Réalisation de la chromatographie sur couche mince 1D

1. Plaques TLC

1. Les adsorbants courants pour la CCM sont le gel de silice, l’alumine et la cellulose. Les plaques TLC sont disponibles dans le commerce avec une variété de propriétés. Choisissez une plaque TLC et coupez-la à une taille appropriée (environ 5 cm x 5 cm sont suffisants pour la plupart des applications). Pour les plaques TLC à dos de verre, marquez le verre à l’aide d’une règle et d’un coupe-verre, puis brisez-le soigneusement le long de la ligne.

2. Repérage

1. Dissoudre l’échantillon dans un solvant approprié pour obtenir une solution à environ 1 %. Si possible, le solvant doit être apolaire. Les fractions de chromatographie sur colonne et d’autres solutions diluées peuvent être utilisées sans dilution si le soluté est présent à une concentration comprise entre 0,2 % et 2,0 %.
2. Marquez la ligne de base avec un crayon à environ 1,0 cm du bas de la plaque. Positionnez les taches à au moins 1,0 cm du bord de la plaque et étiquetez-les de manière appropriée.
3. Les taches peuvent être appliquées à l’aide d’un capillaire en verre. Pour repérer la plaque TLC, trempez le capillaire dans la solution pour aspirer une petite quantité de liquide. Touchez doucement l’embout à l’endroit souhaité sur la plaque TLC et retirez-le immédiatement.
4. Vous pouvez également appliquer des taches à l’aide d’une seringue d’un microlitre en délivrant environ 1 μL de solution pour chaque application.
5. Des taches peuvent être appliquées successivement à chaque endroit, en prenant soin de ne pas perturber la surface de l’adsorbant avec le détachant. Laissez le solvant sécher entre les applications.

3. Choisir un solvant en développement

1. Il est préférable d’utiliser le moins de solvant polaire possible pour une bonne séparation. Les solvants courants pour la CCM comprennent l’hexane, l’acétate d’éthyle, le dichlorométhane et le méthanol (Tableau 1).
2. Un moyen pratique de trouver une phase mobile appropriée est de repérer la plaque CCM avec un échantillon. Appliquez suffisamment de solvant directement sur l’endroit pour former un cercle de solvant de 1 à 2 cm de diamètre. Marquez la circonférence du cercle. Lors de la visualisation, un solvant approprié montrera des anneaux bien séparés, l’anneau le plus externe étant à environ 50 % de la distance entre le centre et le front du solvant.
3. Il peut être nécessaire d’ajuster la polarité de la phase mobile en choisissant deux solvants miscibles et en les testant dans des proportions variables. Des exemples de mélanges courants sont les hexanes avec l’acétate d’éthyle et le dichlorométhane avec le méthanol.

4. Développement

1. Placez la plaque TLC tachetée dans une chambre de développement contenant le solvant de développement approprié. La ligne de solvant doit être inférieure à la ligne de base indiquée sur la plaque de CCM.
2. La chambre de développement peut être un bocal avec un couvercle, ou un bécher recouvert de papier d’aluminium ou d’un film plastique. Utilisez le plus petit récipient disponible qui peut accueillir la plaque TLC.
3. Ne laissez pas le solvant atteindre le bord supérieur de la plaque. Lorsque la face du solvant (la limite où se termine la partie humide de l’adsorbant) se trouve à 5 à 10 mm du haut de la plaque, retirez la plaque CCM de la chambre de développement et marquez la face du solvant avec un crayon avant que le solvant ne sèche.

5. Visualisation

1. Les taches colorées peuvent être visualisées immédiatement et marquées au crayon. Souvent, les taches ne sont pas visibles et doivent donc être visualisées par une autre méthode.
2. Souvent, l’adsorbant TLC contient un indicateur fluorescent. Les taches peuvent être visualisées à l’aide d’une lampe ultraviolette (UV) portative. Les composés qui éteignent la fluorescence apparaîtront sous forme de taches sombres lorsque la plaque est irradiée par une lumière UV à ondes courtes (254 nm). Les composés fluorescents produisent des points lumineux lorsqu’ils sont irradiés avec une lumière UV d’une longueur d’onde appropriée. Marquez le centre de chaque endroit avec un crayon.
3. Les taches peuvent également être visualisées en appliquant un réactif de visualisation ou une coloration sur la plaque de CCM. Le réactif de visualisation peut être appliqué en trempant la plaque dans le réactif, ou en essuyant la plaque avec une boule de coton saturée d’un réactif non corrosif.
4. Une solution à 20 % d’acide phosphomolybdique dans de l’éthanol est utile pour la visualisation de la plupart des composés organiques. Les taches apparaissent lors du chauffage de la plaque avec un pistolet thermique ou dans un four.
5. D’autres réactifs peuvent être utilisés pour la visualisation de classes spécifiques de composés. Par exemple, le réactif ninhydrine est utilisé pour la visualisation des acides aminés et la 2,4-dinitrophénylhydrazine pour les aldéhydes et les cétones.

6. Analyse

1. Le facteur de retard (R_f) est le rapport entre la distance parcourue par un composé sur une plaque de CCM et la distance parcourue par le solvant. Cela peut être déterminé en mesurant la distance entre la ligne de base et le centre du spot et en divisant la valeur par la distance entre la ligne de base et le front du solvant.
   
2. Le R_f d’un composé est caractéristique de ses propriétés physiques et dépend de facteurs tels que la température, la taille de l’échantillon, l’épaisseur et l’activité de l’adsorbant, la température et la taille de l’échantillon.
3. Pour confirmer qu’un inconnu est identique à un composé connu, un étalon doit être repéré sur la même plaque de CCM. Les substances identiques auront la même caractéristique R_f.