Name: Kök Hücreleri Retina pigment epiteli hücrelerinin Verimli türetilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-08T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 7 s
Description: Keşfedin kök hücrelerden retina pigment epiteli hücrelerinin verimli türetilmesi yöntemini. Tanımlı faktörlerle hızlandırılan bu protokol, yüksek kaliteli RPE üretimi için tekrarlanabilir bir yöntem sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Aşağıdaki kişilere teşekkür etmek istiyoruz: Dr. Tim Krohne ve Eyal Banin (Dr. Mandy Lehmann ve David Friedlander ile birlikte) farklılaşma protokollerinin geliştirilmesindeki cömert yardımları için. Dr. Felicitas Bucher, bu çalışmada kullanılan RPE hücrelerinin ayırt edilmesine yardımcı oldu. Ayrıca Ulusal Göz Enstitüsü'ne (NEI EY11254 ve EY021416 hibeleri), California Rejeneratif Tıp Enstitüsü'ne (CIRM hibesi TR1-01219) ve Lowy Tıbbi Araştırma Enstitüsü'ne (LMRI) bu proje için çok cömert fonlar için teşekkür ederiz.

Kök Hücre kaynaklı RPE 1. Yönetmen Farklılaşma Not: Tüm bekletme işlemleri,% 5 CO2 içinde 37 ° C sıcaklıkta gerçekleştirilmektedir <ol style="margin-left: 40px;"><li> Bakım medya (Tablo 1 MM) de embriyonik kök veya HIPS hatları (günlük yem) koruyun. Hat kalite kontrol yeterli standartlarını yakalamış sonra, fare embriyonik besleyici bir hücre tabakası bunları muhafaza (MEF&#39;ler) 250,000 olan bir yoğunluk / gözenek bir altı yuvalı plaka olarak tohumlanır. Xeno içermeyen kültürler de Tucker ve ark. 40 tarafından oluşturulan protokol takip edilerek üretilebilir. </li><li> Kök hücre kolonileri confluency ulaşmak için bekleyin. </li><li> Nikotinamid (Tablo 1 DM / NIC) ile farklılaşma medya geçin; Günlük yem. </li><li> RPE farklılaşmasını geliştirmek, kültür üç hafta sonra, nikotinamid ve ya Aktivin-A veya IDE-1 (Tablo 1 DM / NIC / AA veya DM / NIC / ide1) ile farklılaşma medya geçmek. </li&gt; <li> Kültür beş hafta sonra, DM / NIC geri dönün. Günlük beslenmeye artık beslendikten sonra sarı bir gün dönüm medya durağı pH göstergelerinin kez gereklidir. </li><li> (Şekil 2D F ve 3A bakınız) kadar kesilmesi ve alınması için büyük görünmesi pigmentli hücre adacıkları bekleyin. </li></ol> 2. Yalıtımlı Pigmentli Islets <ol style="margin-left: 40px;"><li> Coat doğal hücre ortamı (xeno-ücretsiz tercih edilir) taklit eden bir matris ile 24 plaka kuyu. NOT: Kornea bıçaklar ve keskin, ince uçlu forseps seçmek için çok yararlıdır. toplama sırasında farklılaşmış hücrelerin tüm levha ayırabilirsiniz. Dikkatli çalışıyor ve başlangıçta yemeğin ortasında koloniler seçerek bu kaçının. </li><li> (Tablo 1 DM) gerektiği gibi farklılaşma ortam maddesi ile 24 oyuklu plaka gibi çok sayıda çukur doldurun. Pigmentli koloni sayısına bağlı olacaktır Bu kararToplanan. </li><li> Diseksiyon kapsamı ile bir hücre kültürü kaputu, el pigmentli adacıklar kesip. Yaklaşık 2-6 adet bir neşter kullanılarak orijinal plaka altındaki her adacık kıymak ve keskin forseps ile pigmentli parçaları kapmak. </li><li> Her 24 kuyunun içine 1-2 adet pigmentli aktarın. </li><li> Hücreler uygun kadar 3-5 gün süreyle ortamı değiştirmek etmeyin, daha sonra Ortam haftada üç kez değişen başlar. (Bu saatten sonra uygun değilse, olabilirlik onlar asla o iyidir). </li><li> (Tablo 1 DM) - tipik kültür bir görüntü Şekil 3B&#39;de gösterilmiştir farklılaşma ortamda 3-4 hafta boyunca hücrelerin aç. Hücreler hala tüm kuyu doldurmak olmayabilir ama uzun bekleme yardım görünmüyor. Haftada hücreler üç kez besleyin. </li><li> Yaklaşık 3 hafta sonra, elle keskin forseps ile gerekirse kümeleri beyaz hücrelerin kümeleri kaldırın. Gerekli olmadıkça bu adımı yapmayın - bu kirletici tanıtmak için kolaydır. Bu ideal birAdım 1.6 orijinal pigmentli koloniler gelen RPE saf popülasyonlarının edinmeye çalışın. </li></ol> 3. Pasajlanması Kök Hücre türetilen RPE <ol style="margin-left: 40px;"><li> Bir hücre ayrışma çözeltisi ile 200 ul hücreleri ayırmak 37 ° C&#39;de 5-8 dakika boyunca (tercihen seyreltme tercih edilir ile inaktive edilebilir reaktif-a, tripsin olan), ve DM ile sulandırarak bu etkisiz hale getirirler. Tüm hücreleri yıkayın ve (iki 24-kuyulardan hücreleri havuzu düşünün, sadece bir kaç hücreleri içeren iyi seçtiyseniz) onları tekrar süspansiyon 200 ul pipet kullanın. </li><li> Santrifüj (5 dakika için 800 xg), 3 ml DM medya süpernatant ve tekrar süspansiyon atın. </li><li> Yeniden plaka hücreleri bir (veya iki) oyuk başına DM 3 ml bir matris kaplı 6-kuyuya 24 kuyu ile ilgili (1: 5 genişleme). </li><li> Hücreler ~ 90% konfluent kadar 1-2 hafta genişlet; tam olarak farklılaşmış saf kültürünün bir görüntü Şekil 3C &#39;de gösterilmiştir. </li><li> 1 ml hücre d hücreleri ayırmak37 ° C&#39;de yaklaşık 5-8 dakika boyunca issociation Çözelti, DM ile seyreltme ile inaktive tüm hücreleri yıkamak için 1000 ul pipet kullanın, ve bunları yeniden süspanse edin. </li><li> (5 dk için 800 xg) Spin 18 ml DM medyada süpernatant ve tekrar süspansiyon atın. </li><li> (: 6 genişletme 1) ya da 75 cm 2 balon içinde bir kaplanmış (1: 7.5 genişleme) altı matris içine bir 6-yuvalı her birinden yeniden plaka hücreleri, oyuk başına DM 3 ml 6-kuyu kaplama. </li><li> Yeterli hücre elde edilinceye kadar tekrarlayın 3.4-3.8 olarak gerekli adımları. NOT: yerine her geçiş RPE dediferansiyonunu indükler beri Pasajlanması aracılığıyla kültürleri yükseltmek için planlama daha genişleme için mümkün olduğunca çok koloniler toplamaya çalışın. </li></ol>

<ol><li>Strauss, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+retinal+pigment+epithelium+in+visual+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">The retinal pigment epithelium in visual function.</a> Physiol Rev. 85 (3), 845-881 (2005).</li>
<li>Congdon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Causes+and+prevalence+of+visual+impairment+among+adults+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Causes and prevalence of visual impairment among adults in the United States.</a> Arch Ophthalmol. 122 (4), 477-485 (2004).</li>
<li>Friedman, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+age-related+macular+degeneration+in+the+United+States%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Prevalence of age-related macular degeneration in the United States.</a> Arch Ophthalmol. 122 (4), 564-572 (2004).</li>
<li>Resnikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+data+on+visual+impairment+in+the+year%5BTitle%5D)+AND+%22Bull+World+Health+Organ%22%5BJournal%5D)">Global data on visual impairment in the year.</a> Bull World Health Organ. 82 (11), 844-851 (2002).</li>
<li>Bird, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+targets+in+age-related+macular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Therapeutic targets in age-related macular disease.</a> The Journal of Clinical Investigation. 120 (9), 3033-3041 (2010).</li>
<li>Jong, P. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Age-related macular degeneration.</a> N Engl J Med. 355 (14), 1474-1485 (2006).</li>
<li>Binder, S., Stanzel, B. V., Krebs, I., Glittenberg, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Progress+In+Retinal+And+Eye+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation+of+the+RPE+in+AMD%22%5BJournal%5D)">Progress In Retinal And Eye Research.</a> Transplantation of the RPE in AMD. 26 (5), 516-554 (2007).</li>
<li>Cruz, L., Chen, F. K., Ahmado, A., Greenwood, J., Coffey, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((RPE+transplantation+and+its+role+in+retinal+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Progress+In+Retinal+And+Eye+Research%22%5BJournal%5D)">RPE transplantation and its role in retinal disease.</a> Progress In Retinal And Eye Research. 26 (6), 598-635 (2007).</li>
<li>Carr, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+human+iPS-derived+retinal+pigment+epithelium+cell+transplantation+in+the+retinal+dystrophic+rat%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Protective effects of human iPS-derived retinal pigment epithelium cell transplantation in the retinal dystrophic rat.</a> PLoS One. 4 (12), e8152(2009).</li>
<li>Idelson, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Directed+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+into+functional+retinal+pigment+epithelium+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Directed differentiation of human embryonic stem cells into functional retinal pigment epithelium cells.</a> Cell Stem Cell. 5 (4), 396-408 (2009).</li>
<li>Klimanskaya, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+and+comparative+assessment+of+retinal+pigment+epithelium+from+human+embryonic+stem+cells+using+transcriptomics%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Derivation and comparative assessment of retinal pigment epithelium from human embryonic stem cells using transcriptomics.</a> Cloning Stem Cells. 6 (3), 217-245 (2004).</li>
<li>Krohne, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+from+small+molecules+and+OCT4-reprogrammed+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Translational+Medicine%22%5BJournal%5D)">Generation of retinal pigment epithelial cells from small molecules and OCT4-reprogrammed human induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells Translational Medicine. 1 (2), 96-109 (2012).</li>
<li>Lund, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+embryonic+stem+cell-derived+cells+rescue+visual+function+in+dystrophic+RCS+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cloning+Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human embryonic stem cell-derived cells rescue visual function in dystrophic RCS rats.</a> Cloning Stem Cells. 8, 189-199 (2006).</li>
<li>Vugler, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elucidating+the+phenomenon+of+HESC-derived+RPE%3A+anatomy+of+cell+genesis%2C+expansion+and+retinal+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Elucidating the phenomenon of HESC-derived RPE: anatomy of cell genesis, expansion and retinal transplantation.</a> Exp Neurol. 214 (2), 347-361 (2008).</li>
<li>Algvere, P. V., Berglin, L., Gouras, P., Sheng, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+fetal+retinal+pigment+epithelium+in+age-related+macular+degeneration+with+subfoveal+neovascularization%5BTitle%5D)+AND+%22Graefes+Arch+Clin+Exp+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of fetal retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration with subfoveal neovascularization.</a> Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 232 (12 ), 707-716 (1994).</li>
<li>Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Outcome+of+transplantation+of+autologous+retinal+pigment+epithelium+in+age-related+macular+degeneration%3A+a+prospective+trial%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Outcome of transplantation of autologous retinal pigment epithelium in age-related macular degeneration: a prospective trial.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 45 (11), 4151-4160 (2004).</li>
<li>Binder, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+autologous+retinal+pigment+epithelium+in+eyes+with+foveal+neovascularization+resulting+from+age-related+macular+degeneration%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Transplantation of autologous retinal pigment epithelium in eyes with foveal neovascularization resulting from age-related macular degeneration: a pilot study.</a> Am J Ophthalmol. 133 (2), 215-225 (2002).</li>
<li>Falkner-Radler, C. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+retinal+pigment+epithelium+%28RPE%29+transplantation%3A+outcome+after+autologous+RPE-choroid+sheet+and+RPE+cell-suspension+in+a+randomised+clinical+study%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Human retinal pigment epithelium (RPE) transplantation: outcome after autologous RPE-choroid sheet and RPE cell-suspension in a randomised clinical study.</a> British Journal of Ophthalmology. 95 (3), 370-375 (2011).</li>
<li>Li, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+safety+and+efficacy+of+human-induced+pluripotent+stem+cell+%28iPS%29+grafts+in+a+preclinical+model+of+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Medicine+%28Cambridge%2C+Mass%29%22%5BJournal%5D)">Long-term safety and efficacy of human-induced pluripotent stem cell (iPS) grafts in a preclinical model of retinitis pigmentosa.</a> Molecular Medicine (Cambridge, Mass). 18, 1312-1319 (2012).</li>
<li>Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-Term+Safety+and+Function+of+RPE+from+Human+Embryonic+Stem+Cells+in+Preclinical+Models+of+Macular+Degeneration%29%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Long-Term Safety and Function of RPE from Human Embryonic Stem Cells in Preclinical Models of Macular Degeneration).</a> Stem Cells. 27 (9), 2126-2135 (2009).</li>
<li>Peyman, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+retinal+pigment+epithelium+transplantation+for+age-related+macular+degeneration+secondary+to+extensive+subfoveal+scarring%5BTitle%5D)+AND+%22Ophthalmic+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for retinal pigment epithelium transplantation for age-related macular degeneration secondary to extensive subfoveal scarring.</a> Ophthalmic Surgery. 22 (2), 102-108 (1991).</li>
<li>Schwartz, S. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryonic+stem+cell+trials+for+macular+degeneration%3A+a+preliminary+report%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Embryonic stem cell trials for macular degeneration: a preliminary report.</a> The Lancet. 379 (9817), 713-720 (2012).</li>
<li>Wang, N. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+reprogrammed+embryonic+stem+cells+improves+visual+function+in+a+mouse+model+for+retinitis+pigmentosa%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Transplantation of reprogrammed embryonic stem cells improves visual function in a mouse model for retinitis pigmentosa.</a> Transplantation. 89 (8), 911-919 (2010).</li>
<li>Cruz, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mutation+of+the+receptor+tyrosine+kinase+gene+Mertk+in+the+retinal+dystrophic+RCS+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Human+Molecular+Genetics%22%5BJournal%5D)">Mutation of the receptor tyrosine kinase gene Mertk in the retinal dystrophic RCS rat.</a> Human Molecular Genetics. 9 (4), 645-651 (2000).</li>
<li>Buchholz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Derivation+of+functional+retinal+pigmented+epithelium+from+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Derivation of functional retinal pigmented epithelium from induced pluripotent stem cells.</a> Stem Cells. 27 (10), 2427-2434 (2009).</li>
<li>Hirami, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+retinal+cells+from+mouse+and+human+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosci+Lett%22%5BJournal%5D)">Generation of retinal cells from mouse and human induced pluripotent stem cells.</a> Neurosci Lett. 458 (3), 126-131 (2009).</li>
<li>Meyer, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+early+retinal+development+with+human+embryonic+and+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Modeling early retinal development with human embryonic and induced pluripotent stem cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (39), 16698-16703 (2009).</li>
<li>Osakada, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+differentiation+of+retinal+cells+from+human+pluripotent+stem+cells+by+small-molecule+induction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">In vitro differentiation of retinal cells from human pluripotent stem cells by small-molecule induction.</a> J Cell Sci. 122 (17), 3169-3179 (2009).</li>
<li>Carr, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+and+functional+analysis+of+phagocytosis+by+human+embryonic+stem+cell-derived+RPE+cells+using+a+novel+human+retinal+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Vis%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization and functional analysis of phagocytosis by human embryonic stem cell-derived RPE cells using a novel human retinal assay.</a> Mol Vis. 15, 283-295 (2009).</li>
<li>Kokkinaki, M., Sahibzada, N., Golestaneh, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+Induced+Pluripotent+Stem-Derived+Retinal+Pigment+Epithelium+%28RPE%29+Cells+Exhibit+Ion+Transport%2C+Membrane+Potential%2C+Polarized+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Secretion%2C+and+Gene+Expression+Pattern+Similar+to+Native+RPE%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human Induced Pluripotent Stem-Derived Retinal Pigment Epithelium (RPE) Cells Exhibit Ion Transport, Membrane Potential, Polarized Vascular Endothelial Growth Factor Secretion, and Gene Expression Pattern Similar to Native RPE.</a> Stem Cells. 29 (5), 825-835 (2011).</li>
<li>Westenskow, P., Friedlander, M. Ch. 111. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aWestenskow%2C+P+%22The+New+Visual+Neurosciences%22">The New Visual Neurosciences</a>. Werne, J. S., Chalupa, L. M. , The MIT Press. Cambridge, MA. 1611-1626 (2013).</li>
<li>Westenskow, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+flow+cytometry+to+compare+the+dynamics+of+photoreceptor+outer+segment+phagocytosis+in+iPS-derived+RPE+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Using flow cytometry to compare the dynamics of photoreceptor outer segment phagocytosis in iPS-derived RPE cells.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53 (10), 6282-6290 (2012).</li>
<li>Algvere, P. V., Gouras, P., Dafgard Kopp,, E, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+outcome+of+RPE+allografts+in+non-immunosuppressed+patients+with+AMD%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Ophthalmol%22%5BJournal%5D)">Long-term outcome of RPE allografts in non-immunosuppressed patients with AMD.</a> Eur J Ophthalmol. 9 (3), 217-230 (1999).</li>
<li>Zhang, X., Bok, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+retinal+pigment+epithelial+cells+and+immune+response+in+the+subretinal+space%5BTitle%5D)+AND+%22Invest+Ophthalmol+Vis+Sci%22%5BJournal%5D)">Transplantation of retinal pigment epithelial cells and immune response in the subretinal space.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 39 (6), 1021-1027 (1998).</li>
<li>Gamm, D. M., Phillips, M. J., Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modeling+retinal+degenerative+diseases+with+human+iPS-derived+cells%3A+current+status+and+future+implications%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Review+Of+Ophthalmology%22%5BJournal%5D)">Modeling retinal degenerative diseases with human iPS-derived cells: current status and future implications.</a> Expert Review Of Ophthalmology. 8, 213-216 (2013).</li>
<li>Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((iPS+cell+modeling+of+Best+disease%3A+insights+into+the+pathophysiology+of+an+inherited+macular+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">iPS cell modeling of Best disease: insights into the pathophysiology of an inherited macular degeneration.</a> Hum Mol Genet. 22 (3), 593-607 (2013).</li>
<li>Buchholz, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+and+efficient+directed+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells+into+retinal+pigmented+epithelium%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells+Transl+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid and efficient directed differentiation of human pluripotent stem cells into retinal pigmented epithelium.</a> Stem Cells Transl Med. 2 (5), 384-393 (2013).</li>
<li>Fuhrmann, S., Levine, E. M., Reh, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extraocular+mesenchyme+patterns+the+optic+vesicle+during+early+eye+development+in+the+embryonic+chick%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Extraocular mesenchyme patterns the optic vesicle during early eye development in the embryonic chick.</a> Development (Cambridge, England). 127 (21), 4599-4609 (2000).</li>
<li>Borowiak, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small+molecules+efficiently+direct+endodermal+differentiation+of+mouse+and+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Stem+Cell%22%5BJournal%5D)">Small molecules efficiently direct endodermal differentiation of mouse and human embryonic stem cells.</a> Cell Stem Cell. 4 (4), 348-358 (2009).</li>
<li>Tucker, B. A., Anfinson, K. R., Mullins, R. F., Stone, E. M., Young, M. J. Use of a synthetic xeno-free culture substrate for induced pluripotent stem cell induction and retinal differentiation. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aTucker%2C+BA+%22Stem+Cells+Transl+Med%22">Stem Cells Transl Med</a>. 2 (1), 16-24 (2013).</li>
<li>Ramsden, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem+cells+in+retinal+regeneration%3A+past%2C+present+and+future%5BTitle%5D)+AND+%22Development+%28Cambridge%2C+England%29%22%5BJournal%5D)">Stem cells in retinal regeneration: past, present and future.</a> Development (Cambridge, England). 140 (12), 2576-2585 (2013).</li>
<li>Zhao, T., Zhang, Z. -N., Rong, Z., Xu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunogenicity+of+induced+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Immunogenicity of induced pluripotent stem cells.</a> Nature. 474 (7350), 212-215 (2011).</li>
<li>Zhang, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+conversion+of+human+fibroblasts+into+retinal+pigment+epithelium-like+cells+by+defined+factors%5BTitle%5D)+AND+%22Protei.%2C+%26+Cell%22%5BJournal%5D)">Direct conversion of human fibroblasts into retinal pigment epithelium-like cells by defined factors.</a> Protei., & Cell. 5 (1), 48-58 (2013).</li>
</ol>

Yazarların hiçbirinin beyan edecek herhangi bir ticari açıklaması yoktur.

Bu yazıda verimli saf iPS-RPE kültürlerin çok sayıda oluşturmak için adımları özetlemektedir. Biz şiddetle transkriptomik, proteomik, metabolomik ve işlevselliğine dayalı hRPE benzer iPS-RPE üretebilir Aktivin A ile yönlendirilmiş farklılaşma protokolü kullanarak önceden göstermiştir, ve RCS sıçanlarda 12,31,32 implante zaman retina dejenerasyonu geciktirir . iPS-RPE üretme süreci, zaman alıcıdır, ancak zahmetli (Şekil 1). IPS kültürleri konfluense ulaştıklarında onlar günlük bazda farklılaşm...

Retinayı işgal eden çeşitli hücre tipleri işlevsel bir mimaride düzenlenmiştir. Retinanın arkasındaki fotoreseptörler, ışığı fototransdüksiyon yoluyla elektriksel uyarılara dönüştürmekten sorumludur. Bununla birlikte, fototransdüksiyon, Mueller glia ve retinal pigment epitel (RPE) hücreleri dahil olmak üzere diğer komşu hücre tiplerinin koordineli çabaları olmadan gerçekleşemez. RPE hücrelerinin tek tabakası, duyusal retinayı fotoreseptörler için birincil kan kaynağı olan koryokapillaristen ayırır ve fotoreseptör homeostazı için önemli olan çoklu fonksiyonları kontrol etmek için ideal olarak konumlandırılmıştır. Aslında, RPE ve fotoreseptörler o kadar birbirine bağımlıdır ki, yaygın olarak tek bir fonksiyonel birim olarak kabul edilirler. (RPE'nin tüm çeşitli işlevlerinin gözden geçirilmesi için bakınız Strauss, 20051.) Retina pigment epitel hücrelerinin ölümü veya işlev bozukluğu, sanayileşmiş ülkelerde kalıcı görme kaybının önde gelen nedeni olan yaşa bağlı makula dejenerasyonuna (AMD) neden olabilir2-4. 
AMD, RPE, fotoreseptörler ve koroidal vaskülatürden oluşan multifaktöriyel bir hastalıktır; risk faktörleri çeşitlidir ve çevresel ve genetik etkilerin kombinasyonlarını içerir5,6. AMD için tedaviler çok sınırlıdır, ancak umut verici bir potansiyel tedavi RPE hücre replasmanıdır7,8. Sonuçlar karışık olsa da, AMD hastalarında (ve retina dejenerasyonu olan diğer hastalarda) ve ayrıca retinal dejenerasyonun kemirgen modellerinde RPE hücrelerinin transplantasyonu, önemli fotoreseptör atrofisini9-23 geçici olarak önleme potansiyeline sahiptir. (Bu çalışmalar için yaygın olarak kullanılan hayvan modeli, MerTK geninde bir mutasyon barındıran Royal College of Surgeons (RCS) sıçanlarıdır. Bu mutasyon, RPE hücrelerini fotoreseptör dış segmentlerini fagosisite edemez hale getirir ve retina dejenerasyonunu teşvik eder24.) RCS sıçanlarının ve farelerinin subretinal boşluğuna implante edilmiş RPE'nin bildirilen sağkalım oranları büyük ölçüde değişmekle birlikte, birkaç ay veya yıl boyunca hayatta kalma potansiyelleri vardır9,10,12,20. 
RPE hücreleri pluripotent kök hücrelerden türetilerek transplantasyon için yeterli sayıda elde edilebilir9-14,25-28. Birkaç bağımsız grup, bu hücrelerin somatik muadillerine benzer şekilde işlev gördüğünü göstermiştir ve uzun süreli çalışmalar, sıçan ve fare hastalığı modellerinde implantasyon üzerine güvenli olduklarını göstermektedir9,10,12,14,19,20,25,29-32. Embriyonik kök hücreler yerine indüklenmiş pluripotent kök hücrelerin kullanılması, allojenik RPE ile ilişkili etik sorunlar ve immünolojik zorlukların ortadan kaldırılabilmesi nedeniyle avantajlı olabilir33,34. iPS teknolojisi için bir başka heyecan verici uygulama da hastalık modellemesi35'tir. RPE hastalığı olan hastalardan türetilen çok sayıda RPE hücresini sorgulama yeteneği, moleküler temellerini anlamak için paha biçilmez olabilir. Bu tür bir çalışma son zamanlarda En iyi hastalık hastası RPE ile gerçekleştirilmiştir ve kalıtsal makülopatilerle ilgili benzer çalışmaların önünü açabilir36. 
RPE'nin kök hücrelerden türetilmesi nispeten basit bir işlemdir ve tamamen kseno içermeyen koşullarda yapılabilir. En basit strateji, RPE hücrelerinin tek katmanlarını kendiliğinden türetmektir, ancak verim, yönlendirilmiş farklılaşma teknikleri kullanılarak önemli ölçüde iyileştirilebilir. Ancak bu teknikler, pahalı olabilen ve genellikle bakteri veya diğer insan dışı kaynaklarda üretilen eksojen protein faktörlerinin kullanımını içerir10,12,37. Çalışmalarımızda, RPE spesifikasyonu38 için yeterli olduğu gösterilen bir sinyal faktörü olan nikotinamid ve Activin A'yı kullanan yerleşik bir protokol10'u takip ettik. Burada, küçük molekül IDE-1'in Aktivin A'nın yerini yeterince alabileceğini, böylece maliyetleri azaltabileceğini ve rekombinant proteinlerin kullanımıyla ilgili endişeleri hafifletebileceğinigöstereceğiz 39. Ek olarak, kseno içermeyen serum replasmanı kullanıyoruz ve farklılaşan RPE hücrelerini sentetik kseno içermeyen bir substrat üzerinde kültürlüyoruz. RPE hücrelerinin daha önce bu yaklaşımı kullanarak çok etkili bir şekilde farklılaştığı gösterilmiştir40.
Tek tabaka olarak farklılaştırıldığında, RPE hücreleri içeren pigmentli kolonileri beş hafta gibi kısa bir süre sonra görselleştiririz12. Yeterli boyuta ulaştıklarında, manuel olarak eksize edilebilir ve genişleme için başka bir kaba aktarılabilirler. RPE hücreleri, her pasajda farklılaşmamasıyla ünlüdür ve beş pasajdan daha eski herhangi bir şeyin kullanılmasından kaçınılmalıdır (hayvan modellerinde karakterizasyon ve transplantasyon için yeterli sayıda hücrenin iki veya üç pasajdan sonra kolayca üretilebileceğini bulduk). Tamamen farklılaştıktan sonra, hastalıklı RPE için yeterli ikame görevi görmelerini sağlamak için hücreleri anatomik ve fonksiyonel olarak karakterize etmek için birden fazla teknik kullanıyoruz. Bu tekniklerin tanımı ve iPS-RPE'nin kemirgenlerin subretinal boşluğuna implante edilmesi için protokol, bu yöntem makalesinin kapsamı dışındadır ve daha önce yayınlanmıştır12,32,41. 
iPS-RPE'nin etkili bir şekilde türetilmesi için standartlaştırılmış protokoller geliştirmek klinikler için açıkça önemli olsa da, hayvan modellerinde hala yapılması gereken önemli klinik öncesi çalışmalar da vardır. iPS'den türetilmiş hücrelerin immünojenisitesi ile ilgili endişeler vardır ve hücrelerin yapay substratlar üzerine implante edilmesi de dahil olmak üzere çok sayıda farklı implantasyon tekniği araştırılmaktadır42,43. Bu nedenlerle, standardize protokollerin yayınlanmasının hem klinik hem de klinik öncesi çalışmaları kolaylaştırmak için faydalı olduğunu düşünmekteyiz. Özellikle, farklı araştırma grupları tarafından farklı laboratuvarlarda türetilen iPS-RPE hücrelerinin doğrudan karşılaştırmaları yapılacaksa.

<table><tbody><tr><td>Kornea bıçağı&nbsp;</td><td>Surgipro</td><td>SPOI-070</td><td>bıçak x 1</td></tr><tr><td>DMEM/F-12, HEPES</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11330-032</td><td>500 ml x 4&nbsp;</td></tr><tr><td>Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu Salin, 1X Ca veya Mg olmadan</td><td>VWR</td><td>45000-434</td><td>500 ml x 6</td></tr><tr><td>Fetal Sığır Serumu, Düzenli (Isıyla Etkisizleştirilmiş)</td><td>VWR</td><td>45000-736</td><td>500 ml x 1</td></tr><tr><td>FGF-Basic (AA 10-155) Rekombinant İnsan Protein</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>PHG0021</td><td>100 ve mikro; g x 1</td></tr><tr><td>IDE-1</td><td>Stemgent</td><td>04-0026</td><td>2 mg x 1</td></tr><tr><td>Nakavt DMEM</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>10829-018</td><td>500 ml x 1 nbsp;</td></tr><tr><td>KnockOut Serum Replasman Ömrü</td><td>Teknolojileri</td><td>10828-028</td><td>500 ml x 1</td></tr><tr><td>L-Glutamin 200 mM&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>25030-081</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>MEM Esansiyel Olmayan Amino Asit Çözeltisi 100X&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>11140-050</td><td>100 ml x 1</td></tr><tr><td>Nikotinamid</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N0636-100G</td><td>100 g x 1</td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin (10.000 U/ml)</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>15140-148</td><td>20 ml x 1</td></tr><tr><td>Rekombinant İnsan/Murin/Sıçan Aktivin A&nbsp;</td><td>PeproTech</td><td>120-14E</td><td>10 & g x 2</td></tr><tr><td>Synthemax-T Yüzey 6 Kuyulu Plakalar</td><td>Corning</td><td>3877</td><td>Kasa (12) x 1</td></tr><tr><td>TrypLE-Express Enzim (1X), fenol kırmızısı yok&nbsp;</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>12604-021</td><td>500 ml x 1&nbsp;</td></tr><tr><td>Vakum Filtresi / Saklama Şişesi Sistemi, 0.1 & mikro; m gözenek, 500ml&nbsp;</td><td>Corning</td><td>431475</td><td>Kılıfı(12) x 1&nbsp;</td></tr></tbody></table>

kök hücreleri retina pigment epiteli hücrelerinin verimli türetilmesi

Efficient Derivation of Retinal Pigment Epithelium Cells from Stem Cells

55 yaş üstü kişilerde görme kaybının önde gelen nedeni olan yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) için bir tedavi keşfedilmemiştir. YBMD, etiyolojisi bilinmeyen karmaşık bir multifaktöriyel hastalıktır, ancak büyük ölçüde retinanın altında yatan ve fotoreseptörler için kritik destek sağlayan bir hücre tek tabakası olan retina pigment epitelinin (RPE) ölümü veya işlev bozukluğu nedeniyle ortaya çıktığı düşünülmektedir. RPE hücre replasman stratejileri, AMD hastalarının geniş bir alt kümesi için terapötik rahatlama sağlamak için büyük umut vaat edebilir ve birincil insan hücrelerine (hRPE) güçlü bir şekilde benzeyen RPE hücreleri, bizimki de dahil olmak üzere çok sayıda bağımsız laboratuvarda üretilmiştir. Ek olarak, iPS-RPE'nin kullanımları hücre bazlı tedavilerle sınırlı değildir, aynı zamanda RPE hastalıklarını modellemek için de kullanılmıştır. Bu tür çalışmalar sadece hastalıkların moleküler temellerini aydınlatmakla kalmaz, aynı zamanda yeni ilaçların geliştirilmesi ve test edilmesi için paha biçilmez araçlar olarak da hizmet eder. Burada, RPE'nin kök hücrelerden yönlendirilmiş farklılaşması için optimize edilmiş bir protokol sunuyoruz. Belirli zaman noktalarında nikotinamid ve etkilerini taklit eden küçük bir molekül olan Activin A veya IDE-1'in eklenmesi, RPE hücrelerinin verimini büyük ölçüde artırır. Bu tekniği kullanarak, üç ay gibi kısa bir sürede çok sayıda düşük geçişli RPE elde edebiliriz.

Şekil 1 'de gösterildiği gibi, bu metinde belirtilen adımlar, daha önce rapor edildiği gibi 10,12 kolayca kök hücreler RPE oluşturmak için de kullanılabilir. Birkaç hafta iPS hatları sağlandıktan sonra, pigmentli koloniler 5-7 hafta (7 haftalık kültürler Şekil 2A-C gösterilmiştir) sonra kolonilerde görünmeye başlar. Bu koloniler, kültür muhafaza edildiği gibidir hafta boyunca büyümeye devam edebilirler. Şekil 3A'da gösterildiği gibi, Şekil 2D F</stron...

Kök hücre kaynaklı retina pigment epitel (RPE) hücreleri, retina dejenerasyonu için hücre bazlı tedaviler, hastalık modellemesi ve ilaç çalışmaları dahil olmak üzere birçok uygulama için kullanılabilir. Burada, kök hücrelerden RPE'nin tekrarlanabilir bir şekilde türetilmesi için basit bir protokol sunuyoruz.

Kök Hücreleri Retina pigment epiteli hücrelerinin Verimli türetilmesi

No cure has been discovered for age-related macular degeneration  (AMD), the leading cause of vision loss in people over the age of 55. AMD is complex ...

Bu prosedürün genel amacı, kök hücrelerden yüksek kaliteli retina pigment epiteli veya RPE'yi tekrarlanabilir bir şekilde elde etmektir. Bu, ilk önce indüklenebilir pluripotent kök hücrelerin birlikte akıcılık elde etmek için büyütülmesiyle gerçekleştirilir. İkinci adımda, hücreleri RPE kaderlerine yönlendirmek için ortam değiştirilir.Daha sonra, RPE hücreleri çanaktaki diğer farklılaşmış hücrelerden izole edilir ve daha sonra kültürler yeterli sayıda hücre elde edilene kadar genişletilir. Sonuç olarak, kültürlerin koyu pigmentasyonu ve parke taşı morfolojileri, RPE hücrelerinin terminal farklılaşmaya ulaştığını doğrulamak için kullanılabilir. Bu tekniğin spontan diferansiyasyon gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, tanımlanmış faktörlerin eklenmesinin farklılaşmayı, zamanı hızlandırması ve RPE verimini artırmasıdır.Bugüne kadar binlerce kemirgen, IPSA çeşitli retinal dejeneratif hastalıklardan türetilen RPE hücreleri kullanılarak tedavi edilmiştir. Bununla birlikte, bunu verimli ve etkili bir şekilde bu hastalıklara sahip kliniklerde insanları tedavi etmeye dönüştürürsek, bize yüksek kalite, yüksek sayıda RPE satışı ve IPS sağlayacak iyi kurulmuş tekrarlanabilir protokoller geliştirmemiz kesinlikle zorunludur. Bu yöntemin görsel sunumu esastır, çünkü herhangi bir zamanda sadece bir kişi mikroskopta kaputun altında çalışabilir, izolasyon adımının görselleştirilmesini zorlaştırır. Laboratuvarımdan bir araştırma teknisyeni olan Mitchell Prince, şimdi prosedürün dijital kültür yönleriyle ilişkili protokolü gösterecek Kök hücreden türetilmiş RPE kültürünün, fare embriyonik besleyici hücrelerinin bir tabakası üzerindeki kök hücre çizgisinin farklılaşmasını yönlendirmek için, altı oyuklu bir plakanın oyuğu başına iki kez 10 ila altı hücre, Kolonilerin COF akıcılığına ulaşmasına izin verin ve ardından farklılaşma ile günlük beslemelere geçin.Nikotinamid ile desteklenmiş ortam. Üç hafta sonra, RPE farklılaşmasını artırmak için beslemelere bir veya IDE'de aktif eklemeye başlayın. İki hafta sonra, günlük beslenmeyi bırakarak farklılaşma ortamına ve tek başına nikotinamide geri dönün.Ortamdaki pH göstergeleri beslenmeden sonraki gün sararmayı bıraktığında, pigmentli hücrelerin kesilip çıkarılabilecek kadar büyük halkaları görünene kadar kültürü inkübatöre geri koyun. Pigmentli halkaları izole etmek için bir sonraki katta, doğal hücre ortamını taklit eden kseno içermeyen bir matrise sahip 24 oyuklu bir plakanın kuyuları. Daha sonra, 24 kuyulu plakanın çok sayıda kuyusunu gerektiği kadar farklılaştırma ortamı ile doldurun.Ve bir hücre kültürü davlumbazında, orijinal plakanın altındaki her bir pigmentli deliği iki ila altı parçaya bölmek için bir diseksiyon kapsamı ve bir neşter kullanın ve pigmentli parçaları keskin forsepslerle alın ve ardından her birine bir ila iki pigmentli parça aktarın.24. Plakayı 37 santigrat derecede ve% 5 karbondioksitte, hücreler yapışana kadar üç ila beş gün boyunca inkübe edin. Ardından medyayı haftada üç kez değiştirmeye başlayın.Farklılaşma ortamında hücreleri üç ila dört hafta boyunca genişletin. Hücreleri geçmek için haftada üç kez beslemeye devam edin. RPE, hücreleri ayırmak için 37 santigrat derecede 200 mikrolitre ön ısıtma tripsin olmayan hücre ayrışma çözeltisi ekler.Beş ila sekiz dakika sonra, reaksiyonu taze farklılaşma ortamı ile durdurun ve ardından kültürleri 200 mikrolitrelik bir pipetle tek hücreli süspansiyonlara yeniden süspanse edin ve kolonileri birkaç hücre ile bir araya getirin. Daha sonra, ayrışmış kolonileri 15 mililitrelik tüplere aktarın ve hücreleri aşağı doğru döndürün. Peletleri üç mililitre farklılaşma Ortamında askıya alan Resus, her biri kolonileri, kuyu başına üç ek mililitre farklılaşma ortamı içeren matris kodlu altı oyuklu bir plakanın her bir oyuğuna aktarır.Daha sonra, hücreler yaklaşık% 90 birleşene kadar hücreleri bir ila iki hafta boyunca genişletin ve hücreleri, az önce gösterildiği gibi bir mililitre ayrışma çözeltisi içinde tekrar ayırın. Bu sefer. Hücreleri yeniden süspanse etmek için 1000 mikrolitrelik bir pipet kullanarak, tek hücreli çözeltiyi 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarın.Ve sonra hücreleri tekrar döndürdükten sonra, peleti askıya alın. 18 mililitre farklılaşmada, ortam nihayet minimum geçiş sayısında istenen maksimum hücre sayısını elde etmek için hücreleri matris kodlu bir kültür kabında yeniden doldurur daha fazla aşağı akış analizi için, pigmentli koloniler beş ila yedi haftalık indüklenebilir pluripotent kök hücre hattı kültüründen sonra ortaya çıkmaya başlar. Kültürler korundukça bu koloniler haftalarca büyümeye devam edebilir.Yeterli bir boyuta ulaştıklarında manuel olarak eksize edilebilirler. RPE olmayan hücrelerle kontaminasyonu önlemek için dikkatli eksizyon, yeterince saf RPE kültürlerinin oluşturulmasını büyük ölçüde kolaylaştırır. Bir kez ustalaştıktan sonra, teknik uygun şekilde uygulanırsa sekiz ila 12 hafta içinde çok sayıda RPE hücresi türetilebilir.Bu işlemi denerken, besiyeri yaparken ve hücreleri beslerken kültürleri kontamine etmemeye dikkat etmeyi unutmamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, birçoğunuzun IPS'den çok sayıda yüksek kaliteli RPE hücresi üretebileceğini umuyoruz. Umarım bu, tezgahtan yatak başına daha hızlı geçişi kolaylaştıracak ve şu anda tedavi edilemeyen retinal dejeneratif neovasküler hastalıklardan muzdarip hastalara hücre bazlı tedaviler sunacaktır.

efficient-derivation-retinal-pigment-epithelium-cells-from-stem

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Gelişim Biyolojisi

Bu video, siliyer epitelden fare gözün retina kök hücreleri izole kültür ve klonal retina küreler oluşturacak şekilde büyümeye nasıl göstereceğiz. Izole edilmiş kök hücre küre kardinal özelliklere sahip: kendini yenileme ve multipotentiality.

Fare Göz Retina Kök Hücre İzolasyonu

MıkroRNA (miRNA) insan kaynaklı-pluripotent kök (iPS) hücreleri (iPS-RPE), ve fetal RPA'nin türetilen insan kaynaklı-pluripotent kök profilleri (iPS) hücreleri, retina pigment epiteli (RPE), karşılaştırıldı.

İnsan iPS Hücreleri MicroRNA İfade Profilleri, iPS Kaynaklanan Retina pigment epiteli ve Fetal Retina pigment epiteli

Burada, sıçanlarda ve farelerde bir RPE hücresi bolusunu subretinal olarak enjekte etmek için multimedya formatında topluluk tarafından kabul edilen bir protokol sunuyoruz. Bu yaklaşım, retinal dejenerasyonun hayvan modellerinde implantasyon üzerine aşılanmış RPE hücrelerinin kurtarma potansiyellerini, güvenlik profillerini ve hayatta kalma kapasitelerini belirlemek için kullanılabilir.

Süspansiyon Retina pigment epiteli Hücreleri sunun Kemirgenler Subretinal Enjeksiyonları Sahne

Bu raporun amacı, embriyoid organlarının farklı boyutlarda kullanılarak uyarılmış pluripotent kök (iPS) hücrelerden retina pigment epiteli (RPE) elde etmek protokolleri tanımlamaktır.

Embriyoid Kuruluşlarının Farklı Boyutları tarafından uyarılmış pluripotent kök gelen Retina pigment epiteli (RPE) türetilmesi (iPS) Hücreler

Bu iletişim kuralı, retina pigment epitel hücreleri (RPE) pluripotent kök hücre üretmek açıklar. Yöntem farklılaşma kök hücre içine olgunlaşmamış RPE on dört gün ve olgun, fonksiyonel RPE üç ay sonra büyüme faktörleri ve küçük moleküller bir arada kullanır.

Hızlı, yönlendirilmiş farklılaşma insan embriyonik veya İndüklenmiş Pluripotent kök hücrelerinden retina Pigment epitel hücrelerinin

Burada retina pigment epiteli (RPE) hücreleri insan pluripotent kök hücre hasta kaynaklı mutasyonlar taşıyan ayırt etmek için bir iletişim kuralı mevcut. Mutant hücre hatları immunoblotting, ayirt ve yama kelepçe gibi fonksiyonel analizleri için kullanılabilir. Bu hastalık içinde yemek yaklaşım yerel insan RPE hücrelerinin alma zorluğu kaçınmanızı sağlar.

Farklılaşma, bakım ve insan Retina Pigment epitel hücre Analizi: BEST1 mutasyonlar için bir tabak içinde hastalık modeli

Retina pigment epitel hücrelerinin insan amniyotik membran ve hayvan modellerinde aşılama için hazırlık üstüne kültürlü insan pluripotent kök hücreler elde oluşan bir retina doku mühendisi bir yöntem açıklanmaktadır.

Transplantasyonu uygun Retina Pigment epitel doku mühendisliği insan embriyonik kök hücrelerden türetilmiş

Burada, çeşitli insan pluripotent kök hücre hatlarının yüksek tekrarlanabilirlik ve verimlilikle retina dokuları üretmesi için uygun olan optimize edilmiş bir retinal organoid indüksiyon sistemini açıklıyoruz.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden 3D Retinal Dokuların Türetilmesi için Retinal Organoid İndüksiyon Sistemi

İnsan olmayan primat (NHP), anatomik ve genetik benzerlikler nedeniyle insan retina hücresel terapötiklerini incelemek için ideal bir modeldir. Bu makalede, NHP gözündeki retina pigment epitel hücrelerinin submaküler nakli için bir yöntem ve makula manipülasyonu ile ilişkili intraoperatif komplikasyonları önleme stratejileri açıklanmaktadır.

Dejeneratif Retina Hastalıkları için İnsan Dışı Primat Modelinde Retina Pigment Epitel Transplantasyonu

Bu çalışma, insan kök hücresinden türetilmiş retina pigment epitel hücrelerinin etkili bir şekilde dondurularak saklanması için ayrıntılı bir protokol sunmaktadır.

İnsan Embriyonik Kök Hücre Kaynaklı Retina Pigment Epitel Hücrelerinin Optimal Aşamada Dondurularak Saklanması

Retina pigment epiteli (RPE), koroid ve retina arasında çok önemli bir bariyer görevi görür ve fotoreseptörler gibi retina hücre tiplerinin sağlığını ve işlevini destekler. Burada, yetişkin murin RPE'yi izole etmek ve kültürlemek için basit ve etkili bir protokol açıklıyoruz.

Yetişkin Farelerden Retinal Pigment Epitel Hücrelerinin İzolasyonu ve Kültürü için Basitleştirilmiş Bir Yöntem

Keşfedin kök hücrelerden retina pigment epiteli hücrelerinin verimli türetilmesi yöntemini. Tanımlı faktörlerle hızlandırılan bu protokol, yüksek kaliteli RPE üretimi için tekrarlanabilir bir yöntem sunar.

Kök Hücreleri Retina pigment epiteli hücrelerinin Verimli türetilmesi

Daha fazla video keşfet