Name: Contraste dynamique amélioré imagerie par résonance magnétique dun modèle orthotopique cancer du pancréas de souris (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-04-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 24 s
Description: Découvrez l'imagerie par résonance magnétique à contraste dynamique pour visualiser la microvascularisation des tumeurs pancréatiques orthotopiques chez la souris. Cette méthode permet d'évaluer les réponses vasculaires aux thérapies.

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Les auteurs remercient Jeffrey Sellers pour son aide à la modélisation du cancer du pancréas orthotopique chez la souris. Ce travail a été soutenu par des subventions pilotes d’initiative de recherche du Département de radiologie de l’UAB et des subventions NIH 2P30CA013148 et P50CA101955.

Toutes les procédures ont été approuvées par le soin et l&#39;utilisation des animaux Commission institutionnelle à l&#39;Université d&#39;Alabama à Birmingham. Modélisation 1. Orthotopique pancréatique tumeurs Souris <ol><li> Culture des lignées cellulaires cancéreuses humaines pancréatiques-standard dans du milieu de Eagle modifié par Dulbecco (DMEM) supplémenté avec du sérum bovin fœtal à 10%. Maintenir toutes les cultures à 37 ° C dans une atmosphère humidifiée avec 5% de CO 2. </li><li> Utilisez 8-10 souris femelles graves semaine-vieux combinés immunodéficients. Placez les cages des animaux à 12 heures de lumière et le cycle de l&#39;obscurité de 12 heures à température ambiante (21 ± 2 ° C) et 60% d&#39;humidité. </li><li> Anesthésier les animaux en utilisant une ventilation avec 2% d&#39;isoflurane mélangé avec de l&#39;oxygène (2 L / min) pendant toute la chirurgie. Confirmer la profondeur de l&#39;anesthésie par pincement de l&#39;orteil réflexe. La place des animaux sur un coussin chauffant (37 ° C) pour maintenir la température du corps. Appliquer une pommade ophtalmique vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. &amp;# 160; </li><li> Enlever les poils dans le quadrant supérieur gauche de l&#39;abdomen de chaque souris, et de donner un médicament analgésique (carpofen, 5 mg / kg de poids corporel sous-cutanée) dans la région. Appliquer une solution de bétadine sur la peau exposée. Préparer instruments chirurgicaux autoclave. </li><li> Faire une incision de 1 cm dans la peau et du péritoine en utilisant l&#39;iris ciseaux droits. Retirez délicatement le pancréas de l&#39;abdomen en utilisant des pinces chirurgicales. </li><li> Introduire 28 G aiguille d&#39;une seringue 0,5 ml d&#39;insuline dans la queue du pancréas et infuser ensuite lentement une solution de 2,5 millions de cellules cancéreuses pancréatiques humaines dans 30 pl de DMEM. Assurez-vous que une petite cloque se forme dans la tête du pancréas par la solution. </li><li> Placez délicatement le pancréas dans l&#39;abdomen en utilisant des pinces chirurgicales. Fermez le péritoine et la peau dans une couche avec deux interrompu 5-0 sutures Prolene, puis mettre fin à l&#39;anesthésie. Ne retournez pas un animal qui a subi une intervention chirurgicale à la compagnie d&#39;autres animaux jusqu&#39;à guérison complète.60; Retirer sutures à la chirurgie de poste 7 ~ 10 jours. </li><li> Donner une autre dose du médicament analgésique (carpofen, 5 mg / kg de poids corporel sous-cutanée) à 24 h après la chirurgie. </li><li> Vérifiez la taille de la tumeur en palpant la zone de la chirurgie en utilisant deux doigts. Les tumeurs se sentent généralement plus dense et plus bosselée que les tissus et organes environnants. Habituellement, cela prend ~ 1-2 semaines pour commencer à se sentir une tumeur. </li><li> De surveiller les animaux quotidiennement les signes de la maladie. Lorsque les animaux apparaissent (comportements de toilettage et d&#39;évitement normales manque) malades, nous les résilié par dislocation cervicale sous anesthésie. </li></ol> 2. imagerie par résonance magnétique <ol><li> Appliquer IRM lorsque la taille de la tumeur est d&#39;environ 5-7 mm de diamètre en général à 2 ~ 4 semaines après l&#39;implantation des cellules. Utilisez un scanner RM dédiée à l&#39;imagerie du petit animal ou un scanner RM clinique équipée d&#39;une bobine spécialisé pour l&#39;imagerie du petit animal. NOTE: Nous avons utilisé un petit animal MR scanner 9.4T avec une combinaison d&#39;un volume résonateur 1 H/ Émetteur et un récepteur de bobine de surface (30 mm de diamètre) (Bruker BioSpin Corp., Billerica, MA). Une bobine de surface offre une meilleure rapport (SNR) 14 signal-sur-bruit. </li><li> Préparer un agent de contraste IRM à base de gadolinium à injecter ~ de 0,1 à 0,2 mmol / kg à chaque animal dans ~ 0,1 au 0,2 ml de PBS (tampon phosphate salin). NOTE: Nous avons utilisé gadotéridol, et injecté 0,2 mmol / kg dans 0,15 ml de PBS sur une période de 15 sec (0,1 ml / sec). </li><li> Préparer un tube micro-polyéthylène (longueur: 7,62 mm, diamètre intérieur: 0,28 mm, diamètre extérieur: 0,64 mm). Insérez une aiguille 30 G (longueur de 12,7 mm) dans une extrémité du tube, et une aiguille de 30 G émoussée de pointe (9,5 mm de longueur) dans l&#39;autre extrémité. Connecter une seringue de 1 ml contenant MR agent de contraste à l&#39;aiguille de pointe émoussée, et poussez lentement la seringue pour remplir le tube entier avec l&#39;agent de contraste MR. </li><li> Anesthésier des animaux à l&#39;aide de la ventilation avec ~ 1 - 2% d&#39;isoflurane mélangé avec de l&#39;oxygène (2 L / min) tout au long de la préparation et de l&#39;imagerie. Confirmer la profondeur de anesthesia par pincement de l&#39;orteil réflexe. Appliquer une pommade ophtalmique vétérinaire sur les yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. Dilater la veine caudale en utilisant une lampe de chaleur avant l&#39;insertion de l&#39;aiguille. Prenez le milieu de l&#39;aiguille de 30 G en utilisant une pince Kelly, et l&#39;insérer dans la veine de la queue. Bande fois la queue et le tube sur un morceau de plastique ou de papier de carton (10 mm de largeur x 100 mm de longueur) pour garder la queue droite. </li><li> Placez l&#39;animal en position couchée dans un lit de l&#39;animal équipé d&#39;une circulation d&#39;eau chaude (ou air chaud) pour réguler la température du corps pendant l&#39;imagerie. Régler la température sur le lit à 37 ° C. Insérer une sonde de température rectale à surveiller la température du corps lors de l&#39;imagerie. </li><li> Appliquer une carte en plastique orthogonalement plié dans la région abdominale. Assurez-vous que la tumeur est située derrière l&#39;extrémité supérieure de la planche, puis déroulez le bord légèrement (~ 2 mm) pour assurer la tumeur est pris par le conseil. Collez le conseil au lit animal fermement. </li><li> Tape à transduce pad de la respirationr (SA Instrument, Inc., Stony Brook, NY) sur la région de la poitrine de surveiller la respiration de l&#39;animal lors de l&#39;imagerie. Placez une bobine de surface sur le dessus de la région de la tumeur, et la bande au lit animal fermement. Appuyez sur le lit animal dans le scanner MR de placer la région de la tumeur à l&#39;axe de la bobine de volume (diamètre intérieur: 72 mm). </li><li> Effectuer adaptation et d&#39;accord à la fois pour l&#39;émetteur et le récepteur, suivi par calage. </li><li> Commencer avec une séquence d&#39;MR anatomique pour localiser la tumeur. Utilisez une séquence d&#39;écho de spin (T2) turbo T2 pour obtenir des images axiales avec les paramètres d&#39;acquisition suivantes. temps de répétition (TR) / temps d&#39;écho (TE) = 3000/34 ms, 128 x 128 matrice, le terrain de 30 x 30 mm de vue, nombre de moyennes = 1, écho longueur du train = 4, et 20 contiguës 1 mm tranches épaisses dans un mode entrelacé pour couvrir toute la région de la tumeur (durée totale du balayage: 1,6 min). Remarque: Comme les tumeurs pancréatiques orthotopique sont plus difficiles à se trouver que celles sous-cutanées, locali conventionnelzer images ayant une résolution inférieure peuvent ne pas être utile. </li><li> Acquérir (en T1) images pondérées en T1 avec différents angles bascules pour récupérer T1 carte. A cet effet, utiliser un écho de gradient approche angle multiflip avec les paramètres suivants: temps de répétition (TR) / temps d&#39;écho (TE) = 115/3 ms, 128 x 128 matrice, un terrain de 30 x 30 mm de vue, nombre de moyennes = 4, ~ 5-7 contigus 1 mm d&#39;épaisseur des tranches en mode entrelacé pour couvrir la région de la tumeur, et sept angles de bascule de 10, 20, 30, 40, 50, 60, et 70 (temps total de balayage par angle de bascule: 1 min). NOTE: Cependant, l&#39;approche de l&#39;angle multiflip ne est efficace que lorsque le champ B1 homogénéité est élevé. Si non, cartes T1 peut être obtenu avec l&#39;approche de TR multiples au lieu de 15. </li><li> Acquérir des images en T1 avant et après injection de contraste MR à base de gadolinium. Utilisez les mêmes paramètres d&#39;acquisition et de la géométrie pour la cartographie de T1, mais avec l&#39;angle de bascule fixe de 30. Utiliser le codage linéaire pour assurer l&#39;état d&#39;équilibre lorsque le centre de l&#39;espace k est obtenu, especially lors d&#39;un court TR et un angle de bascule de faible degré sont utilisés. Acquérir cinq images de référence avant l&#39;injection de contraste. Puis acquérir 40 images après injection de contraste (durée totale du balayage: 45 min). Utilisation d&#39;une pompe à seringue pour injecter l&#39;agent de contraste à une vitesse constante (0,01 ml / sec). </li><li> Contrôler la respiration animale continue, et ajuster la concentration de l&#39;isoflurane pour maintenir le taux respiratoire de 50 à 100 respirations par minute. Surveiller la température du corps des animaux tout au long de l&#39;imagerie. </li><li> Après avoir terminé DCE-MRI, enlever l&#39;aiguille et d&#39;autres sondes, et placer l&#39;animal dans une cage vide lits avec des serviettes en papier. Masser doucement la zone inférieure de l&#39;abdomen. La cage doit être placée moitié sous une lampe chauffante pour permettre à l&#39;animal de se déplacer dans et hors du gradient thermique tel qu&#39;il récupère. Ne pas laisser un animal sans surveillance tant qu&#39;il a repris conscience suffisante pour maintenir décubitus sternal. </li></ol> 3. Traitement et analyse d&#39;images <ol><li> REGI Segment tumorales<html> dans les images T2. Dans images pondérées en T2, l&#39;intensité du signal dans la région de la tumeur est plus brillante que celle de tissus environnants, de sorte que la limite de la tumeur peut être délimitée manuellement. REMARQUE: techniques de segmentation semi-automatiques comme seuil global ou contour actif peuvent être utilisés 16,17, mais l&#39;intensité de fond inégale doivent être corrigées surtout quand une bobine de surface est utilisé. </li><li> Créez des cartes T1 et densité de proton. En pondération T1 images acquises avec une séquence d&#39;écho de gradient, en supposant que le temps d&#39;écho (TE) est bien inférieure à la valeur T2 *, la valeur de pixel est déterminée par <img alt="Equation 1" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq1.jpg" /> où S 0 est la densité de protons, T 1 T est une constante de temps de relaxation, TR est le temps de répétition, et θ est un angle de bascule. L&#39;équation (1) peut être réécrite à 641eq2.jpg &quot;/&gt; lorsque S (θ) / sin est remplacée par Y et S (θ) / tanθ est remplacé par X. L&#39;équation (2) est une équation linéaire, et sa pente et l&#39;interception peut être utilisé pour récupérer T1 et S 0 valeurs, respectivement. </li><li> Calculer M. concentration de contraste des images DCE-MR. Lorsque le gadolinium à base d&#39;agents MR de contraste est injecté, T 1 de relaxation constante de temps est modifié au fil du temps. Donc, l&#39;équation (1) peut être réécrit pour <img alt="Équation 3" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq3.jpg" /> T 1 (t) est en relation avec la concentration de contraste RM, C (t), comme suit, <img alt="Equation 4" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq4.jpg" /> où r 1 est la relaxivité longitudinale d&#39;agent de contraste RM. Ainsi, en combinant les équations (3) et (4), MR concentration de contraste est déterminée par <img aLT = &quot;équation 5&quot; fo: contenu-width = &quot;3in&quot; src = &quot;/ files / ftp_upload / 52641 / 52641eq5.jpg&quot; /&gt; </li><li> Quantifier les paramètres pharmacocinétiques de l&#39;agent de contraste MR. C p (t) présente MR concentration de contraste dans le plasma sanguin à l&#39;instant t après le début de l&#39;injection de contraste. C p (t) est appelée fonction d&#39;entrée artérielle (AIF). Si AIF est disponible, les paramètres pharmacocinétiques de l&#39;agent de contraste RM peuvent être calculées par <img alt="Equation 6" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq6.jpg" /> où C t (t) est la concentration de contraste MR dans un tissu cible, p v est le volume de plasma sanguin fractionnée, V e est le volume fractionnel extravasculaire extracellulaire, et K est trans constante de transfert de volume. Flux constante de vitesse, k ep, est égale à K trans divisé par v e. Si AIF ne est pas disponible, alors le modèle de région de référence peut être utilisé à la place 18,19. Le modèle de zone de référence est basé sur le modèle Kety écoulement limité 20 et utilise concentration de contraste dans une région de référence pour supprimer la nécessité d&#39;AIF comme suit, <img alt="Equation 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52641/52641eq7.jpg" /> où C t, ROI (t), K trans, ROI, et v e, ROI sont la concentration de contraste, le transfert de volume constant, et le volume de extravasculaire extracellulaire fractionnée, respectivement, dans la région d&#39;intérêt (ROI), tandis que C t, RR (t), K trans, RR, et v e, RR sont ceux de la région de référence. Musculaire paravertébrale est souvent choisi comme région de référence, et v e, RR dans murin paravertebral musculaire est supposé être constant à 0,08 21. Nous avons utilisé le modèle de région de référence. </li></ol>

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</ol>

Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer.

Nous avons introduit les méthodes détaillées de la modélisation de tumeur pancréatique orthotopique utilisant des souris immunodéficientes, DCE-MRI des tumeurs abdominales chez la souris, et la quantification de ses paramètres cinétiques. Dans la modélisation de tumeur pancréatique orthotopique, il faut prendre soin lors de l&#39;insertion d&#39;une aiguille dans la queue du pancréas. En cas de succès, les cellules seront transférées à la tête du pancréas créer une petite bulle. Lors de l&#39;application d&#39;une carte...

L&#39;objectif global de cette méthode consiste à appliquer un contraste amélioré imagerie par résonance magnétique dynamique (DCE-MRI) pour des xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques chez la souris. DCE-MRI est une méthode non invasive pour évaluer microvascularisation dans un tissu cible en contrôlant la variation de contraste MR sur une certaine période de temps après l&#39;injection. DCE-MRI a été utilisée pour diagnostiquer des tumeurs malignes et pour évaluer la réponse de la tumeur à divers traitements 4.1. Quantitative DCE-MRI a présenté une reproductibilité élevée 5. Pour quantifier les paramètres pharmacocinétiques d&#39;un agent de contraste pour MR dans un tissu cible, toutes les images DCE-RM acquises à différents points dans le temps et T1 carte obtenues avant l&#39;injection de contraste doivent être recalées 6. Toutefois, en raison de mouvements respiratoires et péristaltiques dans la région abdominale, quantitative DCE-MRI a eu une application limitée pour les tumeurs gastro-intestinales. Des modèles de tumeurs du pancréas orthotopique ont été utilisées pour évaluerréponse pancréatique-tumorale après des thérapies biologiques et chimiothérapies 7,8. Des modèles de tumeur orthotopique sont considérés comme supérieurs aux modèles sous-cutanés classiques, étant donné que le micro-environnement dans le site de la tumeur d&#39;origine est réfléchie et de ce fait la réponse tumorale à la thérapie humaine peut être prédit de façon plus précise. Cependant, le pancréas de souris se trouve dans le quadrant supérieur gauche de l&#39;abdomen, de sorte quantitative DCE-MRI de xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopique chez la souris n&#39;a pas été mis en oeuvre facilement. Nous avons établi un protocole de DCE-MRI des tumeurs abdominales chez la souris en fixant les tumeurs en utilisant une carte en plastique orthogonalement plié pour empêcher le transfert de mouvement à partir de la région de la poitrine 9. La pression appliquée par ce forum a été localisé sur la zone abdominale, et n&#39;a pas donné lieu à des difficultés respiratoires. Une technique image coregistration automatisé a été validée pour DCE-MRI des organes abdominaux dans un mode libre-respiratoire, mais il effectue effectively seulement quand les régions cibles se déplacent lentement et régulièrement 10. La fréquence respiratoire des animaux est variable au cours de l&#39;imagerie, de retenue afin physique dans la région abdominale sera nécessaire de récupérer les paramètres pharmacocinétiques fiables dans les modèles de souris de tumeurs pancréatiques orthotopiques. Nous avons quantifié avec succès les paramètres pharmacocinétiques d&#39;un agent de contraste IRM dans les xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques utilisant la carte en plastique orthogonalement plié dans DCE-MRI 11-13. Ici, nous présentons la procédure détaillée de la modélisation de la tumeur du pancréas orthotopique, DCE-MRI des xénogreffes de tumeurs chez la souris, et la quantification des paramètres pharmacocinétiques.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>11965-118</td><td></td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin</td><td>Harlan Laboratories</td><td>BT-9501</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Purdue products</td><td>67618-153-01</td><td></td></tr><tr><td>5-0 Sutures Prolene</td><td>Ethicon</td><td>8720H</td><td></td></tr><tr><td>9.4T MR scanner</td><td>Bruker Biospin Corporation</td><td>BioSpec 94/20 USR</td><td></td></tr><tr><td>Gadoteridol</td><td>Bracco Diagnostics Inc</td><td>NDC 0270-1111-03</td><td></td></tr><tr><td>Tube micro-polyéthylène</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>#PE-10-25</td><td></td></tr><tr><td>Aiguille à pointe émoussée 30 G</td><td>Strategic Applications, Inc</td><td>89134-194</td><td></td></tr><tr><td>Système de surveillance et de contrôle</td><td>SA instruments, Inc</td><td>Modèle 1030</td><td>Il s’agit d’un système compatible MR pour mesurer l’indice de résistance et la température corporelle des petits animaux en même temps.</td></tr><tr><td>Pompe à seringue</td><td>New Era Pump Systems, Inc.</td><td>NE-1600</td><td></td></tr></tbody></table>

contraste dynamique amélioré imagerie par résonance magnétique d&#39;un modèle orthotopique cancer du pancréas de souris

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

L’imagerie par résonance magnétique améliorée par contraste dynamique (DCE-MRI) a été utilisée de manière limitée pour les xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques en raison d’artefacts de mouvements respiratoires sévères dans la région abdominale. Les modèles de tumeurs orthotopiques offrent des avantages par rapport aux modèles sous-cutanés, car ils peuvent refléter le microenvironnement tumoral primaire affectant l’approvisionnement en sang, la néovascularisation et l’invasion des cellules tumorales. Nous avons récemment établi un protocole d’IRM-DCE de xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques dans des modèles murins en sécurisant les tumeurs avec une planche en plastique pliée orthogonalement pour empêcher le transfert de mouvement de la région thoracique pendant l’imagerie. La pression exercée par cette planche a été localisée sur la région abdominale et n’a pas entraîné de difficulté respiratoire chez les animaux. Cet article démontre la procédure détaillée de modélisation orthotopique de la tumeur pancréatique à l’aide de petits animaux et de l’IRM-DCE-des xénogreffes tumorales. La méthode de quantification des paramètres pharmacocinétiques dans l’IRM-DCE est également introduite. La procédure décrite dans cet article aidera les chercheurs à appliquer l’IRM-DCE à des modèles murins de cancer gastro-intestinal orthotopique.

Des cellules tumorales pancréatiques humaines se développer avec succès dans le pancréas de souris créant une tumeur solide. La figure 1 représente des photographies de (A) un des pancréas normal où la solution de cellules tumorales est injecté, et (B) une souris représentant portant une xénogreffe de tumeur du pancréas orthotopique (MIA PACA-2 ). Tumeur est située dans le quadrant supérieur gauche de l&#39;abdomen, à côté de la rate. Il prend habituellement 2-4 semaines pour que les tumeurs de croître ...

L’objectif de ce protocole est d’appliquer l’imagerie par résonance magnétique améliorée par contraste dynamique (DCE-MRI) pour les xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques chez la souris. DCE-MRI est une méthode non invasive pour analyser la microvascularisation dans un tissu cible, et utile pour évaluer la réponse vasculaire dans une tumeur après une nouvelle thérapie.

Contraste dynamique amélioré imagerie par résonance magnétique d&#39;un modèle orthotopique cancer du pancréas de souris

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

L'objectif général de cette procédure est d'appliquer l'imagerie par résonance magnétique avec contraste dynamique, ou D-C-E-M-R-I, à des xénogreffes orthotopiques de tumeur pancréatique chez la souris. Cette approche est réalisée en premier lieu en retirant le pancréas de l'abdomen, puis en infusant lentement des cellules humaines de cancer du pancréas dans la queue du pancréas. Le pancréas est ensuite replacé dans l'abdomen, et lorsque la tumeur atteint un diamètre de cinq à sept millimètres, une plaque en plastique et une bobine de surface sont positionnées au-dessus de la masse tissulaire humas.En fin de compte, le réseau microvasculaire du xénogreffe tumorale peut être visualisé par IRM-D-C-E. Le principal avantage de cette technique par rapport à la méthode classique, telle que l'IRM-D-C, des xénogreffes tumorales sous-cutanées, réside dans le fait que les modèles orthotopiques de tumeur pancréatique permettent l'évaluation du microenvironnement tumoral primaire, incluant l'apport sanguin lié à la néovascularisation et l'invasion des cellules tumorales. La procédure sera démontrée par Sharon Samuel, chercheuse associée, et Marie Warren, technicienne de recherche, toutes deux de notre laboratoire.Commencez par placer une souris de mer femelle anesthésiée âgée de huit semaines sur un tapis chauffant après avoir confirmé le niveau approprié de sédation par une pincée du orteil. Ensuite, rasez les poils du quadrant supérieur gauche de l'abdomen de l'animal et administrez un médicament analgésique dans la peau à l'aide de ciseaux droits pour iris. Pratiquez une incision d'un centimètre dans la peau et le péritoine, puis soulevez délicatement le pancréas à travers l'incision.Ensuite, utilisez une seringue à insuline de 0,5 millilitre, équipée d'une aiguille de calibre 28, pour infuser lentement 2,5 millions de cellules humaines de cancer du pancréas dans 30 microlitres de DMEM dans la queue du pancréas. Vérifiez qu'un petit bleb est formé dans la tête du pancréas par la solution. Replacez ensuite délicatement le pancréas dans l'abdomen et refermez le péritoine et la peau en une seule couche à l'aide de deux points séparés de proline 5-0.Vérifiez la taille de la tumeur quotidiennement par palpation bimanuelle de la zone opératoire. Les tumeurs sont généralement plus denses et irrégulières au toucher que les tissus et organes environnants. Surveillez également quotidiennement les animaux en recherche de signes de maladie.Lorsque la tumeur atteint un diamètre de cinq à sept millimètres, insérez une aiguille fine de calibre 30 dans une extrémité d'un tube micro en polyéthylène et une pointe d'aiguille émoussée de calibre 30 dans l'autre. Reliez une seringue d'un millilitre contenant un agent de contraste IRM fraîchement préparé à la pointe d'aiguille émoussée, puis appuyez lentement sur le piston pour remplir complètement le tube. Ensuite, dilatez les veines de la queue de l'animal sous une lampe chauffante et utilisez une pince de Kelly pour saisir le corps de l'aiguille fine de calibre 30.Insérez soigneusement l'aiguille dans l'une des veines caudales dilatées et fixez à l'aide de ruban adhésif la queue ainsi que le tube sur un morceau de plastique de 10 sur 100 millimètres afin de maintenir la queue droite. Ensuite, placez la souris en position dorsale dans un lit pour animal équipé d'eau chaude circulante afin de réguler la température corporelle de l'animal pendant l'imagerie. Insérez également à ce moment une sonde de température rectale.Lorsque l'animal est en position, appliquez une plaque en plastique courbée orthogonalement sur la région abdominale, en veillant à ce que la tumeur se trouve derrière l'extrémité supérieure de la plaque, puis tirez la plaque vers le bas d'environ deux millimètres afin de bien maintenir la tumeur. Fixez la plaque sur le plateau de l'animal à l'aide de ruban adhésif. Ensuite, fixez un transducteur de capteur de respiration sur la région thoracique afin de surveiller la respiration de l'animal pendant l'imagerie. Placez maintenant la bobine de surface fermement au-dessus de la région tumorale, en la fixant avec du ruban adhésif sur le plateau de l'animal.Ensuite, pousser le lit de l'animal dans le scanner IRM jusqu'à ce que la région tumorale soit au centre de la bobine volumique. Appliquer une IRM pondérée en T2 pour localiser la tumeur, suivie d'une IRM pondérée en T1 avec différents angles de bascule pour la cartographie de T1. Ensuite, pour l'imagerie IRM-D-C-E, appliquer une IRM pondérée en T1 avec un angle de bascule fixe de manière continue avant, pendant et après l'injection du produit de contraste IRM à base de gadolinium.Surveillez en continu la respiration et la température corporelle de l'animal pendant l'imagerie. À la fin de l'imagerie, retirez l'aiguille et les autres sondes, puis placez l'animal sous une lampe chauffante tout en massant doucement la région abdominale inférieure. Continuez jusqu'à ce que l'animal se réveille. La D-C-E-M-R-I peut être appliquée avec succès aux xénogreffes orthotopiques de tumeurs pancréatiques.À l'aide du modèle de région de référence, par exemple, ces cartes de contraste montrent la région tumorale en échelle de couleurs une minute avant l'injection de l'agent de contraste IRM, puis cinq et quarante minutes après, superposées à des images IRM pondérées en T2 en niveaux de gris. La souris utilisée dans cette expérience portait une xénogreffe orthotopique de tumeur pancréatique humaine.Ces courbes d'amélioration du contraste ont été moyennées à partir de la région tumorale et de la région musculaire paravertébrale. Ces cartes kts et KEP pour la tumeur montrent la vitesse d'entrée et de sortie de l'agent de contraste Mr. Les tenter cette procédure TCMI, il est important de s'assurer que la tumeur se trouve derrière l'extrémité supérieure de la planche.

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Médecine

La vidéo explique une méthode chirurgicale par étapes pour l’implantation orthotopique d’un fragment de tumeur d’un donneur cancéreux dans le pancréas d’une souris receveuse non cancéreuse pour le développement d’un cancer du pancréas. Le PDAC implanté orthotopiquement pourrait recapturer le microenvironnement tissulaire des cancers du pancréas humains avec plus de précision que les modèles sous-cutanés conventionnels.

Greffe de tumeur orthotopique par homogreffe : une technique pour générer des modèles murins de tumeurs pancréatiques

Cette vidéo décrit la technique de DCE-MRI pour les xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotropes chez la souris. DCE-MRI est une méthode non invasive pour analyser la microvascularisation dans un tissu cible, et utile pour évaluer la réponse vasculaire dans une tumeur suite à une nouvelle thérapie. Cette méthode aidera les chercheurs à appliquer l’IRM-DCE à des modèles murins de cancer gastro-intestinal orthotopique.

DCE-IRM des xénogreffes de tumeurs pancréatiques orthotopiques : une méthode pour évaluer la microvascularisation dans un tissu tumoral cible

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Dans le contexte clinique, les patients atteints d’un cancer pancréatique localisé subiront une pancréatectomie suivie d’un traitement adjuvant. Ce protocole rapporté ici vise à établir une méthode sûre et efficace de modélisation de ce scénario clinique chez les souris nues, par l’implantation orthotopic du cancer pancréatique suivie de pancreatectomy et de splenectomy distaux.

Un modèle murin de résection orthotopique du cancer du pancréas

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Allogreffes orthotopiques de souris syngéniques pour modéliser le cancer du pancréas

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Découvrez l'imagerie par résonance magnétique à contraste dynamique pour visualiser la microvascularisation des tumeurs pancréatiques orthotopiques chez la souris. Cette méthode permet d'évaluer les réponses vasculaires aux thérapies.

Contraste dynamique amélioré imagerie par résonance magnétique d'un modèle orthotopique cancer du pancréas de souris

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