Name: Préparation tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour Ex Vivo des expériences d’imagerie (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-05-09T12:30:00.000+00:00
Duration: 11 min 1 s
Description: Découvrez la préparation de tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour l'imagerie ex vivo. Cette méthode permet d'étudier les rôles physiologiques et métaboliques des ions calcium dans les cellules rétiniennes en temps réel.

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Nous remercions Ralph Nelson et Daniel Possin d’orientation réfléchie tout en développant ce protocole, Eva Ma, Ashley George et Gail Stanton pour génération de lignes zebrafish transgénique stable. Le travaux ont été subventionnés par NSF GRFP 2013158531 de M.G., NIH NEI 5T32EY007031 aux W.C. et M.G. et EY026020 à J.H. et S.B.

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<li>Stearns, G., Evangelista, M., Fadool, J., Brockerhoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Mutation+in+the+Cone-Specific+pde6+Gene+Causes+Rapid+Cone+Photoreceptor+Degeneration+in+Zebrafish%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A Mutation in the Cone-Specific pde6 Gene Causes Rapid Cone Photoreceptor Degeneration in Zebrafish.</a> J. Neurosci. 27 (50), 13866-13874 (2007).</li>
<li>Gross, J., Perkins, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+mutants+as+models+for+congenital+ocular+disorders+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">Zebrafish mutants as models for congenital ocular disorders in humans.</a> Mol. Reprod. Dev. 75 (3), 547-555 (2007).</li>
<li>Lewis, A., Williams, P., Lawrence, O., Wong, R., Brockerhoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Wild-Type+Cone+Photoreceptors+Persist+Despite+Neighboring+Mutant+Cone+Degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Wild-Type Cone Photoreceptors Persist Despite Neighboring Mutant Cone Degeneration.</a> J. Neurosci. 30 (1), 382-389 (2010).</li>
<li>Wang, T. -M., Holzhausen, L., Kramer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+an+optogenetic+pH+sensor+reveals+that+protons+mediate+lateral+inhibition+in+the+retina%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Imaging an optogenetic pH sensor reveals that protons mediate lateral inhibition in the retina.</a> Nat. Neurosci. 17 (2), 262-268 (2014).</li>
<li>Van Hook, M., Thoreson, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simultaneous+Whole-cell+Recordings+from+Photoreceptors+and+Second-order+Neurons+in+an+Amphibian+Retinal+Slice+Preparation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Simultaneous Whole-cell Recordings from Photoreceptors and Second-order Neurons in an Amphibian Retinal Slice Preparation.</a> J. Vis. Exp. (76), e50007(2013).</li>
<li>Connaughton, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Zebrafish+retinal+slice+preparation%5BTitle%5D)+AND+%22Meth.+Cell+Sci%22%5BJournal%5D)">Zebrafish retinal slice preparation.</a> Meth. Cell Sci. 25 (1/2), 49-58 (2003).</li>
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 <a target="_blank" href="http://hdl.handle.net/1773/33102">http://hdl.handle.net/1773/33102</a> (2015).</li>
<li>Shin, J., Chen, J., Solnica-Krezel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+homologous+recombination-mediated+genome+engineering+in+zebrafish+using+TALE+nucleases%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Efficient homologous recombination-mediated genome engineering in zebrafish using TALE nucleases.</a> Development. 141 (19), 3807-3818 (2014).</li>
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<li>Kanow, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+adaptations+of+the+retina+and+retinal+pigment+epithelium+support+a+metabolic+ecosystem+in+the+vertebrate+eye%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Biochemical adaptations of the retina and retinal pigment epithelium support a metabolic ecosystem in the vertebrate eye.</a> eLife. 6, (2017).</li>
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<li>Uckermann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+staining+by+vital+dyes+of+M%C3%BCller+glial+cells+in+retinal+wholemounts%5BTitle%5D)+AND+%22Glia%22%5BJournal%5D)">Selective staining by vital dyes of Müller glial cells in retinal wholemounts.</a> Glia. 45 (1), 59-66 (2003).</li>
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</ol>

Les auteurs déclarent qu’ils n’ont aucun intérêt financier concurrentes.

Ex vivo imagerie rétinienne tranches de poisson zèbre fraîche s’est avéré pour être un outil polyvalent pour l’étude des photorécepteurs biologie20,21,22et est unique parce qu’il permet l’analyse des cellules individuelles dans un âge mûr, entièrement rétine différenciée. Avec la pratique, il est possible de réaliser des expériences multiples avec des tissus provenant d’un seul poisson, même en utilisant des tranches de...

Le poisson zèbre (Danio rerio) a devenu employé couramment dans la recherche scientifique médicale et base1, en raison de sa petite taille, de développement rapide et de systèmes d’organes vertébrés. La transparence naturelle des larves de poisson zèbre combinée à des méthodes établies pour la transgénèse ont permis une visualisation détaillée des processus cellulaires dans un animal vivant. Un certain nombre de biocapteurs fluorescents génétiquement codées ont été la cible de cellules spécifiques zebrafish pour détecter Ca2 + 2, peroxyde d’hydrogène3, apoptotic activation4 et ATP5.
L’imagerie in vivo des larves de poisson zèbre a donné lieu à des percées dans le domaine des neurosciences, y compris la cartographie du cerveau circuits6 et7de troubles de développement de médicaments pour le système nerveux central. Poisson zèbre conviennent bien pour la recherche de vision parce que leurs rétines présentent la structure laminaire et types de neurones des vertébrés supérieurs, et ils affichent des comportements visuels robuste8,9. Plusieurs types de dégénérescences rétiniennes analogues à la maladie humaine ont été modélisés avec succès et étudiées chez le poisson zèbre10,11, y compris l’imagerie direct des photorécepteurs individuels dégénérer dans une rétine2, 12.
En vivo imagerie de larves de poisson zèbre est un outil précieux, il devient plus difficile que les poissons grandissent et développent de pigmentation, et certains traitements pharmacologiques ne peuvent pénétrer un animal entier. En outre, certains procédés cellulaires changent avec l’âge et le développement faisant plus tard points dans le temps critique pour la fonction de la compréhension et la progression de la maladie chez les animaux adultes. Méthodes biochimiques tels qu’immunoblot, quantitative PCR, O2 consommation et métabolomique analyses peuvent fournir des indices importants sur la biologie de la rétine dans son ensemble, mais il est difficile de discerner les contributions individuelles de types de cellules touchées par maladie. Imagerie des tissus rétiniens isolés ex vivo permet de contourner ces problèmes et tandis qu’imaging plate montés rétines offre une vue sur la rétine externe13, plus profonds intérieurs caractéristiques rétiniennes sont obscurcies. Tranches de rétinal transversal, telles que celles présentées dans fixe des analyses immunohistochimiques, permettent une vision claire de tous les calques et les types de cellules mais seulement offrent un aperçu unique des processus dynamiques impliqués dans la maladie et de la fonction normale.
Nous présentons ici une méthode pour générer des ex vivo transversal rétinienne tranches de poisson-zèbre adulte pour l’imagerie. Il est similaire aux méthodes employées pour préparer des amphibiens et des poissons zèbres tranches rétiniennes pour14,des études électrophysiologiques et morphologiques15, avec des modifications importantes pour le laps de temps d’imagerie ex vivo utilisant confocal microscopie. Réponses de la fluorescence des biocapteurs ou colorants en tranches sont surveillés en temps réel avec un microscope confocal tout en livrant des agents pharmacologiques à l’aide de perfusion. Alors que la méthode a été développée pour l’imagerie des photorécepteurs, il peut être possible de l’utiliser pour visualiser les cellules Müller, cellules bipolaires, les cellules horizontales, les cellules amacrines ou cellules ganglionnaires rétiniennes avec des marqueurs fluorescents appropriés. En outre, tranches peuvent être chargés avec des colorants fluorescents perméable à la cellule de la viabilité cellulaire rapport, transport vésiculaire, la fonction mitochondriale ou état redox. Cette préparation polyvalente permet la visualisation d’un large éventail de processus subcellulaires tout au long de la rétine, y compris Ca2 + dynamique, transduction du signal et état métabolique.

<table><tbody><tr><td>poisson-zèbre</td><td>Université de Washington South Lake Union Aquatics Facility</td><td></td><td>stocks maintenus en interne sous forme de lignées transgéniques stables</td></tr><tr>de<td>vaseline</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-090-843</td><td>pour seringue</td></tr> à <tr><td>vaseline Seringue à embout coulissant de 3 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-823-436</td><td>pour seringue à vaseline</td></tr><tr><td>20g Aiguille à embout coulissant de 3,8 cm</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-826-5B</td><td>pour seringue de vaseline</td></tr><tr><td>unie 7 cm X 2,5 cm lame de microscope</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-550-A3</td><td>pour dissection d’œilleton, chambre de tranchage</td></tr><tr><td>Vernis à ongles transparent Seche Vite</td><td>Amazon</td><td>B00150LT40</td><td>pour chambre de tranchage</td></tr><tr><td>18 mm X 18 mm #1 lamelles en verre</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-542A</td><td>pour échelles d’imagerie</td></tr><tr><td>cire dentaire non aromatisée</td><td>Amazon</td><td>B01K8WNL5A</td><td>pour échelles d’imagerie lames</td></tr><tr><td>de rasoir à double tranchant</td><td>Stoelting</td><td>51427</td><td>pour trancher les tissus</td></tr><tr><td>Trancheuse de tissus avec micromètre numérique</td><td>Stoelting</td><td>51415</td><td>pour trancher les tissus</td></tr><tr><td>papier filtre - cellulose mixte maillée blanche, 13 mm de diamètre, 0,45 & micro ; Papier</td> filtre <td>HAWG01300 EMD Millipore</td><td></td> pour <td>le montage des rétines</td></tr><tr><td>Boîte de Pétri 10 cm Boîte de Pétri</td><td>Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td>pour l’euthanasie, la dissection, l’imagerie des poissons Ensemble d’échelle</td></tr><tr><td>15 cm Applicateur en bois à bout uni</td><td>Fisher Scientific</td><td>23-400-112</td><td>pour fil Outil à boucle oculaire</td></tr><tr><td>30g (0,25 mm de diamètre) Fil de tungstène</td><td>Fisher Scientific</td><td>AA10408G6</td><td>pour outil à boucle oculaire en fil</td></tr><tr><td>D-glucose Sigma</td><td>Aldrich</td><td>G8270</td><td>composant de la solution mère de</td></tr><tr><td>supplément L-lactate de sodium</td><td>Sigma Aldrich L7022</td><td></td><td>composant de la solution mère de</td></tr><tr><td>supplément pyruvate de sodium</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2256</td><td>composant de la solution mère de supplément</td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G3126</td><td>composant de la solution mère de supplément</td></tr><tr><td>&nbsp ; L-glutathion réduit</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G4251</td><td>Composant de la solution mère de supplément</td></tr><tr><td>Acide L-ascorbique</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A5960</td><td>Composant de la solution mère de</td></tr><tr><td>supplément NaCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S7653</td><td>Composant de la solution de Ringer</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9333</td><td>Composant de la solution</td></tr> <tr><td>de RingerCaCl2 &middot ; 2H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C3881</td><td>composant de la solution de Ringer</td></tr><tr><td>NaH2PO4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>Composant S8282</td><td>de la solution de Ringer</td></tr><tr><td>MgCl2 &middot ; 6H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M0250</td><td>composant de la solution de Ringer</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td>Composant de la solution</td></tr><tr><td>de Ringer Base Tris</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP152</td><td>Composant de Na+-free Solution de Ringer</td></tr><tr><td>6 N HCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-003-063</td><td>Composant de Na+-free Solution de Ringer</td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5655</td><td>composant de Na+-free Ringer’s solution</td></tr><tr><td>50 mL tube à centrifuger conique</td><td>Denville Scientific</td><td>C1062-P</td><td>récipient pour solution Ringer</td></tr><tr><td>Ciseaux Vannas - 8 cm, lames coudées de 5 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>501790</td><td>micro-ciseaux pour la dissection de l’œilleton</td></tr><tr><td>Pince à épiler suisse - #5, 11 cm, droite, pointes de 0,06 x 0,07 mm</td><td>World Precision Instruments</td><td>504510</td><td>pince fine pour la dissection de l’œilleton et la manipulation des tranches</td></tr> lames <tr><td>de rasoir à un seul tranchant</td><td>Fisher Scientific</td><td>12-640</td><td>pour la dissection et le rognage de l’œilleton papier filtre</td></tr><tr><td>EMD Pince à filtre Millipore</td><td>Fisher Scientific</td><td>XX6200006P</td><td>pince plate pour la manipulation du papier filtre humide</td></tr><tr><td>C12 558/568 BODIPY</td><td>Fisher Scientific</td><td>D3835</td><td>colore les noyaux des cellules vivantes ; Incuber 5 & Micro ; g/mL pendant 15 min à température ambiante :</td></tr><tr><td>iodure de propidium (PI)</td><td>Fisher Scientific</td><td>P3566</td><td>colore les noyaux de cellules mortes ; incuber 5 & micro ; g/mL pendant 20 min à température ambiante</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Fisher Scientific</td><td>62249</td><td>colore les noyaux de cellules vivantes ; incuber 5 & micro ; g/mL pendant 20 min à température ambiante</td></tr><tr><td>Tétraméthylrhodamine, ester méthylique (TMRM)</td><td>Le Fisher Scientific</td><td>T668</td><td>colore les mitochondries fonctionnelles chargées négativement ; incuber 1 nM pendant 30 min à température ambiante</td></tr><tr>Chambre de<td>perfusion tissulaire</td><td>Cell MicroControls</td><td>BT-1-18/BT-1-18BV [-SY]</td><td>chambre d’imagerie pour injection ou perfusion</td></tr><tr><td>2-(N-(7-Nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol-4-yl)Amino)-2-Deoxyglucose (NBDG)</td><td>Fisher Scientific</td><td>N13195</td> analogue fluorescent du <td>glucose administré par voie orale au poisson-zèbre 30 min avant l’euthanasie</td></tr><tr><td>Microscope confocal à balayage laser Olympus</td> Microscope confocal <td>Olympus</td><td>FV1000</td><td>pour visualiser la fluorescence des coupes à une résolution unicellulaire</td></tr><tr><td>Cyanure de carbonyle 3-chlorophénylhydrazone (CCCP)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C2759</td><td>réactif expérimental qui ablate la respiration mitochondriale ; traiter les tranches à une concentration finale de 1 & micro ; Positionneur</td></tr><tr><td>d’aspirateur miniature</td> M <td>Cell MicroControls</td><td>FL-1</td> pour <td></td></tr><tr><td>collecteur de perfusion, collecteur de perfusion, collecteur de barboteur de gaz, soupape de débit, porte-seringue 60cc</td><td>Warner Instruments</td><td>divers</td><td>pour la perfusion</td></tr></tbody></table>

préparation tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour ex vivo des expériences d’imagerie

Preparing Fresh Retinal Slices from Adult Zebrafish for Ex Vivo Imaging Experiments

La rétine est un tissu complex qui initie et intègre les prémices de la vision. La dysfonction des cellules de la rétine est une caractéristique de nombreuses maladies aveuglantes et thérapies futures dépendent de compréhensions fondamentale sur la rétine comment différente cellules de fonctionnent normalement. Obtenir ces informations avec des méthodes biochimiques s’est avérée difficile parce que les contributions des types de cellules particulières sont diminuées dans le milieu des cellules rétiniennes. Imagerie rétinienne direct peut fournir une vue de nombreux processus biologiques niveau subcellulaire, grâce à un nombre croissant de biocapteurs fluorescents génétiquement encodés. Cependant, cette technique a été jusqu'à présent limitée à des têtards et des larves de poisson zèbre, les couches rétiniennes ultrapériphériques des rétines isolés ou imagerie de résolution plus faible des rétines animaux vivants. Nous présentons ici une méthode pour générer des vivants ex vivo rétinienne tranches de poisson-zèbre adulte pour l’imagerie live par microscopie confocale. Cette préparation donne des tranches transversales avec toutes les couches rétiniennes et la plupart des types de cellules visibles permettant d’effectuer des expériences d’imagerie confocale utilisant une perfusion. Poisson zèbre transgéniques exprimant des protéines fluorescentes ou biocapteurs dans les types de cellules rétiniennes spécifiques ou organites sont utilisés pour extraire les informations de la cellule unique d’une rétine intacte. En outre, tranches rétiniens peuvent être chargés avec indicateur fluorescent colorants, ajoutant à la polyvalence de la méthode. Ce protocole a été développé pour l’imagerie Ca2 + au sein de poisson-zèbre cônes photorécepteurs, mais avec des marqueurs de bon, il pourrait être adapté pour mesurer Ca2 + ou métabolites dans Müller cellules, cellules bipolaires et horizontales, cellules microgliales, cellules amacrines ou la rétine cellules ganglionnaires. L’épithélium pigmentaire rétinien est retiré des tranches si cette méthode ne consiste pas pour l’étude de ce type de cellule. Avec la pratique, il est possible de générer des tranches de série d’un animal pour des expériences multiples. Cette technique adaptable fournit un outil puissant pour répondre à nombreuses questions sur la biologie des cellules rétiniennes, Ca2 +et l’homéostasie énergétique.

Un positionnement stable et l’orientation transversale de tranches sont essentiels à l’imagerie réussie avec injection ou perfusion d’agents pharmacologiques. Examiner soigneusement et repositionner les tranches avant l’imagerie confocale selon les besoins pour s’assurer que toutes les couches rétiniennes sont visibles (Figure 2 a, tranche ii). Si une tranche est tournée légèrement vers l’avant (Figure 2 a, tranche iii), faisceau...

Imagerie tissu rétinien peut fournir des informations de cellule unique qui ne peut pas être recueillies de méthodes biochimiques traditionnelles. Ce protocole décrit la préparation de rétiniens tranches de poisson zèbre pour l’imagerie confocale. Fluorescentes codé génétiquement des capteurs ou indicateur colorants permettent la visualisation de nombreux processus biologiques en types distincts de cellules rétiniennes.

Préparation tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour Ex Vivo des expériences d’imagerie

The retina is a complex tissue that initiates and integrates the first steps of vision. Dysfunction of retinal cells is a hallmark of many blinding ...

L’objectif global de cette procédure est de préparer des tranches fraîches de rétines de poisson-zèbre pour des expériences nécessitant l’imagerie en direct de protéines fluorescentes ou de biocapteurs. Cette méthode peut aider à répondre à des questions clés dans le domaine de la recherche sur la vision, telles que les rôles physiologiques et métaboliques des ions calcium dans des types de cellules et des compartiments cellulaires spécifiques au sein d’une rétine. Le principal avantage de cette technique est qu’elle fournit des informations spatiales et temporelles sur les métabolites clés et les molécules de signalisation dans les tissus vivants.Pour permettre d’éliminer l’épithélium pigmentaire rétinien, ou EPR, du poisson zèbre, adaptez le poisson pendant une heure avant de faire des coupes de tissu. Pour une chambre de tranchage, peignez des lignes de vernis à ongles sur une lame. À l’aide de vernis à ongles transparent, peignez des lignes étroites pour créer un rectangle.Repeignez le vernis une fois qu’il est sec. Si la chambre doit être utilisée pour l’imagerie statique ou des expériences d’injection avec un débit de solution minimal, utilisez une seringue pour appliquer deu

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Cet article décrit une approche pour le poisson-zèbre microdissect rétines avec et sans l'épithélium pigmentaire rétinien attachés, de un à trois embryons jours post-fécondation.

Microdissection de tissus embryonnaires Zebrafish Eye

Dans cette vidéo, des techniques pour multicolor confocale imagerie time-lapse et l'ablation des cellules ciblées sont fournis. Time-lapse d'imagerie est utilisée pour surveiller le comportement de plusieurs types cellulaires...

Multicolor imagerie time-lapse de poisson zèbre transgénique: Visualisation des cellules souches rétiniennes Activé par ablation cellulaire ciblée neuronale

La vidéo montre une méthode de culture de cellules ganglionnaires rétiniennes primaires à partir d’embryons de poisson-zèbre. Les embryons à un stade précoce subissent une dissection pour isoler les yeux, qui sont ensuite dissociés mécaniquement en une suspension de cellules ganglionnaires rétiniennes. Cette suspension cellulaire est cultivée sur des lamelles recouvertes de protéines adhésives pour faciliter le développement des axones.

Génération de cultures de cellules ganglionnaires rétiniennes primaires à partir d’embryons de poisson-zèbre

Imagerie du développement vasculaire cérébral chez le poisson zèbre larvaire est décrite. Techniques pour faciliter l'imagerie 3D et modifier le développement vasculaire cérébral en utilisant des traitements chimiques sont également fournis.

Imagerie et de reconstruction 3D de structures vasculaires cérébraux embryonnaires poisson zèbre

Nous introduisons une méthode efficace pour rétrograder le marquage des cellules ganglionnaires rétiniennes (CGR) chez le poisson-zèbre adulte.

Marquage rétrograde des cellules ganglionnaires de la rétine à l&#39;âge adulte de poisson zèbre avec des colorants fluorescents

Protocoles de légers dégâts multiples ont été décrits pour les photorécepteurs des dommages et par conséquent induire une réponse de régénération rétinienne chez le poisson zèbre adulte. Ce protocole décrit une méthode améliorée qui peut être utilisé chez les animaux pigmentés et qui endommage la grande majorité de la tige et des cônes photorécepteurs dans la rétine entière.

A Novel lumière paradigme de dommages pour utilisation dans les études de régénération rétinienne chez le poisson zèbre adulte

la régénération rétinienne Zebrafish a surtout été étudiée en utilisant des rétines fixes. Cependant, les processus dynamiques tels que la migration nucléaire interkinetic se produisent au cours de la réponse régénérative et nécessitent imagerie des cellules vivantes pour étudier les mécanismes sous-jacents. Ici, nous décrivons la culture et d'imagerie conditions pour surveiller Interkinetic Migration nucléaire (INM) en temps réel en utilisant la microscopie multiphoton.

Culture des adultes Zebrafish Retinal explants Transgenic pour des cellules vivantes par imagerie multiphotonique Microscopie

Ce protocole décrit les étapes nécessaires pour obtenir des résultats localisation subcellulaire de protéine sur la rétine de poisson-zèbre en corrélant la microscopie photonique Super-résolution et images de microscopie électronique à balayage.

Super-résolution corrélative et microscopie électronique pour résoudre la localisation des protéines dans la rétine de poisson-zèbre

Ici, nous discutons d’une méthode de protocole qui permettra une analyse simple du système vasculaire rétinienne tg(fli:EGFP) adult poisson zèbre comme une lecture rapide en paramètres de pathologies vasculaires à long terme, liées à la néoangiogenèse et changements structurels.

Étudier le diabète à travers les yeux d’un poisson : Microdissection, la visualisation et l’analyse de le tg(fli:EGFP) adulte vascularisation rétinienne de poisson-zèbre

Ce protocole décrit l’utilisation d’un peroxyde d’hydrogène génétiquement codé (H2O2)-biocapteur dans les neurones et les larves de poisson zèbre cultivés pour évaluer les rôles physiologiques de signalisation deH2O2pendant le développement du système nerveux. Il peut être appliqué à différents types de cellules et modifié avec des traitements expérimentaux pour étudier les espèces réactives de l’oxygène (ROS) dans le développement général.

ROS Imagerie des cellules vivantes au cours du développement neuronal

L’article explique comment enlever chirurgicalement les yeux des larves vivantes de poisson zèbre comme première étape vers l’étude de la façon dont l’apport rétinien influence la croissance et le développement du tectum optique. En outre, l’article fournit des informations sur l’anesthésie larvaire, la fixation et la dissection cérébrale, suivies de l’immunohistochimie et de l’imagerie confocale.

Enlèvement des yeux chez les larves vivantes de poisson zèbre pour examiner la croissance et le développement du système visuel dépendants de l’innervation

Découvrez la préparation de tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour l'imagerie ex vivo. Cette méthode permet d'étudier les rôles physiologiques et métaboliques des ions calcium dans les cellules rétiniennes en temps réel.

Préparation tranches rétiniennes fraîches de poisson-zèbre adulte pour Ex Vivo des expériences d’imagerie

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