;initiation et la progression du cancer des ovaires

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

Cancers épithéliaux de l&#39;ovaire (COU) sont la principale cause de décès par cancer gynécologique dans les sociétés occidentales. Malgré les progrès dans les traitements chirurgicaux et l&#39;amélioration des chimiothérapies à base de platine, il ya eu peu d&#39;amélioration dans les taux de survie des COE pendant plus de quatre décennies 1,2. Bien que les tumeurs de stade I ont des taux de survie à 5 ans&gt; 85%, les taux de survie pour le stade III / IV maladies sont &lt;40%. Ainsi, les taux élevés de mortalité pour COE pourrait être considérablement diminué si les tumeurs ont été détectées au plus tôt, plus traitables les étapes 3-5. À l&#39;heure actuelle, la base génétique moléculaire et biologique de stade de développement précoce de la maladie est mal comprise. Plus précisément, on sait peu au sujet du rôle du microenvironnement tumoral lors de l&#39;initiation, mais les facteurs de risque connus pour la COU (par exemple l&#39;âge et la parité) suggèrent que le microenvironnement joue un rôle clé dans la genèse précoce de la COU. Nous avons donc développé des modèles tridimensionnels hétérotypiquesà la fois de l&#39;ovaire normal et du début des cancers de l&#39;ovaire stade. Pour l&#39;ovaire normal, nous co-cultivées surface épithéliale ovarienne normale (IOSE) et des fibroblastes du stroma normale (INOF) cellules, immortalisé par transduction retrovrial de la sous-unité catalytique de la télomérase humaine holoenzyme (hTERT) pour prolonger la durée de vie de ces cellules en culture. Pour modéliser les premières étapes de la transformation cellulaire épithélial de l&#39;ovaire, la surexpression de l&#39;oncogène dans les cellules CMYC IOSE, nouveau co-cultivées avec des cellules INOF. Ces modèles hétérotypiques ont servi à étudier les effets du vieillissement et de la sénescence sur la transformation et l&#39;invasion des cellules épithéliales. Ici, nous décrivons les étapes méthodologiques dans le développement de ces modèles en trois dimensions; ces méthodologies ne sont pas spécifiques au développement de l&#39;ovaire normal et les tissus du cancer de l&#39;ovaire, et pourrait être utilisée pour étudier les autres types de tissus où les interactions cellules stromales et épithéliales sont un élément fondamental aspect de l&#39;entretien des tissus et didéveloppement malad.

Nous décrivons les méthodes pour établir<em&gt; In vitro</em&gt; Hétérotypiques modèles tridimensionnels comprenant des fibroblastes et la surface de l&#39;ovaire ou de l&#39;ovaire normale des cellules ovariennes cancéreuses épithéliales. Nous discutons de l&#39;utilisation de ces modèles pour l&#39;étude du stroma-épithéliales interactions qui se produisent au cours du développement du cancer de l&#39;ovaire.

Hétérotypique tridimensionnelle<em&gt; In Vitro</em&gt; Modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de l&#39;initiation et la progression du cancer des ovaires

Les cancers épithéliaux de l'ovaire (CEO) sont la principale cause de décès par tumeur maligne gynécologique dans les sociétés occidentales. Malgré les progrès de la chirurgie...

L'objectif général de l'expérience suivante est de générer des modèles tridimensionnels typiques du développement du cancer de l'ovaire à un stade précoce. Tout d'abord, produire des lignées cellulaires immortalisées H turt issues de tissus primaires d'épithélium ovarien normal et de fibroblastes. Ensuite, afin de recréer l'architecture in vivo et les interactions complexes entre cellules présentes dans l'ovaire, réaliser une co-culture des lignées cellulaires épithéliales et stromales dans des modèles sphéroïdes tridimensionnels, puis fixer et colorer les cultures d'organoides et analyser l'expression de marqueurs spécifiques afin d'étudier les caractéristiques moléculaires des interactions stromales et épithéliales.Les résultats obtenus montrent comment des altérations dans le compartiment des cellules stromales de modèles 3D typiques peuvent influencer le phénotype des cellules épithéliales cultivées en co-culture. Les modèles tridimensionnels typiques peuvent aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la recherche sur le cancer de l'ovaire, telles que l'exploration des origines de cette maladie et l'élucidation du rôle du microenvironnement stromal dans l'initiati

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Le dosage jeu mésothéliales décrite ici prend avantage des cellules marquées par fluorescence et la microscopie vidéo time-lapse de visualiser et de mesurer quantitativement les interactions de sphéroïdes multicellulaires cancer de l'ovaire et les monocouches de cellules mésothéliales. Ce test modélise les étapes précoces de métastases du cancer de l'ovaire.

Test in vitro avec dégagement mésothéliales que les modèles les étapes précoces de métastases du cancer de l&#39;ovaire

Dans cette vidéo, nous montrons le développement d’un modèle tridimensionnel in vitro de la muqueuse de la cavité péritonéale. Cette culture organotypique peut aider à étudier l’adhésion, l’invasion et la prolifération des cellules cancéreuses de l’ovaire.

Modélisation des métastases du cancer de l’ovaire dans la muqueuse de la cavité péritonéale : une méthode pour établir un modèle 3D in vitro de la muqueuse péritonéale

Ici, nous présentons un protocole de co-culture en trois dimensions, qui est utile pour étudier les interactions multicellulaires et la modulation dépendante de la matrice extracellulaire du comportement des cellules cancéreuses. Dans ce modèle expérimental, les cellules cancéreuses sont cultivées sur des gels de collagène intégrés à des fibroblastes humains associés au cancer.

En trois dimensions modèle de co-culture tumeur stromale-Interaction

Ici, nous présentons un protocole pour construire un modèle in vitro tridimensionnel de la muqueuse de la cavité péritonéale, composé de cellules mésothéliales humaines primaires et de fibroblastes superposés avec une matrice extracellulaire, comme outil pour étudier l’adhésion, l’invasion et la prolifération des cellules cancéreuses de l’ovaire.

Modélisation des étapes précoces de cancer de l&#39;ovaire Diffusion dans une culture organotypique de la cavité péritonéale humain

Nous faisons la démonstration d’une méthode pour générer des substituts du cancer du sein en 3D, qui peuvent être cultivés à l’aide d’un système de bioréacteur à perfusion pour fournir de l’oxygène et des nutriments. Après la croissance, les substituts sont fixés et transformés en paraffine pour l’évaluation des paramètres d’intérêt. L’évaluation de l’un de ces paramètres, la densité cellulaire, est expliquée.

Préparation et analyse des<em&gt; In vitro</em&gt; Trois Breast Dimensional Carcinome Surrogates

Pour étudier la progression de la tumeur ovarienne dans un modèle physiologiquement pertinente, sphéroïdes multicellulaires ont été cultivées dans un microdispositif dans l'écoulement de fluide simulé. Ce modèle 3D dynamique émule l'environnement intrapéritonéale avec les composants cellulaires et mécaniques où les métastases du cancer de l'ovaire se produit.

Modélisation Comportement cancer de l&#39;ovaire multicellulaire Spheroid dans un Microdevice Dynamic 3D péritonéale

Les cellules souches du cancer de l’ovaire (OCSC) sont responsables de l’initiation du cancer, de la récidive, de la résistance thérapeutique et des métastases. La niche vasculaire OCSC est considérée comme favorisant l’auto-renouvellement des OCSC, conduisant à la chimiorésistance. Ce protocole fournit la base pour établir un modèle reproductible de niche vasculaire OCSC in vitro.

Évaluation des propriétés angiogénétiques des cellules souches du cancer de l’ovaire à l’aide du système de co-culture tridimensionnel, NICO-1

Ce protocole décrit l’établissement d’un modèle tridimensionnel (3D) ex vivo de l’interaction cellule-épiploon cancéreux. Le modèle fournit une plate-forme pour élucider les mécanismes pro-tumoraux dans la niche adipeuse et pour tester de nouvelles thérapies.

Un modèle ex vivo de métastases péritonéales du cancer de l’ovaire à l’aide d’un épiploon humain

Il existe un besoin critique de modèles de cancer 3D qui capturent la diaphonie hétérocellulaire pour étudier les métastases cancéreuses. Notre étude présente la génération d’épithélium stromal hétéromulticellulaire dans un environnement sans échafaudage qui peut être utilisé pour étudier l’invasion et les distributions spatiales cellulaires.

Cellules stromales hétéromulticellulaires dans des cultures 3D sans échafaudage de cellules cancéreuses épithéliales pour stimuler l’invasion

Ce protocole détaille le développement de modèles murins de carcinome séreux de l’ovaire séreux de haut grade (HGSOC) in vitro et in vivo. De la dérivation d’organoïdes murins de trompes de Fallope, leur modification génétique pour récapituler la génétique HGSOC humaine, et leur introduction dans la bourse ovarienne de souris syngéniques pour le développement in vivo de tumeurs.

Développement de lignées organoïdes dérivées de souris à partir de cellules épithéliales de trompes de Fallope pour la modélisation du carcinome de l’ovaire séreux de haut grade

Découvrez la modélisation 3D hétérotypique pour étudier les interactions stroma-épithéliales dans le cancer de l'ovaire. Cette méthode permet d'explorer les mécanismes d'initiation tumorale et de progression.

Hétérotypique tridimensionnelle In Vitro Modélisation des interactions stroma-épithéliales lors de linitiation et la progression du cancer des ovaires (Vidéo) | JoVE Journal

Hétérotypique tridimensionnelle

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