Name: Juin 2012: Ce mois-ci dans JoVE (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-01T13:30:00.000+00:00
Duration: 5 min 50 s
Description: Découvrez deux méthodes innovantes de préparation de greffes cornéennes développées par des équipes d'Italie et du Michigan. Ces avancées améliorent les résultats de la kératoplastie et la restauration de la vision.

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<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3709">Hybridation in situ de glandes salivaires, d’ovaires et d’embryons de moustiques vecteurs</a></h2>
Jennifer Juhn1, Anthony A. James2, 1 1Département de biologie moléculaire et de biochimie, Université de Californie, Irvine , 2Département de microbiologie et de génétique moléculaire, Université de Californie, Irvine 
Les analyses temporelles et spatiales de l’expression génique jouent un rôle crucial dans la génomique fonctionnelle. L’hybridation in situ sur l’ensemble du mont est utile pour déterminer la localisation des transcrits dans les tissus et les compartiments subcellulaires. Nous décrivons ici un protocole d’hybridation in situ avec des modifications pour des tissus cibles spécifiques chez les moustiques.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3763">Étude du point de contrôle mitotique en illustrant le comportement dynamique de la protéine kinétochore et le mouvement des chromosomes chez des embryons syncytial de drosophile vivants</a></h2>
Maureen Sinclair1, Jun-Yong Huang2, 1 1Institut de biosciences cellulaires et moléculaires, Université de Newcastle, Royaume-Uni, 2Institut de biosciences cellulaires et moléculaires, Université de Newcastle
Le kinétochore est l’endroit où le SAC initie son signal en surveillant la ségrégation mitotique des chromatides sœurs. Une méthode est décrite pour visualiser le recrutement et le renouvellement de l’une des protéines kinétochores et sa coordination avec le mouvement des chromosomes chez les embryons de drosophile à l’aide d’un système confocal à balayage laser Leica.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3765">Une technique simplifiée pour l’excision in situ de la cornée et l’éviscération du tissu rétinien du globe oculaire humain</a></h2>
Mohit Parekh1, Stefano Ferrari1, Enzo Di Iorio1, Vanessa Barbaro1, Davide Camposampiero1, Marianthi Karali2, Diego Ponzin1, Gianni Salvalaio3, 1 1Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto O.N.L.U.S. , 2Telethon Institute for Genetics & Medicine (T.I.G.E.M.), 3Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto, O.N.L.U.S.
L’article décrit une technique simplifiée pour exciser la cornée et éviscérer les tissus rétiniens du globe oculaire de donneurs humains cadavériques. La technique décrite ici aidera à exciser des tissus de bonne qualité à utiliser à des fins de transplantation, de chirurgie ou de recherche sans endommager d’autres tissus du globe oculaire.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3813">Différenciation efficace des cellules souches embryonnaires de souris en motoneurones</a></h2>
-Yen Wu1, Dosh Whye2, 1, Robert W. Mason1, Wenlan Wang1 1 NemoursBiomedical Research, Alfred I. duPont Hospital for Children, 2Department of Pediatrics, Columbia University Medical Center
Nous avons développé un nouveau protocole pour améliorer l’efficacité de la différenciation in vitro des cellules souches embryonnaires de souris en motoneurones. Les cellules ES différenciées ont acquis des caractéristiques des motoneurones, comme en témoigne l’expression de marqueurs neuronaux et motoneurones à l’aide de techniques immunohistochimiques.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3847">Préparation du tissu cornéen d’un donneur pour la kératoplastie endothéliale</a></h2>
Maria A. Woodward1, Michael Titus2, Kyle Mavin2, Roni M. Shtein1 1 Départementd’ophtalmologie, Université du Michigan , 2Midwest Eye Banks
La greffe de cornée endothéliale est une technique chirurgicale pour le traitement des maladies de la cornée postérieure. La dissection mécanique du microkératome pour préparer le tissu permet d’obtenir des greffons plus minces et plus symétriques, avec moins de perte de cellules endothéliales et de meilleurs résultats. Des dissections peuvent être effectuées à la banque d’yeux avant la chirurgie de transplantation de cornée.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3958">Microfluidique endothélialisée pour l’étude des interactions microvasculaires dans les maladies hématologiques</a></h2>
David R. Myers1, 2, 3, 4,*, Yumiko Sakurai1, 2, 3, 4,*, Reginald Tran1, 2, 3, 4, Byungwook Ahn1, 2, 3, 4, Elaissa Trybus Hardy1, 2, 3, 4, Robert Mannino1, 2, 3, 4, Ashley Kita1, 2, 3, 4, Michelle Tsai1, 2, 3, 4, Wilbur A. Lam1, 2, 3, 4 1Département de pédiatrie, École de médecine de l'Université Emory, 2Département de génie biomédical Wallace H. Coulter, Institut de technologie de Géorgie et Université Emory, 3Centre de cancérologie Aflac et Service des troubles sanguins des soins de santé pour enfants d'Atlanta , 4Winship Cancer Institute de l’Université Emory* Ces auteurs ont contribué à parts égales
Une méthode de culture d’une monocouche de cellules endothéliales sur toute la surface 3D interne d’un dispositif microfluidique avec des canaux de taille microvasculaire (<30 μm) est décrite. Ce modèle de microvascularisation in vitro permet d’étudier les interactions biophysiques entre les cellules sanguines, les cellules endothéliales et les facteurs solubles dans les maladies hématologiques.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/video/3993">Enregistrement des signaux électrocorticographiques humains (ECoG) pour la recherche neuroscientifique et la cartographie corticale fonctionnelle en temps réel</a></h2>
<font color='black'>N. Jeremy Hill1, Disha Gupta2, 1, Peter Brunner2, 1, Aysegul Gunduz2, 1, Matthew A. Adamo3, Anthony Ritaccio2, Gerwin Schalk1, 2, 4, 5, 6, 7 1Wadsworth Center, Département de la santé de l’État de New York, 2Département de neurologie, Albany Medical College, 3Département de neurochirurgie, Albany Medical College, 4Département de neurochirurgie, Université de Washington, 5Département de biomédecine. Ing., Institut polytechnique Rensselaer, 6Département de biomédecine. Sci., UNIVERSITÉ D’ÉTAT DE NEW YORK À ALBANY, 7Département d’ingénierie électrique et comp., Université du Texas à El Paso 
Nous présentons une méthode de collecte de signaux électrocorticographiques à des fins de recherche auprès d’humains soumis à un suivi invasif de l’épilepsie. Nous montrons comment utiliser la plate-forme logicielle BCI2000 pour la collecte de données, le traitement du signal et la présentation de stimulus. Plus précisément, nous faisons la démonstration de SIGFRIED, un outil basé sur BCI2000 pour la cartographie fonctionnelle du cerveau en temps réel.

Pas de conflits d&#39;intérêt déclarés.

juin 2012: ce mois-ci dans jove

June 2012: This Month in JoVE

En 1905, dans ce qui est aujourd'hui la République tchèque, Eduard Zirm a réalisé la première chirurgie de transplantation cornéenne (kératoplastie), qui a permis de restaurer la vision d'un patient rendu aveugle par une lésion cornéenne. Aujourd'hui, les banques d'yeux du monde entier préparent, stockent et distribuent des cornées provenant de donneurs vers les hôpitaux afin que des milliers de kératoplasties, capables de sauver la vue, puissent être effectuées chaque année. En juin 2012, JoVE s'intéresse à deux équipes de recherche, l'une provenant d'Italie et l'autre du Michigan, qui démontrent deux méthodes distinctes de préparation de greffons cornéens avant transplantation.
Nos auteurs d'Italie nous montrent leur technique d'excision de la cornée à partir du globe oculaire, qui consiste d'abord à l'immerger dans une série de solutions stérilisantes afin de la préparer pour une manipulation stérile, à créer une incision sur la surface sclérale, puis à séparer finalement la couronne cornéo-sclérale du globe. Une fois la cornée retirée, la densité et la viabilité des cellules endothéliales sont vérifiées, puis elle est préparée pour un stockage à long terme, durant lequel le milieu est testé périodiquement de manière haut débit, en même temps que d'autres greffons déposés à la banque d'yeux.
Dans les chirurgies de greffe de cornée, des greffons en pleine épaisseur sont utilisés lors d'une procédure appelée kératoplastie pénétrante ; toutefois, JoVE apprend que, dans certaines cornées malades, seule la couche endothéliale est affectée. Nos auteurs de l'Université du Michigan et de la Midwest Eye Bank démontrent un traitement supplémentaire des cornées de donneurs par la kératoplastie endothéliale automatisée avec stripping de la membrane de Descemet (DSAEK), une procédure qui consiste à greffer uniquement la couche endothéliale cornéenne. Cette procédure relativement récente est rendue possible grâce à l'utilisation d'un microkératome, un dispositif capable de découper précisément la cornée afin de séparer la couche endothéliale pour la transplantation. L'uniformité et la qualité du tissu donneur sont vérifiées à l'aide d'une lampe à fente et de microscopie spéculaire, puis le greffon est mis en stockage en vue d'une chirurgie de greffe de cornée.
Deux groupes d'auteurs, issus de continents différents, ont conjointement documenté les étapes permettant de retirer la cornée entière de l'œil et d'isoler la couche postérieure pour une kératoplastie endothéliale — un processus qui diminue le risque d'infection ou de rejet de greffe et améliore la capacité visuelle du patient.
Dans JoVE Neuroscience, une équipe pluridisciplinaire de cliniciens et de scientifiques présente de nouvelles applications de recherche de l'électrocorticographie (ECoG). L'ECoG est une procédure invasive qui utilise des électrodes en bandelettes et en grille placées directement sur le cerveau afin de localiser les foyers épileptiques chez les patients épileptiques. Cette procédure peut également servir à cartographier les régions corticales qui doivent être préservées lors d'une chirurgie résective. Le cartographiage cortical est réalisé en surveillant si la stimulation d'une électrode donnée entraîne une perturbation du mouvement ou du langage. Les patients subissent généralement une surveillance intracrânienne visant à localiser les foyers épileptiques pendant environ une semaine, et cette durée offre une fenêtre d'opportunité unique aux chercheurs pour étudier le cerveau humain en action à l'aide de l'ECoG, qui possède de meilleures propriétés de rapport signal/bruit et une moindre sensibilité aux artefacts d'enregistrement que l'électroencéphalographie (EEG) non invasive.
Après avoir déterminé l'activité de base au repos, nos auteurs enregistrent l'activité cérébrale dans la gamme de fréquences gamma élevées, pendant des tâches cognitives simples ou des tâches motrices. Ensuite, ces chercheurs démontrent comment utiliser le système logiciel SIGFRIED pour effectuer une cartographie fonctionnelle rapide et en temps réel à partir des signaux ECoG, qui sont ensuite analysés afin de fournir des informations sur les régions cérébrales associées à des tâches spécifiques.
En bioingénierie, JoVE rencontre une équipe de scientifiques qui montrent que le microvasculaire peut être approximativement recréé sur une puce. Cette « puce » est en réalité un dispositif comportant des canaux microfluidiques revêtus de cellules endothéliales. La photolithographie SU-8 est utilisée pour graver le motif des canaux sur une tranche de silicium, servant de moule au PDMS. Une fois le dispositif fabriqué, il est ensemencé avec des cellules endothéliales, cultivées dans les canaux. Grâce à la transparence du PDMS, les cellules peuvent être observées par microscopie. Ce modèle in vitro du microvasculaire fournit un microenvironnement contrôlé pouvant être utilisé pour étudier les processus hémodynamiques normaux ainsi que les maladies hématologiques. Ce bref résumé n'est qu'un aperçu de certains contenus de JoVE pour le mois de juin. Une exploration plus approfondie pourrait conduire à des méthodes d'hybridation in situ de tissus d'adultes de moustiques et d'embryons, à la visualisation de la mitose chez la drosophile, ou encore à la différenciation de cellules souches embryonnaires en motoneurones. Restez à l'écoute.

Juin 2012: Ce mois-ci dans JoVE

En 1905, dans ce qui est aujourd'hui la République tchèque, Eduard Zirm a réalisé la première chirurgie de transplantation cornéenne (kératoplastie), laquelle a permis de restaurer la vision d'un patient aveuglé par une lésion cornéenne. Aujourd'hui, des banques d'yeux du monde entier préparent, conservent et distribuent des cornées issues de dons aux hôpitaux afin que des milliers de kératoplasties salvatrices puissent être pratiquées chaque année. En juin 2012, JoVE s'intéresse à deux groupes de recherche, l'un d'Italie et l'autre du Michigan, qui présentent deux méthodes distinctes de préparation des greffons cornéens avant la transplantation. Nos auteurs italiens nous présentent leur technique d'excision de la cornée du globe oculaire, qui consiste d'abord à l'immerger dans une série de solutions stérilisantes pour permettre une manipulation stérile, à pratiquer une incision sur la surface sclérale, et enfin à séparer l'anneau cornéo-scléral du globe. Une fois la cornée retirée, la densité et la viabilité des cellules endothéliales sont vérifiées et celle-ci est préparée pour une conservation à long terme, durant laquelle le milieu est périodiquement testé en mode haut débit avec d'autres greffons déposés à la banque d'yeux. Lors des chirurgies de transplantation cornéenne, des greffons d'épaisseur totale sont utilisés dans une procédure appelée kératoplastie pénétrante ; cependant, JoVE apprend que dans certaines cornées pathologiques, seule la couche endothéliale est affectée. Nos auteurs de l'University of Michigan & Midwest Eye Bank démontrent un traitement complémentaire des cornées de donneurs par kératoplastie endothéliale automatisée avec pelage de la membrane de Descemet (DSAEK), une procédure qui consiste à greffer uniquement la couche endothéliale cornéenne. Cette procédure relativement récente est rendue possible grâce à l'utilisation d'un microkératome, un dispositif capable de couper précisément la cornée afin que la couche endothéliale puisse être séparée pour la transplantation. L'uniformité et la qualité du tissu du donneur sont vérifiées à l'aide d'une lampe à fente et d'une microscopie spéculaire, et le greffon est conservé pour la chirurgie de transplantation cornéenne. Ensemble, deux groupes d'auteurs, provenant de continents différents, ont documenté les étapes du retrait de la cornée entière de l'œil et de l'isolement de la couche postérieure pour la kératoplastie endothéliale — un processus qui diminue le risque d'infection ou de rejet du greffon et améliore la capacité visuelle du patient. Dans JoVE Neuroscience, une équipe multidisciplinaire de cliniciens et de scientifiques présente de nouvelles applications de recherche pour l'électrocorticographie (ECoG). L'ECoG est une procédure invasive qui utilise des électrodes en bandes et en grilles placées directement sur le cerveau pour localiser les foyers épileptiques chez des patients souffrant d'épilepsie. Cette procédure peut également être utilisée pour cartographier les régions corticales qui doivent être préservées lors d'une chirurgie résective. La cartographie corticale est réalisée en surveillant si la stimulation d'une électrode donnée entraîne une interruption du mouvement ou de la parole. Les patients sont généralement soumis à un monitorage intracrânien pour localiser les foyers épileptiques pendant environ une semaine, et cette durée offre une occasion unique aux chercheurs d'étudier le cerveau humain en action avec l'ECoG, qui présente de meilleures propriétés de rapport signal sur bruit et une moindre sensibilité aux artéfacts d'enregistrement que l'électroencéphalographie (EEG) non invasive. Après avoir déterminé l'activité de base au repos, nos auteurs enregistrent l'activité cérébrale dans la gamme de fréquences gamma élevées, lors de tâches cognitives ou motrices simples. Ensuite, ces chercheurs démontrent comment utiliser le système logiciel SIGFRIED pour effectuer une cartographie fonctionnelle rapide et en temps réel basée sur les signaux ECoG, lesquels sont analysés plus en détail pour fournir des informations concernant les régions cérébrales associées à des tâches particulières. Dans Bioengineering, JoVE rencontre une équipe de scientifiques qui montrent que la microvascularisation peut être approximativement recréée sur une puce. Cette « puce » est en réalité un dispositif comportant des canaux microfluidiques tapissés de cellules endothéliales. La photolithographie SU-8 est utilisée pour graver le motif des canaux sur une plaque de silicium, laquelle sert de moule pour le PDMS.

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Découvrez deux méthodes innovantes de préparation de greffes cornéennes développées par des équipes d'Italie et du Michigan. Ces avancées améliorent les résultats de la kératoplastie et la restauration de la vision.

Juin 2012: Ce mois-ci dans JoVE (Vidéo) | JoVE Journal

Wendy Chao

Aaron Kolski-Andreaco

Juin 2012: Ce mois-ci dans JoVE

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