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Creazione di sistemi di dimerizzazione delle proteine altamente specifici indotta chimicamente mediante la selezione stepwise di phage di una biblioteca combinatoria di anticorpi a dominio singolo
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Creating Highly Specific Chemically Induced Protein Dimerization Systems by Stepwise Phage Selection of a Combinatorial Single-Domain Antibody Library
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Creazione di sistemi di dimerizzazione delle proteine altamente specifici indotta chimicamente mediante la selezione stepwise di phage di una biblioteca combinatoria di anticorpi a dominio singolo

DOI:
10.3791/60738-v

•

10:17 min

•

January 14, 2020

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Institute for Protein Design,University of Washington

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:47TG1 Cell and Negative Selection Bead Preparation
  • 02:15Positive Selection Bead Preparation
  • 03:33Phage-displayed Nanobody Elution and Input/Output Titrations and Infection
  • 05:15Single Clone Isolation
  • 06:22Anchor Binder Validation
  • 08:13Results: Representative Anchor and Dimerization Binder Characterization
  • 09:39Conclusion

Summary

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La creazione di sistemi di dimerizzazione delle proteine indotta chimicamente con l'affinità e la specificità desiderate per ogni piccolo ligando molecolare avrebbe molte applicazioni biologiche di rilevamento e attuazione. Qui, descriviamo un metodo efficiente e generalizzabile per l'ingegneria de novo di sistemi di dimerizzazione chimicamente indotti attraverso la selezione graduale di una libreria di anticorpi combinatori combinatori e di foragi.

Tags

Protein DimerizationBiosensorPhage DisplaySingle-domain AntibodySmall MoleculeCell BehaviorCell Metabolite MonitoringStreptavidin BeadsBiotinylated LigandNegative And Positive Selection

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