Name: Le lymphatiques mésentériques Duct Cannulated Rat Modèle: application à lévaluation des lymphatique intestinale transport des médicaments (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-06T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 17 s
Description: Apprenez la technique de canulation du canal lymphatique mésentérique chez le rat pour quantifier le transport intestinal des lipides et des médicaments. Cette méthode permet d'évaluer l'absorption lymphatique in vivo avec précision.

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Le financement du Conseil australien de la recherche (ARC) et du Conseil national de la santé et de la recherche médicale (NHMRC) est vivement remercié.

Les auteurs n’ont rien à divulguer.

Le modèle rat lymphatiques mésentériques de cathétérisme permet une quantification directe de la concentration et de taux de transport de diverses cellules et molécules (comme les lipides et les médicaments) de l&#39;intestin dans la lymphe et les modifications apportées à ceux-ci qui se produisent en réponse à contester de diverses substances (régime alimentaire , antigènes, des médicaments, des formulations, etc.) et les maladies 10,27 (cancer, les virus, la colite, la résistance à l&#39;insuline, ...

La lymphe se écoule de l&#39;intestin grêle par un processus unidirectionnel qui provient à lactés simples qui sont contenus dans chaque petit villosités intestinales 1. Lactés sont relativement perméables aux fluides, des macromolécules et des cellules et la formation de la lymphe ainsi commence avec l&#39;entrée de ces facteurs dans lactés. La lymphe initiale dans les vaisseaux lactés se écoule ensuite à partir de l&#39;intestin par l&#39;intermédiaire d&#39;un réseau de micro-vaisseaux lymphatiques, de collecte (afférente) des vaisseaux lymphatiques, une série de ganglions lymphatiques mésentériques et, finalement, les post-nodal (efférent) vaisseaux lymphatiques. Dans les noeuds lymphatiques passe à travers une série de sinus médullaires où se produit l&#39;échange avec les cellules immunitaires noeud résidentes ainsi que du matériel qui entrent dans le noeud à partir du sang. Tous lymphatique découlant de l&#39;intestin grêle converge finalement dans le conduit efférent mésentérique supérieure lymphatique et par la suite la citerne de Pecquet. La citerne de Pecquet recueille également lymphatique drainant les tissus périphériques caudales, intestInal, régions hépatiques et lombaires et rejoint le canal lymphatique thoracique avec la lymphe du médiastin et des parties du corps crâniens. Le conduit de la lymphe thoracique vide lymphatique directement dans le système veineux à la jonction des veines jugulaires et sous-clavière gauche internes. Le protocole décrit ici, qui permet la collecte de la lymphe directement à partir du conduit lymphatique mésentérique supérieure, facilitant ainsi l&#39;analyse de différents facteurs qui transitent directement de l&#39;intestin à la systémique (général) la circulation par le système lymphatique intestinal. Les principales fonctions physiologiques affectés au système lymphatique intestinal sont à maintenir l&#39;équilibre de fluide, afin de faciliter l&#39;absorption des lipides et de molécule lipophile, et pour permettre une réponses immunitaires appropriées. Les cellules tumorales et les virus se propagent également via les vaisseaux lymphatiques intestinaux 2-4 et principales modifications se produisent dans les vaisseaux lymphatiques dans plusieurs pathologies inflammatoires et métaboliques 5-7. Pouvoirnulation du conduit de lymphe mésentérique à recueillir la lymphe dans le mésentère permet une analyse de flux de fluide en vrac via les vaisseaux lymphatiques intestinaux ainsi que la quantification du taux de diverses cellules et des molécules concentration et de transport. Les modifications apportées à la concentration ou de transit de ces facteurs en réponse à divers défis (par exemple, les régimes alimentaires, les antigènes, médicaments) et dans les modèles de la maladie (par exemple, la colite, le VIH, le diabète) peuvent également être évalués. Se il est impossible de décrire longuement chaque composant lymphatique qui peut être analysé et comparé ici, lymphatiques mésentériques consiste simpliste d&#39;une solution aqueuse, lipidique et phases cellulaires. Composants d&#39;intérêt dans la phase aqueuse comprennent des peptides et des protéines telles que des antigènes ou des tolérogènes, 8 messagers immunitaires tels que les cytokines et les médiateurs des mastocytes, 9 et médiateurs métaboliques telles que les incrétines 10. La fraction cellulaire de la lymphe mésentérique post-ganglionnaire est presque entièrement (plus de 99%) des lymphocytes 11. Diverses cellules immunitaires (cellules dendritiques, les mastocytes, etc.) pénètrent dans les vaisseaux lymphatiques mésentériques pré-nodaux, mais restent dans le noeud 12. Si les cellules au sein de la lymphe afférente sont d&#39;un intérêt, il est possible de recueillir ces cellules par l&#39;intermédiaire de la suppression des nœuds lymphatiques mésentériques plusieurs jours avant la canulation de la veine 12 lymphatiques mésentériques. De cette manière, les canaux afférents et efférents lymphatiques sont directement reliés, et les cellules lymphatiques de la lymphe afférente passent directement dans le canal lymphatique mésentérique. Le transit et le phénotype de diverses cellules immunitaires passant par les vaisseaux lymphatiques intestinaux peuvent ainsi être examinés. Peut-être la raison la plus fréquemment invoquée pour recueillir lymphatiques mésentériques à ce jour, cependant, est d&#39;étudier le traitement intestinale, l&#39;absorption et le transport des lipides alimentaires et des molécules lipophiles 10. Après l&#39;ingestion, les lipides alimentaires sont digérés (par exemple, à partir de triglycérides en acides gras et les monoglycérides, phospholipid aux acides et lysophospholipide gras et cholestérol ester d&#39;acide gras et de cholestérol, etc.) et dispersées dans la lumière intestinale en petites micelles et structures vésiculaires par l&#39;addition d&#39;agents amphiphiles de la bile (phospholipides, des sels de cholestérol et biliaires) et l&#39;action de enzymes pancréatiques 10,13. De là, ils sont absorbés dans les entérocytes. Une partie des composants absorbés sont ré-estérifiés pour former des triglycérides, des phospholipides et des esters de cholestérol dans les cellules absorbantes (entérocytes). Ces ré-estérifiés lipides sont assemblés à partir d&#39;une combinaison de manière exogène ingérée composants lipidiques et les composants lipidiques endogènes de la bile sécrétée, piscines lipidiques muqueuses ou l&#39;approvisionnement en sang 13 intestinal. De là, les lipides sont soit estérifiés stockés dans les entérocytes ou assemblés en lipoprotéines intestinaux (chylomicrons, les lipoprotéines de très faible densité (VLDL)) avec diverses apoprotéines et d&#39;autres molécules lipophiles ( <em&gt; par exemple, vitamines) 10,13. Après avoir quitté les entérocytes, les lipoprotéines sont spécifiquement transportés depuis l&#39;intestin vers la circulation systémique par l&#39;intermédiaire du système lymphatique mésentérique que les vaisseaux lactés intestinaux sont plus perméables à leur entrée de capillaires sanguins intestinaux. Une partie des composants lipidiques absorbées sont également transportés à partir de l&#39;intestin dans la circulation systémique par l&#39;intermédiaire des capillaires sanguins et la veine porte comme unique, non-lipoprotéines associées, des molécules 14. En général, cependant, la voie de transport de la veine portale est seulement un rôle important dans l&#39;absorption des lipides court et moyen terme de longueur de chaîne. La collection de lymphe mésentérique permet ainsi l&#39;évaluation du transport des lipoprotéines et des composants associés (lipides, des molécules lipophiles, les apo-protéines) à partir de l&#39;intestin. Les lipoprotéines peuvent être quantifiés et caractérisé avec l&#39;avantage que les lipoprotéines lymphatiques mésentériques, en général, sont dans une nascent Etat car ils ne ont pas été largement modifié par les enzymes systémiques tels que la lipoprotéine lipase 15. Bien que le modèle de rat canulée lymphatique mésentérique a peut-être été historiquement les plus largement décrit pour l&#39;analyse du transport des lipides / lipoprotéines à partir de l&#39;intestin, une zone d&#39;expansion intérêt est le rôle des vaisseaux lymphatiques dans le transport des médicaments lipophiles, les promédicaments et d&#39;autres xénobiotiques 13,16 qui est la mise au point du modèle décrit ici. Médicaments lipophiles (généralement ceux dont log P&gt; 5 et la solubilité dans longue chaîne triglycérides&gt; 50 mg / g bien que des exceptions sont apparents) 17,18, prodrogues 19 et d&#39;autres xénobiotiques 13,16 peuvent accéder aux vaisseaux lymphatiques intestinaux passivement ou par intégrer activement dans lipoprotéines intestinale voies de transport 19. La lymphe mésentérique technique de cathétérisme de rat a donc de nombreuses applications. Bollman et al. Décrit d&#39;abord un technique à Cathétériser le conduit lymphatiques mésentériques chez les rats en 1948 20. Depuis lors, un certain nombre de variations sur le modèle ont été décrits. Par exemple, la collecte peut se produire lorsque le rat est anesthésié avec différents anesthésiques 21,22, ou à l&#39;état conscient tout en retenu 15 ou se déplacer librement 23,24. Les rats peuvent être administrés par différentes solutions de réhydratation et d&#39;autres substances telles que des lipides et des formulations de médicaments à des taux différents dans l&#39;estomac, l&#39;intestin ou parenterale (en général de 0 à 5 ml / h) 25. Dans certaines études, la lymphe canal thoracique plutôt que canal lymphatique mésentérique est canulée pour estimer le transport de l&#39;intestin par l&#39;intermédiaire des vaisseaux lymphatiques, bien que cela peut surestimer transit dans l&#39;intestin grêle, en fonction du facteur d&#39;intérêt, comme le conduit de la lymphe thoracique reçoit également la lymphe des autres 22,26 régions. Des modèles de canulation lymphatiques ont également été décrits dans plusieurs autres espèces, y compris les souris, 15,27 mini-pigs 12, 28,29 moutons, les cochons et les chiens 30 31. Cependant, le modèle de rat est le plus largement et uniformément citée. Des protocoles détaillés pour canulation du canal lymphatiques mésentériques suivie par collection de la lymphe dans conscient 25 ou 22 anesthésié les rats et les souris 15,27 ont déjà été publiés et le lecteur intéressé est dirigé à ces protocoles. Ce protocole est la première à démontrer la technique dans un format visualisée. Le modèle de rat lymphatique canule a des avantages sur les modèles animaux plus grands en termes de dépenses, la facilité de la chirurgie et des considérations éthiques. Par rapport au modèle de la souris, la chirurgie de canulation lymphatique mésentérique est également plus facile chez le rat, bien que le modèle de la souris permet des études plus détaillées de 27 animaux transgéniques. Néanmoins, il existe certaines limites du modèle de rat, en particulier ceux qui sont associés à des différences dans la physiologie, cette limite extrapolatà d&#39;autres situations d&#39;ions pré-cliniques et cliniques. Par exemple, dans le flux de bile de rat est constant et indépendant de la prise alimentaire tandis que dans l&#39;alimentation ultérieure des espèces ou des lipides de stimuler l&#39;écoulement de bile 32. Cela crée des défis à l&#39;obtention d&#39;environnements pré et post-prandiale représentatifs chez le rat qui reflètent ce que l&#39;on voit dans les grandes espèces et les humains. Pour les études d&#39;administration de médicament, les espèces plus grandes peuvent également être préférées lorsque l&#39;évaluation du transport lymphatique après l&#39;administration de la dose humaine 25 forme réaliste. Dans une étude récente, les taux de transport des lipides dans la lymphe mésentérique ont été jugées comparables entre les espèces (souris, rat, chien) après l&#39;administration d&#39;une masse équivalente et le type de lipides qui fournit une certaine confiance dans l&#39;extrapolation des données de transport des lipides à travers les espèces 27. Toutefois, le transport d&#39;un modèle lipophile drogue, halofantrine, classées dans l&#39;ordre de la taille de l&#39;animal (ce est à dire, chien&gt; rat&gt; souris). Un facteur d&#39;échelle peut donc être nécessaire pour extrapolate données lymphatiques de transport de la drogue de rat à d&#39;autres espèces. Une limitation de la lymphe modèles de canulation, en général, est que la collecte de la lymphe passif directement à partir d&#39;un canal lymphatique peut modifier la circulation lymphatique et le transport depuis les vaisseaux lymphatiques travailler contre un gradient de pression qui est modifié une fois que le récipient est pourvue d&#39;une canule 33. Le modèle de la lymphe cathétérisme peut aussi être difficile à établir dans les laboratoires qui ne sont pas familiers avec la technique. D&#39;autres modèles ont ainsi été décrits. Par exemple, le transport de facteurs via le système lymphatique intestinal, telles que les lipoprotéines et des molécules lipophiles, a été étudié indirectement via la collecte du sang. Un tel modèle consiste à comparer les concentrations sanguines de lipides et / ou après l&#39;administration orale de médicaments en présence et en l&#39;absence d&#39;inhibiteurs (par exemple, la colchicine, Pluronic L81, cycloheximide) de production de lipoprotéine qui bloquent le transport intestinal 34 lymphatique. Un avantagedes modèles qui quantifient transport lymphatique indirectement via la collecte d&#39;échantillons de sang, ce est qu&#39;il permet une certaine évaluation du transport lymphatique chez l&#39;homme que la chirurgie invasive ne est pas nécessaire 35. Toutefois, les inhibiteurs de transport lymphatique ne sont pas spécifiques et les facteurs qui sont transportés via les vaisseaux lymphatiques sont dilués et modifiées dans la circulation systémique qui complique ces évaluations. Alternatives in vitro ont également été décrites. Par exemple, les cultures cellulaire Caco-2 ou entérocytes isolés ont été utilisés pour étudier plus en détail la sécrétion intestinale des molécules qui entrent dans les vaisseaux lymphatiques 36-38. Un modèle avancé in vitro qui est plus représentatif du microenvironnement intestinal humain a également été récemment décrit 39. Dans ce modèle d&#39;une couche de cellules endothéliales lymphatique est co-cultivées avec des cellules Caco-2 qui permet une analyse plus détaillée du transfert de substances de l&#39;intestin dans les lymphatiques. Toutefois, dans vitro systèmes cellulaires manquent flux d&#39;échange et de transmission, à savoir l&#39;interconnexion avec une lumière intestinale et le sang sous-jacente et la vascularisation lymphatique. Dans une autre approche, Kassis et al. A établi un double canal (champ lumineux vidéo à grande vitesse et la fluorescence) système d&#39;imagerie in situ qui permet des comparaisons quantitatives entre la contraction des vaisseaux, la circulation lymphatique et les concentrations de lipides fluorescents dans les vaisseaux lymphatiques mésentériques 33 dans. Un avantage de ce modèle au cours de ce qui précède dans des systèmes in vitro est qu&#39;elle permet un suivi précis du passage de cellules immunitaires à travers les vaisseaux lymphatiques. Les mesures absolues de lipides masse (ou médicament) transports sont, cependant, pas encore établis en utilisant des méthodes d&#39;imagerie. In vitro et in silico approches de prédire précisément la mesure du transport lipophile de drogue via les vaisseaux lymphatiques intestinaux ont également été publiés 40-42. Par exemple, l&#39;affinité ex vivo de plusieurs compounds pour chylomicrons plasmatiques a été trouvé pour corréler raisonnablement bien avec leur transport lymphatique in vivo 41. Par la suite, le même groupe a établi un modèle en silico pour prédire l&#39;affinité du médicament pour les chylomicrons sur la base de plusieurs propriétés physico-chimiques 40. Holm et al. A également établi un relativement complexe modèle in silico pour prédire d&#39;emblée transport lymphatique de composés lipophiles sur la base de 42 descripteurs moléculaires. Ces modèles peuvent fournir une approche utile pour prédire l&#39;ampleur du transport lymphatique des drogues inconnues. Validation des modèles avec un large éventail de médicaments et entre les différents laboratoires sera toutefois être nécessaire pour confirmer leur précision et la reproductibilité. Canulation du canal de lymphatiques mésentériques reste donc le seul moyen d&#39;examiner directement le contenu de drainage lymphatique de l&#39;intestin grêle et le taux de l&#39;ensemble complexe de facteurs (cellules, protéines de transit,peptides, des lipides, des médicaments) dans la lymphe dans une situation in vivo. Ici, nous décrivons un protocole pour la canulation de la lymphe et conduit carotide artère mésentérique qui permet la collecte de sang et de lymphe mésentérique systémique de rats anesthésiés. Les données représentatives démontrent comment le modèle peut être utilisé pour examiner lipidique et le transport de la drogue de l&#39;intestin via le système lymphatique mésentérique. Elle est suivie par une discussion des difficultés qui peuvent être rencontrées pour établir le modèle et un guide de dépannage. Une fois établi le modèle est un outil puissant pour étudier le transport lymphatique intestinal.

<table><tbody><tr><td>Solution saline stérile</td><td>Baxter healthcare</td><td>AHB 1307</td><td>Toutes les marques peuvent être utilisées. Exemple : Baxter 100 ml sacs salins, boîte de 50</td></tr><tr><td>à 70 % d’éthanol dans l’eau</td><td>N’importe quelle marque peut</td><td></td><td>être utilisée</td></tr><tr><td>Solution de gluconate de chlorhexidine (Microshield 4)</td><td>Livingstone International</td><td>JJ60243L N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =JJ60243L</td></tr><tr><td>Solution de bétadine</td><td>Livingstone International</td><td>BU0510</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =BU0510</td></tr><tr><td>Ilium Ketamil (Kétamine 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp ;</td><td>KETA I 1</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>Ilium xylazil (xylazine 100 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp ;</td><td>TRO-3828</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>ACP 10 Injection (Acépromazine 10 mg/ml)</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp ;</td><td>VTG-DACP010020</td><td>http://www.provet.com.au/</td></tr> <tr><td>Pentobarbital sodique</td><td>PROVET VICTORIA&nbsp ;</td><td>24529</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est Lethabarb&reg ; 325 mg/ml de pentobarbital de sodium, Virbac Santé Animale. http://www.provet.com.au</td></tr><tr><td>Héparine (35000I.U. dans 35 mL)</td><td>Sigma Pharmaceuticals</td><td>337220</td><td>http://sigmaco.com.au/</td></tr> <tr><td>Acide éthylènediaminetétraacétique (EDTA) sel disodique dihydraté</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E1644</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est le sel disodique d’EDTA de Sigma.</td></tr><tr><td>Canule en polyéthylène (PE) d.e. 0,96 mm x d.i. 0,58 mm</td><td>Rallonges de microtubes</td><td>PE8050</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple : Tube PE 0,96 x 0,58 mm, 30 m</td></tr><tr><td>Canule en polyéthylène (PE) diamètre extérieur 0,8 mm x diamètre intérieur 0,5 mm</td><td>Extensions de microtubes</td><td>PE9658</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. Exemple : tube PE 0,8 x0,5 mm, 30 m</td></tr><tr><td>Règle</td><td>N’importe quelle marque peut</td><td></td><td>être utilisée</td></tr><tr><td>Marqueurs</td><td>N’importe quelle marque peut</td><td></td><td>être utilisée</td></tr><tr><td>Briquet</td><td>N’importe quelle marque N’importe quelle</td><td></td><td>marque peut être utilisée</td></tr><tr><td>Adhésif vétérinaire</td><td>N’importe quelle</td><td>marque peut être utilisée</td>Aiguilles <td></td></tr> de <tr><td>calibre 23</td><td>Livingstone International</td><td>DN23GX0.75LV</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 23GX0.75inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT= 6& search=DN23GX0.75LV</td></tr><tr><td>Aiguilles de calibre 25</td><td>Livingstone International</td><td>DN25GX1.0LV</td><td>Toutes les marques peuvent être utilisées. L’exemple ici est l’aiguille jetable Livingstone, stérile, 25GX1.0inch, 100/BOX. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search= DN25GX1.0LV</td></tr><tr><td>Seringue 1 ml</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS01TA N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée. Exemple : seringue Terumo 1 ml Slip Tuberculin 100/boîte. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search = T3SS01TA</td></tr><tr><td>seringue de 10 ml</td><td>Livingstone International</td><td>T3SS10SA N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée. Exemple, ici : seringue Terumo 10 ml Slip 100/boîte. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =T3SS10SA</td></tr><tr><td>Tampons de gaze</td><td>Livingstone International</td><td>GSC075 N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée et coupée à la taille requise. L’exemple ici est des cotons-tiges remplis de coton 7,5 x 7,5 cm, 8 plis. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =GSC075</td></tr><tr><td>Cotons-tiges</td><td>Livingstone International</td><td>CTAST075DP</td><td>Toutes les marques peuvent être utilisées. L’exemple ici est l’applicateur en plastique Livingstone à double pointe. 75MM. 100/PQT. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =CTAST075DP</td></tr><tr><td>Coussin chauffant</td><td>Ratek</td><td>WT1</td><td>Toute marque qui maintient la température à 37C peut être utilisée. L’exemple ici est le plateau chauffant Ratek.</td></tr><tr><td>Lampe chirurgicale</td><td>Harvard Apparatus</td><td>72-0215 avec 72-0267 N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’appareil Harvard V-Lux 1000 Source de lumière froide avec guide de lumière à col de cygne bifurqué, noir, diamètre de fibre de 4,7 mm (chaque bras). http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_50601_ -1_HAI_ProductDetail et&nbsp ; http://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/product_11051_10001_35487_ -1_HAI_ProductDetail___</td></tr><tr><td>Microscope chirurgical</td><td>Zeiss</td><td>495005-0014-000</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. C’est le cas du stéréomicroscope Zeiss Stemi 2000-C avec support S, double spot et KL 300 LED. https://www.micro-shop.zeiss.com/?l=en&p=us&f=e&i=10143</td></tr><tr><td>Suture en soie</td><td>Livingstone International</td><td>DTSK163019F4 N’importe</td><td>quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est &nbsp ; 3/8 cercle coupe inversée suture en soie 3/0 fil 19mm. http://www.livingstone.com.au/?PG=search_result&CAT=6&search =DTSK163019F4</td></tr><tr><td>Lames de scalpel</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10020-00</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est la lame de scalpel FST #20. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=191</td></tr><tr><td>Manche de scalpel</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>10004-13</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est le manche de scalpel FST #4. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=298&CategoryId=51</td></tr><tr><td>1 x Petits ciseaux chirurgicaux</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>14060-09</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est les ciseaux fins FST, 9 cm avec tranchant de 21 mm, tranchants, droits. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=40&CategoryId=17</td></tr><tr><td>2 x Pince à pointe incurvée dentelée</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11001-13</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est une pince à motif standard FST 13 cm avec pointe incurvée de 2,8 x 1,4 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=405&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x ciseaux d’iridectomie</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>15000-08</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est des ciseaux à ressort FST Vannas - Tranchant de 2,5 mm, droits. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=17&CategoryId=16&nbsp ;</td></tr><tr><td>1 x pince à pointe dentelée droite</td><td>Outils de science fine (FST)</td><td>11650-10</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple est le FST Graefe 10 cm droit avec une pointe dentelée de 1 x 0,99 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=390&CategoryId=32</td></tr><tr><td>1 x pince à pointe fine, lisse, tranchante, droite</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11251-10</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est la pince FST Dumont #5 droite 11cm avec pointe de 0,08 x 0,04mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=335&CategoryId=29</td></tr><tr><td>1 x Pince avec pince lisse et incurvée</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>11063-07</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est la pince délicate FST 9 cm avec pointe lisse de 0,4 x 0,3 mm. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=360</td></tr><tr><td>2 x Hemostats</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>13010-12</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. Tous les opérateurs n’utilisent pas les hémostatiques. L’exemple est le micro-moustique hémostatique FST de 12 cm avec 20 mm de longueur x 1,3 mm de largeur, dentelé, à pointe droite. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=377&CategoryId=33</td></tr><tr><td>1 x porte-aiguille de suture</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>12001-13</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. Par exemple, il s’agit d’un porte-aiguille Hasley FST de 13 cm avec une pointe de 16 mm de longueur x 1,9 mm de largeur. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=254&CategoryId=70</td></tr><tr><td>1 x pince artérielle</td><td>Fine Science Tools (FST)</td><td>18050-28</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est le FST Bulldog Serrefines droit, 28 mm de long, 9x1,6 mm de dimension de mâchoire avec une presse à pince moyenne. http://www.finescience.ca/Special-Pages/Products.aspx?ProductId=270&CategoryId=82</td></tr><tr><td>Acide oléique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>O1008</td><td>Si nécessaire, n’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’acide oléique pur à 99 %. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/o1008?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>d’acide 14C-oléique</td><td>Perkin&nbsp ;</td><td>NEC317050UC</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’acide oléique, [1-14C]-, 50&micro ; Ci (1,85 Moq). http://www.perkinelmer.com/Catalog/Product/ID/NEC317050UC</td></tr><tr><td>Taurocholate de sodium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>T4009</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. L’exemple ici est l’acide taurocholique sodium sel hydrater &ge ; 95 % (TLC) . http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/t4009?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Halofantrine</td><td>Glaxo Smith Kline</td><td></td><td>Halofantrine a été aimablement offert en cadeau par Glaxo Smith Kline</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium monobasique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71507</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. C’est le cas, par exemple, du phosphate monobasique monohydraté de sodium, BioXtra, pour la biologie moléculaire >99,5 %. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71643?lang=en&region=AU</td></tr><tr><td>Phosphate de sodium dibasique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71643</td><td>N’importe quelle marque peut être utilisée. C’est le cas, par exemple, du phosphate de sodium dibasique dihydraté, BioUltra, pour la biologie moléculaire, >99 %. http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/71507?lang=en&region=AU</td></tr></tbody></table>

le lymphatiques mésentériques duct cannulated rat modèle: application à l&#39;évaluation des lymphatique intestinale transport des médicaments

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

Le système lymphatique intestinale joue un rôle clé dans le transport de fluide, l&#39;absorption des lipides et la fonction immunitaire. Lymphatique découle directement de l&#39;intestin grêle par une série de vaisseaux lymphatiques et des ganglions qui convergent au niveau du conduit supérieure lymphatiques mésentériques. Canulation du canal lymphatique mésentérique permet ainsi la collection de lymphe mésentérique se écoulant à partir de l&#39;intestin. Lymphatiques mésentériques se compose d&#39;une fraction cellulaire de cellules immunitaires (lymphocytes 99%), la fraction aqueuse (liquide, des peptides et des protéines telles que les cytokines et les hormones de l&#39;intestin) et la fraction de lipoprotéine (lipides, les molécules lipophiles et Apo-protéines). Le modèle mésentérique canulation conduit lymphatique peut donc être utilisé pour mesurer la concentration et le taux de transport d&#39;un éventail de facteurs de l&#39;intestin via le système lymphatique. Les variations de ces facteurs en réponse à différents problèmes (par exemple, les régimes alimentaires, les antigènes, médicaments) et dans la maladie (par exemple, une maladie intestinale inflammatoire, le VIH, le diabète) peuvent également be déterminée. Une zone d&#39;expansion intérêt est le rôle du transport lymphatique dans l&#39;absorption de médicaments administrés par voie orale lipophiles et précurseurs qui se associent avec les voies d&#39;absorption intestinale des lipides. Nous décrivons ici, en détail, un modèle de rat de canulée conduit lymphatiques mésentériques qui permet d&#39;évaluer le taux et l&#39;étendue de lipides et le transport de la drogue par le système lymphatique pendant plusieurs heures après la livraison intestinale. Le procédé est facilement adaptable à la mesure d&#39;autres paramètres dans la lymphe. Nous fournissons des descriptions détaillées des difficultés qui peuvent être rencontrées lors de l&#39;établissement de cette méthode chirurgicale complexe, ainsi que des données représentatives des expériences ratées et réussies de fournir des instructions sur la façon de confirmer le succès expérimental et interpréter les données obtenues.

Les résultats d&#39;une expérience représentative pour quantifier la mesure cumulative et le taux de lipide et le transport du médicament à travers le système lymphatique après l&#39;accouchement intestinal en utilisant le modèle lymphe de canulation mésentérique sont représentés sur la figure 4 et la figure 5. Dans cette expérience, 200 pg du modèle lipophile médicament halofantrine a été administré dans le duodénum de rat en 2 heures dans une formulation contenant 40 mg d&#39;acide ol...

Nous décrivons ici une technique de canulation du canal lymphatique mésentérique chez le rat qui permet de quantifier le transport des lipides et des médicaments par le système lymphatique après l’administration intestinale. La technique peut être adaptée pour évaluer les concentrations de lymphe mésentérique et/ou le transport de liquide, de cellules immunitaires, de peptides, de protéines et de molécules lipophiles.

Le lymphatiques mésentériques Duct Cannulated Rat Modèle: application à l&#39;évaluation des lymphatique intestinale transport des médicaments

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

L'objectif général de cette procédure est d'évaluer la vitesse et l'ampleur du transport des lipides et des médicaments vers le système lymphatique intestinal après administration intestinale. Cela est réalisé en isolant et en canulant d'abord le canal lymphatique mésentérique afin de recueillir la lymphe. Dans une deuxième étape, le duodénum est canulé pour permettre l'infusion dans l'intestin, puis l'artère carotide est canulée afin de prélever des échantillons sanguins.Dans la dernière étape, le traitement expérimental est administré dans le duodénum et la lymphe ainsi que le sang sont recueillis afin de quantifier les concentrations systémiques de lipides ou de médicaments. En fin de compte, ce modèle peut être utilisé pour évaluer l'absorption totale et le transport lymphatique intestinal des lipides et des médicaments après administration intestinale. Le principal avantage de cette technique réside dans la possibilité de canuler directement le canal lymphatique mésentérique et de recueillir la lymphe pendant toute la durée de l'expérience.Ceci permet d'estimer la masse absolue de matière qui pénètre et circule dans la lymphe mésentérique. In vivo, bien que ce modèle permette l'évaluation in vivo du transport de médicaments et de lipides, il peut également être utilisé pour mesurer le transport lymphatique intestinal de tout facteur d'intérêt, ainsi que les modifications du transport lymphatique de ces facteurs en réponse à diverses contraintes ou à différents états pathologiques.La démonstration visuelle de cette méthode est essentielle, car la canulation du canal lymphatique mésentérique est une procédure complexe et délicate en raison de la petite taille du canal, de sa fragilité et du jeûne des animaux. La démonstration transparente de la procédure sera assurée par mon collègue et membre du corps professoral de l'Université Monash, le Dr Natalie Cus, ainsi que par un postdoctorant senior du groupe, le Dr LJ Hugh. La veille de l'intervention chirurgicale, coupez les canules à la longueur appropriée et utilisez une lame chirurgicale stérile pour réaliser un biseau à l'extrémité de chaque morceau de tubulure. Ensuite, pour préparer la canule intraduodénale, faites reboucler la canule sur elle-même, puis chauffez-la afin de créer un point d'ancrage dans la tubulure.Le jour de l'intervention chirurgicale, raser les poils du côté droit de l'abdomen, du cou et de la région de la clavicule gauche d'un rat adulte anesthésié, puis nettoyer les zones chirurgicales de manière aseptique à l'aide de trois frictions successives à la solution de povidone-iodée et à l'éthanol à 70 % afin de canuler le canal lymphatique. Placer l'animal sur le côté droit, face vers le haut, et utiliser une lame de scalpel stérile pour ouvrir la couche superficielle de la paroi musculaire abdominale par une incision droite de quatre centimètres, s'étendant du processus xiphoïde au flanc droit, environ deux centimètres en dessous de la marge costale. Rétracter l'intestin grêle sous la paroi abdominale gauche et utiliser deux à trois morceaux de gaze stérile imprégnés de sérum physiologique pour le maintenir en place.Ensuite, placez le rat au-dessus d'une seringue en plastique de 10 millilitres positionnée horizontalement sous le dos de l'animal au niveau du rein droit. Pour faciliter la visualisation du canal lymphatique mésentérique, repérez le canal lymphatique mésentérique supérieur, d'un diamètre d'environ 0,5 à un millimètre, perpendiculaire au rein droit, et immédiatement rostral et parallèle à l'artère mésentérique pulsatile de couleur rouge foncé. Notez que chez les rats non jeûnes, comme illustré ici, le canal lymphatique mésentérique supérieur est blanc, opaque et plus facile à visualiser que chez les rats infestés.Ensuite, passez une paire de forceps droits à travers le lit de tissu adipeux périnéal au niveau de la marge inférieure du rein droit, parallèlement au canal lymphatique mésentérique supérieur, et à travers les couches de tissu conjonctif situées immédiatement sous la veine cave. Puis, à l’aide de la pointe des forceps, faites passer la canule lymphatique à travers le lit de tissu adipeux périnéal, une extrémité étant placée immédiatement adjacente au canal lymphatique mésentérique, l’autre étant extériorisée de l’animal au niveau du rein droit. Ensuite, à l’aide d’un microscope chirurgical et de forceps de bijoutier, isolez le canal lymphatique mésentérique à travers les couches superficielles de tissu conjonctif et de tissu adipeux par une dissection émoussée, en commençant par l’extrémité inférieure, en prenant soin de ne pas endommager le canal lymphatique une fois qu’il est isolé.Utilisez la pointe de la pince à pointe fine pour faire un petit trou dans le canal lymphatique. Après vous être assuré que la canule lymphatique est complètement remplie de solution anticoagulante et ne contient aucune bulle d'air, utilisez une petite paire de pinces pour insérer la canule lymphatique d'environ deux à quatre millimètres à l'intérieur du canal lymphatique mésentérique par la ponction. Si la canulation est réussie, un écoulement progressif de lymphe intestinale sera observé à partir de l'extrémité libre de collecte de la canule.Lorsque cela se produit, déposer une petite goutte de colle de cyanoacrylate sur l'orifice d'entrée du canal lymphatique afin de fixer la canule, en prenant soin de ne pas obstruer le vaisseau avec un excès de colle pour canuler le duodénum. Tout d'abord, repérer le tissu correspondant à la section rose vif de l'intestin grêle ; en tirant doucement vers le bas, on met en évidence l'estomac. Ensuite, utiliser une aiguille stérile de calibre 23 pour pratiquer un petit trou de ponction dans le duodénum au niveau du pylore, à environ deux centimètres en dessous de la jonction entre l'estomac et le duodénum.Ensuite, insérez l'extrémité en forme de crochet du cathéter duodénal à travers la perforation et fixez le cathéter en place à l'aide d'une goutte de colle acrylique Sano. Puis, utilisez des points de suture pour fermer l'incision de la paroi musculaire abdominale. La canulation de l'artère carotide peut être réalisée avant ou après la canulation du canal lymphatique mésentérique. Nous préférons généralement canuler l'artère carotide avant la canulation du canal lymphatique, afin de réduire le risque de déloger le cathéter lymphatique lors du déplacement de l'animal. Pour canuler l'artère carotide, marquez d'abord le cathéter de l'artère carotide à 2,5 centimètres du bout biseauté afin d'identifier la portion du tube à insérer dans l'artère.Ensuite, reliez l'extrémité non biseautée de la canule à une aiguille de 25 gauge fixée à une seringue remplie de solution anticoagulante, puis remplissez la canule avec cette solution, en veillant à ce qu'aucun espace d'air ne soit présent. Puis, pratiquez une incision longitudinale d'un à 1,5 centimètre à travers la couche cutanée au-dessus du côté gauche de la trachée dans le plan sagittal, puis utilisez une pince à extrémité émoussée pour disséquer le tissu conjonctif sous-cutané et exposer les muscles cervicaux appariés situés en profondeur. Écartez les muscles cervicaux pour faire apparaître l'artère carotide gauche pulsatile, située à environ un centimètre sous la surface de la peau.Ensuite, nettoyer le tissu conjonctif recouvrant l'artère par une dissection émoussée et utiliser des pinces à tissus effilées pour isoler une section d'environ un centimètre de l'artère. Puis, utiliser des pinces fines pour passer deux fils de soie sous l'artère carotide, en les positionnant à chaque extrémité de la section isolée. Ensuite, nouer le fil le plus éloigné du cœur et de la clavicule du rat, et placer une paire de pinces fines droites sous la carotide afin d'occlure le flux sanguin à travers l'artère.À l’aide de ciseaux iris à pointe fine, pratiquez maintenant une petite incision sur la surface supérieure de l’artère, à environ un tiers de la distance depuis le haut de la zone isolée. Insérez la pointe de la canule dans l’artère à l’aide d’une pince courbe. Une fois insérée, retirez la pince droite à pointe fine, occluez le flux sanguin et avancez la canule de 2,5 centimètres dans l’artère en utilisant deux paires de pinces.Un pour maintenir la canule à l'intérieur de l'artère afin d'empêcher le sang de refluer, et l'autre pour insérer la canule. Ensuite, utiliser une pince artérielle de petite taille pour maintenir la canule à l'intérieur de l'artère. Injecter une solution anticoagulante dans la canule, puis aspirer légèrement une petite quantité de sang pour confirmer la perméabilité du tube.Ensuite, rincer la canule avec une solution anticoagulante et sceller l'extrémité à l'aide de la flamme d'un briquet. Enfin, utiliser les fils de suture pour fixer la canule en place et retirer le clamp artériel. Puis placer un troisième point de suture autour de l'artère et de la canule, raccourcir les fils de suture autour de l'artère et fermer la plaie du cou avec des points de suture supplémentaires ; après la période de récupération, injecter une formulation d'intérêt dans l'animal par l'intermédiaire de la canule duodénale.Comme illustré sur le graphique après l'administration du modèle, le médicament lipophile halal fanene, le débit moyen du flux lymphatique chez les rats correctement cannelés était compris entre 0,4 et 1,3 millilitre par heure. Chez certains animaux, le débit lymphatique était légèrement inférieur durant les première à troisième heures suivant la canulation, avant d'augmenter, un phénomène couramment observé après une canulation lymphatique réussie chez les rats mal cannelés. Toutefois, le débit reste nettement plus faible que celui observé dans les expériences réussies tout au long de la période de collecte.De même, dans ces expériences représentatives, le transport lymphatique cumulatif du triglycéride et du RIN halal était nettement plus faible chez les animaux mal canulés. Alors que dans les groupes correctement canulés, le transport cumulatif halalan moyen était de 15,1 % de la dose et le transport cumulatif de triglycérides s'élevait à 61 milligrammes sur 10 heures. Dans cette expérience représentative de transport des lipides, la proportion de la dose lipidique exogène marquée au radio-isotope transportée dans la lymphe était de 54 %. Ces valeurs ne différaient pas de manière significative de celles observées précédemment.Pour une formulation similaire, la vitesse de transport des triglycérides et des médicaments vers la lymphe atteint un maximum peu de temps après l'administration des lipides et du médicament, puis revient à des niveaux de base. Comme c'est habituel dans les expériences sur le transport intestinal lymphatique des lipides et des médicaments. La vitesse de transport du médicament dans la lymphe au cours de chaque période de temps reflète ce phénomène observé pour le transport des triglycérides, puisque le médicament est transporté dans la lymphe.En association avec les lipoprotéines riches en triglycérides. Une fois maîtrisée, la canulation peut être réalisée en moins de 30 minutes si aucune difficulté n'est rencontrée. Après cette procédure, les composants présents dans la lymphe recueillie peuvent être isolés et utilisés pour des expériences supplémentaires, telles que la réinfusion chez des animaux receveurs afin d'évaluer directement leur fonction, leur métabolisme, leur élimination ou leurs profils de distribution. Après avoir visionné cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension des techniques permettant d'isoler et de canuler le canal lymphatique mésentérique, l'artère carotide et le duodénum.Grâce à ces techniques, vous devriez être en mesure d'évaluer le transport de médicaments, de lipides et d'autres facteurs depuis l'intestin à travers et vers la lymphe mésentérique in vivo.

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