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DOI: 10.3791/58134-v
Alexander Goedel*1,2, Dorota M. Zawada*1, Fangfang Zhang1, Zhifen Chen3, Alessandra Moretti1,2, Daniel Sinnecker1,2
1Medical Department I, University Hospital Klinikum rechts der Isar,Technical University of Munich, 2German Centre for Cardiovascular Research (DZHK), Munich Heart Alliance, 3Beth Israel Deaconess Medical Center,Harvard Medical School
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Nous présentons une méthode pour image optiquement les potentiels d’action, plus précisément dans les cardiomyocytes de cellules souches dérivées ventriculaire comme pluripotentes induites. La méthode est basée sur l’expression pilotée par le promoteur d’une protéine fluorescente sensibles au voltage.
Les cardiomyocytes générés par les cellules souches pluripotentes induites ou IPS sont de plus en plus utilisés pour répondre à une variété de questions biologiques dans le domaine de l’électrophysiologie cardiaque. Les principaux avantages de cette technologie sont qu’elle permet une augmentation spectaculaire du débit ainsi que des enregistrements potentiels d’action spécifiques de sous-type dans ventriculaire comme les myocytes, en utilisant un élément promoteur spécifique ventriculaire. L’introduction de capteurs de tension génétiquement codés par transduction lentivirale permet l’imagerie optique des potentiels d’action des cardiomyocytes dérivés des cellules souches pluripotentes d’origine humaine.
Commencez par mélanger le supernatant de culture cellulaire contenant du lentivirus avec le milieu d’entretien des cardiomyocytes, à un rapport un pour un. Ajouter le bromure d’hexadiméthère à une concentration finale de 8 microgrammes par millilitre, pour améliorer l’efficacité de l’infection. Et remplacez le milieu d’entretien des cardiomyocytes dans le plat de culture des cardiomyocytes dérivés des cellules IPS, par le milieu d’infection.
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