Biochimie

Dialyse est une technique courante utilisée en biochimie pour séparer des molécules basées sur la diffusion. Dans cette procédure, une membrane semiperméable permet le mouvement de certaines molécules selon la taille. Cette méthode peut être appliquée à l’enlèvement de tampon, appelée dessalage, ou échange tampon molécules ou d’ions d’une solution protéique. Cette vidéo couvre les principes de la dialyse ainsi qu’une procédure générale. plusieurs demandes de dialyse sont examinées, y compris la...

Cinétique enzymatique décrit les effets catalytiques des enzymes, qui sont des biomolécules qui facilitent les réactions chimiques nécessaires aux organismes vivants. Enzymes agissent sur les molécules, appelées substrats, pour former des produits. Les paramètres cinétiques enzymatiques sont déterminés par l’intermédiaire de tests qui mesurent directement ou indirectement les changements dans la concentration de substrat ou de produit au fil du temps. Cette vidéo couvre les principes de base...

Désorption-ionisation laser assistée par matrice (MALDI) est une source d’ions de spectrométrie de masse idéale pour l’analyse de biomolécules. Au lieu de rayonnements ionisants composés à l’état gazeux, les échantillons sont noyées dans une matrice, qui est frappée par un laser. La matrice absorbe la majorité de l’énergie ; une partie de cette énergie est ensuite transférée à l’échantillon qui s’ionise en conséquence. Les ions échantillon peuvent ensuite être identifiées à l’aide d’un...

En spectrométrie de masse en tandem une biomolécule d’intérêt est isolée d’un échantillon biologique et puis fragmentée en plusieurs sous-unités afin d’aider à expliquer sa composition et la séquence. Ceci est accompli en ayant des spectromètres de masse en série. Le premier spectromètre s’ionise un échantillon et filtre des ions de masse spécifique pour charger le rapport. Ions filtrées sont ensuite fragmentées et passées à un spectromètre de masse deuxième où les fragments sont analysées.

La cristallisation de protéines, obtention d’un solid réseau de biomolécules, élucide la structure des protéines et permet l’étude de la fonction des protéines. Cristallisation implique une protéine purifiée sous une combinaison de nombreux facteurs, y compris le pH, la température, force ionique et la concentration de protéines de séchage. Une fois que les cristaux est obtenus, la structure de la protéine peut être élucidée par diffraction des rayons x et le calcul d’un modèle de densité...

En biochimie, méthodes de purification axée sur la chromatographie sont utilisés pour isoler les composés d’un mélange complexe. Deux de ces méthodes utilisées couramment par les biochimistes est la chromatographie d’exclusion stérique et chromatographie d’affinité. En chromatographie d’exclusion stérique, une colonne regorge de perles poreuses sépare les composants d’un mélange selon la taille. En revanche, la chromatographie d’affinité permet une séparation plus spécifique des biomolécules en...

Électrophorèse bidimensionnelle (2DGE) est une technique qui peut résoudre des milliers de molécules d’un mélange. Cette technique implique deux méthodes distinctes de séparation qui ont été accouplés : isoélectrofocalisation (IEF) et sodium dodécyl sulfate sur gel de polyacrylamide (SDS-PAGE). Ceci sépare physiquement composés à travers deux axes d’un gel de leurs points isoélectriques (une propriété électrochimique) et leurs poids moléculaires. La procédure dans cette vidéo couvre les...

Marquage métabolique est utilisé pour sonder les transformations biochimiques et les modifications qui se produisent dans une cellule. Ceci est accompli en utilisant les analogues chimiques qui imitent la structure des biomolécules naturel. Les cellules utilisent analogues dans leurs processus biochimiques endogènes, production de composés qui sont étiquetés. L’étiquette permet l’incorporation de détection et de balises d’affinité, qui peuvent alors servir à élucider les voies métaboliques à...

L’analyse de décalage de mobilité électrophorétique (EMSA) est une procédure biochimique utilisée pour élucider la liaison entre les protéines et les acides nucléiques. Dans cet essai un radiomarquées acides nucléiques et des protéines de test sont mélangés. Liaison est déterminée au moyen de l’électrophorèse sur gel qui sépare les composants basés sur la masse, charge et conformation. Cette vidéo montre les notions d’EMSA et une procédure générale, y compris la détection, la liaison,...

Mesure de la concentration est une étape fondamentale de nombreuses épreuves biochimiques. Détermination photométrique protéine tire parti du fait que plus un échantillon contient des substances absorbant la lumière, moins la lumière transmettra à travers elle. La relation entre la concentration et l’absorption étant linéaire, ce phénomène peut être utilisé pour mesurer la concentration dans les échantillons où on ne sait pas. Cette vidéo décrit les rudiments de la détermination des protéines...

Ultracentrifugation gradient de densité est une technique courante utilisée pour isoler et purifier les structures biomolécules et cellule. Cette technique exploite le fait que, en suspension, les particules qui sont plus denses que le solvant seront sédiments, tandis que ceux qui sont moins denses flottera. Une ultracentrifugeuse haute vitesse est utilisée pour accélérer ce processus afin de séparer les biomolécules dans un gradient de densité, qui peut être établi par des liquides de...

Co-immunoprécipitation (Pico) et menu déroulant dosages sont étroitement apparentées de méthodes pour identifier les interactions protéine-protéine stable. Ces méthodes sont liées à l’immunoprécipitation, une méthode pour séparer une protéine cible liée à un anticorps des protéines non liés. Pico, une protéine de liaison anticorps est liée à une autre protéine qui ne se lie pas avec l’anticorps, il est suivi par un processus de séparation qui préserve les protéines complexes. La différence dans...

Reconstitution est le processus du retour une biomolécule isolé à sa forme ou sa fonction originale. Ceci est particulièrement utile pour l’étude des protéines membranaires qui permettent les fonctions cellulaires importantes et influent sur le comportement des lipides à proximité. Pour étudier la fonction des protéines de la membrane purifiée sur place, ils doivent être reconstitués en les intégrant dans une membrane lipidique artificielle. Cette vidéo présente les concepts de reconstitution...

Transfert d’énergie Förster (FRET) est un phénomène utilisé pour étudier les interactions biochimiques de courte portée. Dans la frette, une molécule de photoluminescent donneur peut transférer non-radiativement énergie à une molécule d’accepteur si leurs spectres d’émission et d’absorption respectifs se chevauchent. La quantité d’énergie transférée — et par conséquent l’ensemble des émissions d’échantillon — dépend de la proximité d’une paire de donneur-accepteur de molécules...

Résonance de plasmons de surface (SPR) est le phénomène optique sous-jacente derrière exempte d’étiquette de biocapteurs pour évaluer l’affinité moléculaire, la cinétique, la spécificité et la concentration des biomolécules. À la SPR, interactions biomoléculaires se produisent sur un biocapteur fait d’une fine couche de métal sur un prisme. Les interactions en temps réel des biomolécules peuvent être surveillées en mesurant les changements de la lumière réfléchie par le dessous de la Metal