L'état d'équilibre des mesures cinétiques, pré-état stationnaire, et un seul chiffre d'affaires de l'activité de ADNglycosylase

L’objectif général de l’expérience suivante est de déterminer les taux d’excision et de libération de produit pour l’excision et la libération de produit pour l’OXO Guine glycosylate d’ADN humain à l’aide de techniques cinétiques rapides. Ceci est réalisé en mesurant d’abord une évolution temporelle à l’état stationnaire avec une faible concentration enzymatique pour déterminer si une phase rapide se produit lors du premier renouvellement. Si le premier renouvellement est rapide, l’évolution temporelle à l’état d’équilibre n’extrapole pas à zéro, mais reflète plutôt la concentration enzymatique active comme deuxième étape.

Le taux de formation du produit pendant l’état pré-stationnaire peut être mesuré par des techniques de mélange et de trempe rapides avec une concentration enzymatique plus élevée pour observer une quantité importante de produit lors du premier retournement. Ensuite, l’étape chimique peut également être surveillée dans des conditions de renouvellement unique où le substrat est saturé d’enzymes. Afin d’isoler les événements au site actif de l’enzyme sans cycle catalytique, les résultats montrent que la libération du produit de l’enzyme est limitée en termes de vitesse pendant l’état stationnaire, sur la base de l’observation que le cours temporel n’extrapole pas à un produit nul à temps zéro.