Modification génétique et la recombinaison des cultures d'organes salivaires Gland

L’objectif global de cette procédure est de modifier l’expression d’une protéine souhaitée dans l’épithélium de la souris, la glande salivaire sous-mandibulaire embryonnaire à l’aide de constructions adénovirales. Ceci est accompli en récoltant des embryons au 13e jour embryonnaire et en disséquant les glandes salivaires sous-mandibulaires. Ensuite, les rudiments épithéliaux sont séparés du mésenchyme environnant et trempés dans une culture contenant le virus.

Après lavage, le rudiment est incubé dans un milieu contenant du matrigel, et nous combinons avec trois des mésenchymes pour la culture ex vivo des changements dans les niveaux de protéines ciblées et son effet sur la morphogenèse ramifiée peut être analysé à l’aide de l’immunochimie et de la microscopie standard ou de l’analyse sanguine occidentale. Cette technique nous permet de modifier génétiquement un seul compartiment tissulaire dans un organe complexe et de surveiller les changements dans un organe entier réassemblé sans créer un organisme transgénique. Le principal avantage de cette technique par rapport aux méthodes existantes est qu’elle permet l’expression d’une protéine négative de type sauvage ou dominante dans le compartiment épithélial.