Sur mesure Microdialyse Probe Conception

L’objectif général de cette procédure est de décrire le fabricant d’une sonde de microdialyse sur mesure. Pour ce faire, il suffit de couper d’abord les tubes en polytétrafluoroéthylène et la silice fondue aux bonnes dimensions. La deuxième étape consiste à insérer la silice fondue dans le tube à l’aide d’une canule comme guide.

Ensuite, une membrane de dialyse est positionnée sur la silice fondue. La dernière étape consiste à tirer le manchon métallique sur la partie restante de la silice fondue et à utiliser de l’époxy pour fermer les joints et assurer une longueur d’échange de deux millimètres. En fin de compte, les instructions de cette vidéo montreront comment construire une sonde de microdialyse sur mesure robuste et fiable comme alternative à une sonde commerciale, qui peut mesurer avec précision la récupération in vitro des neuropeptides et des petites molécules.

Le principal avantage de cette technique est que cet ensemble de sonde de microdialyse présenté en détail peut être adapté à n’importe quelle application et peut être fabriqué pour moins de 10 personnes. Pour commencer, coupez un morceau de tube en polytétrafluoroéthylène de 1,6 millimètre d’épaisseur avec un diamètre intérieur de 350 microns en sections de 2,5 centimètres de long. Coupez une extrémité de la section à un angle de 45 degrés afin de faciliter le raccordement du tube de sortie.

Ensuite, utilisez du papier de verre pour rendre rugueuse la surface extérieure du tube en PTFE afin de favoriser l’adhérence d’une colle époxy. Coupez une section de silice fondue en un morceau de 2,25 centimètres de long. Insérez une aiguille de calibre 30 dans la fibre de PTFE creuse à un centimètre de l’extrémité plate.

Pliez le PTFE et percez la gaine au niveau du coude. Insérez la silice fondue dans le tube en PTFE à l’aide de la canule à aiguille comme guide. Retirez ensuite délicatement la canule à aiguille et positionnez la silice fondue de manière à ce que cinq millimètres dépassent l’extrémité plate du tube en PTFE.

Utilisez une goutte de colle cyanoacrylate pour fixer la silice fondue en place au site de ponction et laissez-la durcir pendant la nuit. Préparez la colle époxy en ajoutant 30 parties de durcisseur jaune à 70 parties de colle époxy noire et en mélangeant doucement. Tirez ensuite une membrane de dialyse en polysulfone de 30 kilodaltons d’un diamètre intérieur de 210 microns et d’un diamètre extérieur de 245 microns.

Soigneusement sur la silice fondue. Tirez la membrane dans le tube en PTFE et ajustez la membrane à 5,5 millimètres à l’aide d’un scalpel bien aiguisé. Marquez un point sur la membrane à l’aide d’un stylo fin pour définir la longueur d’échange de deux millimètres à partir de l’extrémité de la membrane.

Ensuite, à l’aide d’une aiguille fine, appliquez une petite quantité de colle époxy pour recouvrir l’extrémité de la membrane. Ensuite, utilisez de la colle époxy pour fermer le joint entre la membrane de dialyse et la fibre PTFE. Revenez maintenant en arrière et ajoutez suffisamment de colle époxy sur la membrane jusqu’au point de marquage.

Pour assurer une longueur d’échange de diffusion de seulement deux millimètres, laissez la colle époxy durcir pendant la nuit. À l’aide d’une paire de pinces, cassez soigneusement des morceaux d’un centimètre d’une aiguille de calibre 25 afin de créer des manchons métalliques. Ensuite, tirez le manchon métallique sur la partie restante de la silice fondue et utilisez la colle époxy restante pour sceller le joint entre le manchon métallique et le tube en PTFE.

Le manchon métallique permet ensuite de connecter le tube d’entrée à une sonde de microdialyse. Enfin, appliquez de la colle chaude autour de la bifurcation de la sonde pour une fixation et une stabilisation supplémentaires de l’appareil. Ce schéma montre un gros plan du fonctionnement interne de la sonde de microdialyse.

Deux millimètres de la membrane de dialyse en polysulfone sont exposés à l’extrémité de la sonde, ce qui permet de récupérer des métabolites de faible poids moléculaire tels que le glucose, le TP et l’acétylcholine. La capacité de la sonde à récupérer de petites molécules de faible poids moléculaire telles que le glucose, le lactate, l’acétylcholine et un TP in vitro est démontrée ici. Le pourcentage de récupération est beaucoup plus élevé avec ces molécules, qui sont d’environ 500 Daltons que des molécules plus grosses telles que l’angiotensine deux, la substance p et la somatostatine, qui sont supérieures à 1000 Daltons.

Après avoir regardé cette vidéo, vous devriez avoir une bonne compréhension de la façon de construire des sondes de microdialyse robustes et fiables comme alternative aux sondes commerciales.