Immunoprécipitation d'un complexe de protéines (co-IP) avec ou sans marqueur (tag)

La co-immunoprécipitation (CoIP) et les tests pull-down sont des méthodes étroitement liées pour identifier les interactions protéine-protéine stables. Ces méthodes sont liées à l’immunoprécipitation, une méthode permettant de séparer une protéine cible liée à un anticorps des protéines non liées. Dans la CoIP, une protéine liée à l’anticorps est elle-même liée à une autre protéine qui ne se lie pas à l’anticorps, ceci est suivi d’un processus de séparation qui préserve le complexe protéine-protéine. La différence avec les tests pull-down est que les protéines d’appât marquées par affinité remplacent les anticorps, et la chromatographie d’affinité est utilisée pour isoler les complexes protéine-protéine.

Cette vidéo explique la CoIP, les tests pull-down et leur mise en œuvre en laboratoire. Un protocole étape par étape pour chaque technique est couvert, y compris les réactifs, les appareils et les instruments utilisés pour purifier et analyser les protéines liées. De plus, la section applications de cette vidéo décrit une procédure pour étudier comment les protéines myxovirales inhibent la nucléoprotéine de la grippe, une étude du rôle des ions calcium dans la calmoduline via un test pull-down et un test pull-down modifié pour caractériser les interactions protéiques transitoires.