Name: Lendothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de lartère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-02-16T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Découvrez le modèle d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne induite par endothéline-1 chez le rat avec guidage Doppler laser. Cette méthode permet d'étudier l'AVC ischémique de façon moins invasive.

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Ce travail a été soutenu par des subventions du Cœur d&#39;affiliation Association américaine du Grand Sud-Est (09GRNT2060421), l&#39;American Medical Association et de l&#39;Université de Floride, clinique et translationnelle Institut des sciences. Adam La Mecque est un garçon NRSA NIH / NINDS, prédoctoral (F30 NS-060335). Robert Regenhardt reçu le soutien bourse pré-doctorale de l&#39;Université de Floride du programme de formation multidisciplinaire sur l&#39;hypertension (T32 HL-083810).

Ce protocole a été approuvé par le soin des animaux et du Comité institutionnel d&#39;utilisation (IACUC) à l&#39;Université de Floride et est en conformité avec le «Guide pour les soins et l&#39;utilisation des animaux de laboratoire&quot; (huitième édition, National Academy of Sciences, 2011). Matériels <ol><li> Animaux: Huit semaines d&#39;âge, de sexe masculin, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) pesant 250-300 g au moment de la chirurgie. </li><li> Anesthésie <ol class="lalpha"><li> Système d&#39;anesthésie par inhalation (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA) </li><li> L&#39;isoflurane anesthésie (Pharmacie Baxter, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stéréotaxique système (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Petit système stéréotaxique animaux </li><li> Non-rupture des barres d&#39;oreilles pour les rats </li><li> Support de la tête anesthésie gazeuse pour les rats </li></ol></li><li> Régulation de la température<ol class="lalpha"><li> BAT-12 Thermomètre microsonde (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> T / PUMP, TP600 couverture thermique (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, État de New York, Etats-Unis) </li></ol></li><li> Les instruments chirurgicaux <ol class="lalpha"><li> Manche de bistouri n ° 11 et la lame, pince à iris, Graefe pince, pince bulldog écarteurs, tournevis, une seringue de 10 ul avec 26 aiguille de la jauge biseautée (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> Micromoteur foret et porte stéréotaxique, Quintessential stéréotaxique injecteur (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 1,0 mm fraise foret rond, 1,0 mm inversé foret conique fraise (Roboz chirurgical Instrument Co., Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Fournitures chirurgicales <ol class="lalpha"><li> Les vis de fixation 0-80 X 3/32 avec 2,4 mm longueur de l&#39;arbre, de calibre 21 guide de canule [4mm de long sous le pylône] et factice canule (Plastics One, Roanoke, VA, USA) </li><li> Acrylique prothèse Jet et liquides (Lang Dental Manufacturing Co., Inc, Chicago, IL, USA) </li><li> 3,0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Des cotons-tiges, pommade ophtalmique Puralube (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA, USA) </li><li> Tondeuses à cheveux électriques (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li><li> Produits chimiques <ol class="lalpha"><li> L&#39;endothéline-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine à 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li><li> La buprénorphine HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA) </li></ol></li><li> Équipements de visualisation <ol class="lalpha"><li> Microscope chirurgical (Seiler Instrument et fabrication; St. Louis, MO, USA) </li><li> Fibre optique d&#39;éclairage (Techniquip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Laser Doppler système (ADInstruments, Inc, Colorado Springs, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> StSonde Crayon Andard </li><li> Porte-sonde </li><li> Débitmètre sanguin </li><li> Powerlab 4/30 avec LabChart 7 </li></ol></li><li> Mesure du volume de l&#39;infarctus <ol class="lalpha"><li> Cerveau de rat matrice (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis) </li><li> 2,3,5-triphényltétrazolium (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) dilué à 0,05% dans du PBS </li><li> Scanner à plat (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J logiciels (ImageJ 1.42q logiciel, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol> 1. Pré-chirurgicaux étapes <ol><li> Avant la chirurgie, les rats sont logés sous un 12:12 lumière / obscurité cycle avec libre accès à l&#39;eau et rongeur. </li><li> L&#39;anesthésie est induite avec 4% d&#39;isoflurane dans 100% d&#39;O 2 en mélange de gaz d&#39;une chambre d&#39;induction jusqu&#39;à ce que le rat ne retraits pincée patte arrière. </li><li> Atechnique septique doit être maintenue au cours de cette procédure, y compris l&#39;utilisation de gants stériles, stériles instruments chirurgicaux, et un drapé chirurgical stérile 11. </li><li> La couronne de la tête est rasée avec une tondeuse à cheveux électriques. </li><li> Le rat est placé dans la position couchée sur un coussin absorbant allongé sur une surface de commande à régulation de température (couverture thermique). </li><li> La tête est placée dans l&#39;appareil de stéréotaxie en commençant par le placement de la face d&#39;un masque à gaz anesthésique. </li><li> Ensuite, les barres d&#39;oreilles sont insérés et serrés. </li><li> Au cours de la procédure d&#39;anesthésie est maintenue avec 2% d&#39;isoflurane dans 100% d&#39;O mélange de gaz 2. </li><li> Pommade ophtalmique lubrifiant est appliqué sur les deux yeux, et les paupières sont fermées pour empêcher la dessiccation oeil pendant la procédure chirurgicale. </li><li> Une sonde de température rectale est insérée pour maintenir une température constante pour animaux noyau de 37 ± 0,5 ° C. </li><li> Avec la tête fermement maintenue dans le stéréotaxiquedispositif, la zone chirurgicale est nettoyée avec une alternance de chlorhexidine à 2% et salines trois fois. </li></ol> 2. Étapes chirurgicales <ol><li> Avec un scalpel, une incision médiane est faite sur la peau recouvrant la voûte du crâne des aspects les plus caudales des yeux (nasion) à entre les oreilles (ligne nuchale supérieure). </li><li> La peau est ensuite rétracté latéralement avec des pinces bulldog 3. </li><li> Le tissu conjonctif est retirée du crâne à l&#39;aide des cotons-tiges sèches de sorte que de multiples structures peut être vu clairement. Il s&#39;agit notamment de bregma, la suture coronale, et l&#39;arête latérale droite du crâne. Des cotons-tiges sont utilisées pour éliminer le sang du champ opératoire. </li><li> En utilisant le microscope d&#39;opération, se trouve bregma, et les manipulateurs stéréotaxiques sont ajustées jusqu&#39;à ce que la fraise de forage rond 1,0 mm est mis à zéro au bregma. </li><li> La fraise de forage est ensuite déménagé à 1,6 mm et 5,2 mm antérieure latérale au bregma. </li><li> Un trou de fraise qui pénètre le crâne est percé pour cannula placement (Figure 1). Excès de débris et de sang sont toujours effacées en utilisant des cotons-tiges. </li></ol> À ce stade, une canule de guidage peut être inséré (étape 7) ou une liaison directe ET-1 injection dans le trou fraise peut être effectuée (passez directement à l&#39;étape 16). <ol start="7"><li> Ensuite, les trous de fraises pour 3 vis de fixation sont percés à travers une épaisseur partielle du crâne à l&#39;aide d&#39;un foret de 1,0 mm inversé cône fraise (Figure 1). Un trou est percé dans chaque os frontal environ 1-2 mm en avant de la suture coronale et 1-2 mm en dehors de la suture sagittale. Un trou est percé dans l&#39;os pariétal environ 2-3 mm en arrière de la suture coronale et 2-3 mm en dehors de la suture sagittale ipsilatéral à l&#39;orifice de guidage de canule fraise. Trois 0-80 x 3/32 vis de fixation sont placés dans ces trous fraises et fournira un soutien pour le ciment de la canule. Les vis doivent être avancé 2 ou 3 tours afin de ne pas endommager la dure-mère. </li&gt; <li> La canule de guidage est placé dans le porte-canule et bregma stéréotaxique est situé. </li><li> Les manipulateurs stéréotaxiques sont ajustés jusqu&#39;à ce que la canule guide est remis à zéro à bregma. La canule est déplacée vers le trou situé fraise 1,6 mm et 5,2 mm antérieur à bregma latéral. </li><li> Enfin, la canule de guidage est descendu dans le trou de la fraise avec la position de la pointe finale de 4,5 mm à bregma ventrale. </li><li> Laser Doppler placement de la sonde de débit (en option) <ol class="lalpha"><li> Afin de contrôler le débit sanguin cérébral utilisant FDL, un porte-sonde peut être placée en position avant de fixer la canule de guidage avec un ciment dentaire. </li><li> La base porte-sonde est coupée au ras du piédestal à l&#39;exception de l&#39;onglet petite cale en forme. </li><li> Le support de sonde est alors placée en arrière de la canule de guidage et vient en dedans de l&#39;arête latérale du crâne avec la languette orientée en dedans (Figure 1). </li><li> Le support de sonde et guide canule sont fixés ensemble par un ciment. </li></ol></li><li> Ciment dentaire est ensuite utilisé pour fixer la canule en place. Le ciment est en contact avec les trois vis et entoure l&#39;ensemble de la base de la canule. </li><li> Le ciment doit être complètement sec avant le retrait du porte-canule. Cela prend environ 5 min. </li></ol> Après ces étapes, l&#39;incision chirurgicale peut être fermé et le mannequin canule peut être vissée dans la canule de guidage. Alternativement, l&#39;ET-1 induite par MCAO peuvent être effectuées sur le rat après une période de récupération de la chirurgie d&#39;implantation canule. Pour cette méthode, l&#39;étape 19 doit être effectuée suivant les étapes 14-18 et peut être effectuée à une date ultérieure. Pour effectuer une canule guide de l&#39;implantation et de l&#39;ET-1 injection au cours de la même intervention chirurgicale, l&#39;étape 14 doit être effectuée suivant. <ol start="14"><li> La seringue de perfusion est chargé avec ET-1 (diluée à 80 uM dans du PBS) et ensuite monté dans l&#39;injecteur stéréotaxique. </li><li> Lamanipulateurs stéréotaxiques sont ajustées jusqu&#39;à ce que la pointe de l&#39;aiguille est mise à zéro au niveau du bord de la canule de guidage. </li><li> La pointe de l&#39;aiguille est abaissée à travers la canule de guidage jusqu&#39;à une position de 17,2 mm du bord ventral de la canule de guidage. Si une canule guide n&#39;est pas utilisée, la pointe de l&#39;aiguille est remis à zéro à bregma et abaissée par le trou de la fraise pour une position ventrale à 8,7 mm du bregma. </li><li> 3 ul de 80 uM ET1 est perfusée à un débit de 1 l par min. </li><li> La seringue est laissée en place pendant 3 min après la perfusion est terminée et ensuite lentement retirée. </li><li> L&#39;incision est fermée par suture de nylon 3,0 et le mannequin canule est vissée dans la canule. </li><li> Une dose d&#39;analgésique approprié (c.-buprénorphine à 0,05-0,1 mg / kg) doit être utilisé après la chirurgie pour réduire la douleur et l&#39;inconfort pendant la période de récupération. </li><li> Le rat est retiré de la salle d&#39;opération et placé dans un endroit chaud et sec de récupération pour éviter l&#39;hypothermie, avec un accès gratuit et facile à la nourriture et à l&#39;eau douce. </li&gt; </ol>

<ol><li>Stroke--1989. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recommendations+on+stroke+prevention%2C+diagnosis%2C+and+therapy.+Report+of+the+WHO+Task+Force+on+Stroke+and+other+Cerebrovascular+Disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders.</a> Stroke. 20, 1407-1431 (1989).</li>
<li>Lloyd-Jones, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heart+disease+and+stroke+statistics--2009+update%3A+a+report+from+the+American+Heart+Association+Statistics+Committee+and+Stroke+Statistics+Subcommittee%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Heart disease and stroke statistics--2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee.</a> Circulation. 119, 480-486 (2009).</li>
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<li>Robinson, M. J., Macrae, I. M., Todd, M., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+local+cerebral+blood+flow+to+pathological+levels+by+endothelin-1+applied+to+the+middle+cerebral+artery+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci.+Lett%22%5BJournal%5D)">Reduction of local cerebral blood flow to pathological levels by endothelin-1 applied to the middle cerebral artery in the rat.</a> Neurosci. Lett. 118, 269-272 (1990).</li>
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<li>Braeuninger, S., Kleinschnitz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+of+focal+cerebral+ischemia%3A+procedural+pitfalls+and+translational+problems%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Transl.+Stroke+Med%22%5BJournal%5D)">Rodent models of focal cerebral ischemia: procedural pitfalls and translational problems.</a> Exp. Transl. Stroke Med. 1, 8(2009).</li>
<li>Tomsick, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intravenous+thrombolysis+for+acute+ischemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Interv.+Radiol%22%5BJournal%5D)">Intravenous thrombolysis for acute ischemic stroke.</a> J. Vasc. Interv. Radiol. 15, 67-76 (2004).</li>
<li>Olsen, T. S., Lassen, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dynamic+concept+of+middle+cerebral+artery+occlusion+and+cerebral+infarction+in+the+acute+state+based+on+interpreting+severe+hyperemia+as+a+sign+of+embolic+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">A dynamic concept of middle cerebral artery occlusion and cerebral infarction in the acute state based on interpreting severe hyperemia as a sign of embolic migration.</a> Stroke. 15, 458-468 (1984).</li>
<li>Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Principles+of+rodent+surgery+for+the+new+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Principles of rodent surgery for the new surgeon.</a> J. Vis. Exp. (47), e2586(2011).</li>
<li>Gonzalez, C. L., Kolb, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+different+models+of+stroke+on+behaviour+and+brain+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A comparison of different models of stroke on behaviour and brain morphology.</a> Eur. J. Neurosci. 18, 1950-1962 (2003).</li>
<li>Ansari, S., Azari, H., McConnell, D. J., Afzal, A., Mocco, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraluminal+middle+cerebral+artery+occlusion+%28MCAO%29+model+for+ischemic+stroke+with+laser+doppler+flowmetry+guidance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke with laser doppler flowmetry guidance in mice.</a> J. Vis. Exp. (51), e2879(2011).</li>
<li>Sharkey, J., Butcher, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterisation+of+an+experimental+model+of+stroke+produced+by+intracerebral+microinjection+of+endothelin-1+adjacent+to+the+rat+middle+cerebral+artery%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">Characterisation of an experimental model of stroke produced by intracerebral microinjection of endothelin-1 adjacent to the rat middle cerebral artery.</a> J. Neurosci. Methods. 60, 125-131 (1995).</li>
<li>Macrae, I. M., Robinson, M. J., Graham, D. I., Reid, J. L., McCulloch, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelin-1-induced+reductions+in+cerebral+blood+flow%3A+dose+dependency%2C+time+course%2C+and+neuropathological+consequences%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cereb.+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Endothelin-1-induced reductions in cerebral blood flow: dose dependency, time course, and neuropathological consequences.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 13, 276-284 (1993).</li>
<li>Mecca, A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebroprotection+by+angiotensin-%281-7%29+in+endothelin-1-induced+ischaemic+stroke%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Cerebroprotection by angiotensin-(1-7) in endothelin-1-induced ischaemic stroke.</a> Exp. Physiol. 96 (1-7), 1084-1096 (2011).</li>
<li>Fisher, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+of+the+stroke+therapy+academic+industry+roundtable+preclinical+recommendations%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%22%5BJournal%5D)">Update of the stroke therapy academic industry roundtable preclinical recommendations.</a> Stroke. 40, 2244-2250 (2009).</li>
</ol>

Aucun conflit d&#39;intérêt déclaré.

L&#39;ET-1 induite par MCAO est un modèle établi d&#39;accident ischémique cérébral expérimental qui est régulièrement utilisé dans plusieurs souches de rats. De nombreuses variables, comme souche de rats, de l&#39;âge des animaux, la température du corps, la méthode de l&#39;anesthésie et de l&#39;expertise opérateur peut conduire à une plus grande variabilité des volumes d&#39;infarctus en utilisant ce modèle 5, 14. Toutefois, plusieurs chercheurs ont montré que les avantages de ce modèle comprennent l&#39...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td></td><td><ol><li> Animaux: Huit semaines d&#39;âge, de sexe masculin, Sprague Dawley (Charles River Farms, Wilmington, MA, USA) pesant 250-300 g au moment de la chirurgie. </li><li> Anesthésie <ol class="lalpha"><li> Système d&#39;anesthésie par inhalation (VetEquip Inc, Pleasanton, CA, USA) </li><li> L&#39;isoflurane anesthésie (Pharmacie Baxter, Deerfield, IL, USA) </li></ol></li><li> Stéréotaxique système (David Kopf Instruments, Tujunga, CA, USA) <ol class="lalpha"><li> Petit système stéréotaxique animaux </li><li> Non-rupture des barres d&#39;oreilles pour les rats </li><li> Support de la tête anesthésie gazeuse pour les rats </li></ol></li><li> Régulation de la température <ol class="lalpha"><li> BAT-12 Thermomètre microsonde (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> T / PUMP, TP600 couverture thermique (Gaymar Industries, Inc, Orchard Park, État de New York, Etats-Unis) </li></ol></li><li> Les instruments chirurgicaux <ol class="lalpha"><li> Manche de bistouri n ° 11 et la lame, pince à iris, Graefe pince, pince bulldog écarteurs, tournevis, une seringue de 10 ul avec 26 aiguille de la jauge biseautée (World Precision Instruments, Inc, Sarasota, Floride, Etats-Unis) </li><li> Micromoteur foret et porte stéréotaxique, Quintessential stéréotaxique injecteur (Stoelting, Wood Dale, IL, USA) </li><li> 1,0 mm fraise foret rond, 1,0 mm inversé foret conique fraise (Roboz chirurgical Instrument Co., Inc, Gaithersburg, MD, USA) </li></ol></li><li> Fournitures chirurgicales <ol class="lalpha"><li> Les vis de fixation 0-80 X 3/32 avec 2,4 mm longueur de l&#39;arbre, de calibre 21 guide de canule [4mm de long sous le pylône] et factice canule (Plastics One, Roanoke, Virginie, États-Unis) </li><li> Acrylique prothèse Jet et liquides (Lang Dental Manufacturing Co., Inc, Chicago, IL, USA) </li><li> 3,0 nylon suture (Oasis, Mettawa, IL, USA) </li><li> Des cotons-tiges, pommade ophtalmique Puralube (Fisher Scientific, Pittsburg, PA, USA) </li><li> Tondeuses à cheveux électriques (Oster, Providence, RI, USA) </li></ol></li><li> Produits chimiques <ol class="lalpha"><li> L&#39;endothéline-1 (American Peptide, Sunnyvale, CA, USA) </li><li> Chlorhexidine à 2% (Agrilabs, St. Joseph, MO, USA) </li><li> La buprénorphine HCl (Hospira Inc, Lake Forest, IL, USA) </li></ol></li><li> Équipements de visualisation <ol class="lalpha"><li> Microscope chirurgical (Seiler Instrument et fabrication; St. Louis, MO, USA) </li><li> Fibre optique d&#39;éclairage (Techniquip Corp, Livermore, CA, USA) </li></ol></li><li> Laser Doppler système (ADInstruments, Inc, Colorado Springs, CO, USA) <ol class="lalpha"><li> Sonde standard Crayon </li><li> Porte-sonde </li><li> Débitmètre sanguin </li><li> Powerlab 4/30 avec LabChart 7 </li></ol></li><li> Mesure du volume de l&#39;infarctus <ol class="lalpha"><li> Cerveau de ratmatrice (Zivic-Miller Lab., Inc, Allison Park, Pennsylvanie, Etats-Unis) </li><li> 2,3,5-triphényltétrazolium (Sigma-Aldrich, St Louis, MO, USA) dilué à 0,05% dans du PBS </li><li> Scanner à plat (Epson Perfection V30, Epson America, Inc, Long Beach, CA, USA) </li><li> Image J logiciels (ImageJ 1.42q logiciel, US National Institutes of Health, Bethesda, MA, USA) </li></ol></li></ol></td></tr></tbody></table>

l&#39;endothéline-1 induite moyen modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour avc ischémique avec guidage laser doppler chez le rat

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

L&#39;AVC est la première cause de handicap et la troisième cause de décès dans le monde, ce qui coûte une somme estimée à 70 milliards de dollars aux États-Unis en 2009 1, 2. Plusieurs modèles d&#39;ischémie cérébrale ont été développés pour simuler la condition humaine d&#39;accident vasculaire cérébral. Il a été suggéré que jusqu&#39;à 80% de tous les accidents vasculaires cérébraux résultat de lésions ischémiques dans l&#39;artère cérébrale moyenne (ACM) la zone 3. Dans les années 1990, l&#39;endothéline-1 (ET-1) 4 a été utilisé pour induire une ischémie en l&#39;appliquant directement adjacente à la surface de la MCA après la craniotomie. Plus tard, ce modèle a été modifié 5 en utilisant une injection stéréotaxique de l&#39;ET-1 à côté du MCA pour produire une ischémie cérébrale focale. Les principaux avantages de ce modèle incluent la possibilité d&#39;effectuer la procédure rapidement, la capacité de contrôler la constriction artérielle en modifiant la dose d&#39;ET-1 livré, pas besoin de manipuler les vaisseaux extra-crâniennes fournissant le sang au cerveau ainsi que progressive reperfusile taux aussi proche que possible de la reperfusion chez l&#39;homme 5-7. D&#39;autre part, le modèle de l&#39;ET-1 présente des inconvénients qui comprennent la nécessité d&#39;une craniotomie, ainsi que plus grande variabilité du volume d&#39;éjection 8. Cette variabilité peut être réduite par l&#39;utilisation du laser Doppler (LDF) afin de vérifier l&#39;ischémie cérébrale au cours de l&#39;ET-1 perfusion. Facteurs qui influent sur ​​la variabilité AVC comprennent la précision de la perfusion et le lot de l&#39;ET-1 utilisé 6. Une autre considération importante est que, bien que la reperfusion est un phénomène fréquent dans la course humaine, la durée de l&#39;occlusion de l&#39;ET-1 induite par MCAO peut pas imiter au mieux que d&#39;accident vasculaire cérébral humain où de nombreux patients ont reperfusion partiel sur une période de quelques heures à quelques jours après l&#39;occlusion 9, 10. Ce protocole décrit en détail l&#39;ET-1 induite par MCAO modèle d&#39;AVC ischémique chez le rat. Il sera également attirer l&#39;attention sur les considérations spéciales et les inconvénients potentiels tout au long de la procédure.

1. Post-Op évaluation neurologique Après que l&#39;animal ne reprenne conscience, une grande variété de tests peuvent être utilisés pour évaluer les déficits neurologiques, y compris l&#39;équilibre, la force de préhension, mise patte, asymétrie posturale et l&#39;escalier d&#39;escalade. La tâche de graines de tournesol est une évaluation brute des fonctions motrices et sensorielles qui présente une corrélation significative avec volume de l&#39;infarctus 7, 12. Au cours de cette tâ...

Plusieurs modèles animaux d&#39;ischémie cérébrale ont été développés pour simuler la condition humaine d&#39;accident vasculaire cérébral. Ce protocole décrit l&#39;endothéline-1 (ET-1) induit par une occlusion de l&#39;artère cérébrale moyenne (MCAO) modèle d&#39;AVC ischémique chez le rat. En outre, des considérations importantes, les avantages et les inconvénients de ce modèle sont discutées.

L&#39;endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l&#39;artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Ce protocole vidéo décrit un modèle d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne induite par l’endothélium pour l’AVC ischémique avec guidage inflammatoire par laser Doppler chez le rat. Ceci est réalisé en observant plusieurs points de repère comme indiqué et en injectant un endothélial à travers un trou de bavure avec ou sans l’utilisation d’une canule de guidage. De multiples méthodes d’ischémie cérébrale ont été mises au point pour modéliser l’état humain de l’AVC.Un modèle implique l’injection d’un endothélial vasoconstricteur puissant ou 81 dans le cerveau du cerveau adjacent à l’artère cérébrale moyenne après une tumeur crânienne. Les principaux avantages du modèle ET one stroke sont que la chirurgie peut être effectuée rapidement et qu’elle est moins invasive par rapport à d’autres modèles tels que l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne induite par des filaments intraluminaux. Cependant, le modèle ET un coup présente certains inconvénients, notamment la nécessité d’une craniotomie ainsi qu’une plus grande variabilité du volume systolique.Cette vidéo démontrera par étapes le modèle ET un coup pour l’AVC ischémique chez le rat. Nous aborderons également plusieurs considérations particulières ainsi que les pièges courants de cette procédure. Alors commençons.L’anesthésie est induite avec 4 % de fluor ISO dans l’oxygène dans une chambre d’induction et est maintenue pendant la chirurgie à 2 % Après l’anesthésie du rat, les cheveux sont retirés de la couronne de la tête avec une tondeuse à cheveux électrique. Le rat est ensuite placé en position couchée sur un tampon de gaze posé sur une surface de fonctionnement à température contrôlée, la tête placée dans l’appareil stéréotaxique. Les barres d’oreille sont ensuite resserrées et ajustées.Une pommade ophtalmique lubrifiante est appliquée sur les deux yeux pour prévenir la dessiccation oculaire. Au cours du processus chirurgical, le cuir chevelu est ensuite nettoyé avec une solution de chlorhexidine et une solution saline stérile. Une incision médiane est pratiquée sur la peau recouvrant le calvarium, entre les aspects les plus dorlotés des yeux et entre les oreilles.Ensuite, la peau est rétractée latéralement. Des cotons-tiges secs sont utilisés pour déplacer le tissu conjonctif latéralement, de sorte que des points de repère osseux peuvent être observés. La perceuse est ensuite déplacée à 1,6 millimètre en avant et à 5,2 millimètres latéralement par rapport au torema.Un petit trou de fraise est ensuite percé à cet endroit, qui devrait pénétrer dans le crâne sans endommager la dure-mère. Ensuite, la foreuse est déplacée d’environ trois à quatre millimètres pour forer trois trous peu profonds et espacés. Cela servira de placement pour Trois vis d’ancrage de montage, vissez partiellement trois vis de montage qui fourniront un support pour le maintien du ciment dans la canule de guidage.Un guide en acier inoxydable de calibre 21. La canule est ensuite insérée dans le trou de la fraise à 4,5 millimètres en dessous de bgma. Un support de sonde photométrique laser Doppler est ensuite placé juste en arrière de la canule guide et en milieu par rapport au crâne latéral.Le ciment Ridge Dental est utilisé pour fixer la canule et le porte-sonde en place. Il est important de façonner le ciment de manière à ce qu’il soit en contact avec les trois vis en évitant la peau. La fixation stéréotaxique du bras est ensuite retirée une fois que le ciment est complètement sec.Pour enregistrer le flux sanguin de l’artère cérébrale moyenne. Une sonde inflammatoire laser Doppler est ensuite placée dans le support de sonde. Une seringue Hamilton de calibre 26 est chargée d’une seringue endothéliale fraîche de 80 micromolaires et chargée dans une pompe d’injection automatique.À l’aide des attaques stéréo, l’aiguille de la seringue Hamilton est abaissée jusqu’à ce qu’elle touche le bord de la canule de guidage. L’aiguille est ensuite abaissée ventralement de 17,2 millimètres à travers la canule de guidage et trois microlitres d’endothélium. On injecte à un débit d’un microlitre par minute à l’aide de la photométrie laser Doppler.Vous pouvez voir que le flux sanguin diminue de plus de 50 % par rapport à la ligne de base. Après quelques minutes avec le temps, il revient progressivement vers la valeur de base. Quelques minutes après la fin de l’injection, l’aiguille est retirée doucement de la canule de guidage.Enfin, la plaie est fermée par une suture et la canule est bouchée. Pour évaluer le degré de déficit de l’AVC, différents examens neurologiques peuvent être effectués. C’est un exemple de la tâche de manger des graines de tournesol.Les rats sont évalués à la fois sur le temps qu’il leur faut pour consommer cinq graines et sur le nombre de morceaux de coquille laissés derrière. Les rats avec un déficit de course plus important consommeront les graines plus lentement et laisseront plus de morceaux de coquille derrière eux. En plus des examens neurologiques, le volume de l’infarctus peut également être évalué à l’aide de la coloration TTC, comme décrit en détail dans un protocole vidéo séparé, qui peut être trouvé à l’adresse à l’écran.L’occlusion de l’artère cérébrale moyenne induite par l’ET est un modèle d’AVC ischémique régulièrement utilisé chez les espèces murines. Cette méthode permet de contrôler la constriction artérielle en modifiant la dose d’ET délivrée et progressivement, par opposition à une reperfusion abrupte qui imite plus étroitement celle chez les humains humains. Bien que la reperfusion soit fréquente dans l’AVC humain, la reperfusion de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne induite par la TE un peut ne pas imiter étroitement celle de l’AVC humain, où la plupart des patients ont une reperfusion au moins partielle, mais sur une période de quelques heures à quelques jours après l’occlusion.Un autre inconvénient de la méthode ET one stroke est que de nombreuses variables telles que la tension chez le rat, l’âge, le poids ainsi que l’expertise de l’opérateur peuvent entraîner des incohérences et des volumes d’infarctus. Cependant, cette variabilité peut être réduite par l’utilisation d’un arbre de flux laser Doppler pour vérifier l’ischémie cérébrale pendant une perfusion TE. Enfin, la constriction rapide et la reperfusion progressive au cours de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne induite par la TE pourraient imiter de près le vasospasme observé après une hémorragie sous-arachnoïdienne.Par conséquent, ce modèle pourrait également être un outil utile pour étudier l’ischémie qui se produit lors d’événements de vasospasme. Nous espérons que vous avez trouvé cette vidéo utile, et bonne chance dans vos expériences.

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Focale modèle d&#39;ischémie cérébrale par occlusion suture endovasculaire de l&#39;artère cérébrale moyenne chez le rat

Le intraluminale de l'artère cérébrale occlusion (MCAO) est le modèle le plus fréquemment utilisé chez les modèles expérimentaux ischémiques AVC. Ici, nous allons démontrer tout le modèle en détail avec le guide de Laser Doppler, et ses résultats représentatifs.

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Un modèle murin des dommages rétiniens ischémiques induits par occlusion commune transitoire d’artère carotide

Ce protocole décrit le modèle d’ischémie cérébrale focale transitoire chez la souris par occlusion intraluminale de l’artère cérébrale moyenne. De plus, des exemples d’évaluation des résultats sont présentés à l’aide de l’imagerie par résonance magnétique et de tests comportementaux.

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Le protocole actuel décrit un modèle de rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne qui préserve la structure anatomique des vaisseaux cérébraux sans causer de dommages.

Un modèle chez le rat d’occlusion/reperfusion de l’artère cérébrale moyenne sans endommager la structure anatomique des vaisseaux cérébraux

Ce protocole présente un guide étape par étape pour les chercheurs afin d’effectuer la procédure d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne sur des souris en utilisant la méthode modifiée de l’artère carotide externe Longa. Les modifications présentées dans cet article visent à augmenter la précision de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne et à assurer une reperfusion complète.

Optimisation de la méthode d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne Longa pour une reperfusion complète

Une intervention chirurgicale mini-invasive est présentée ici, qui consiste à placer la sonde laser Doppler sur le crâne au-dessus de la région distale de l’artère cérébrale moyenne (ACM), une position périorbitaire adaptée aux rats et aux souris, afin d’évaluer le flux sanguin lors de l’occlusion transitoire de l’ACM.

Placement périorbitaire d’une sonde laser Doppler pour la surveillance du débit sanguin cérébral avant l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne chez des modèles de rongeurs

Ce protocole décrit le processus de préparation à la reperfusion de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne via l’artère carotide commune.

Préparation d’un modèle modifié pour la reperfusion de l’occlusion de l’artère cérébrale moyenne

Découvrez le modèle d'occlusion de l'artère cérébrale moyenne induite par endothéline-1 chez le rat avec guidage Doppler laser. Cette méthode permet d'étudier l'AVC ischémique de façon moins invasive.

L'endothéline-1 induite Moyen Modèle occlusion de l'artère cérébrale pour AVC ischémique avec guidage laser Doppler chez le rat

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