Dosage multiple de bolus intraveineux et évaluation hémodynamique invasive dans un modèle d’hypertension artérielle pulmonaire induite par l’hypoxie chez la souris

Pour un composé qui doit être administré directement dans la circulation sanguine, l’optimisation de l’administration intraveineuse est l’élément clé de la procédure expérimentale. Notre protocole détaillé fournit des instructions étape par étape pour effectuer plusieurs dosages en bolus intraveineux via la veine jugulaire de souris, et comment effectuer des cathétérismes artériels et ventriculaires droits pour une évaluation hémodynamique précise dans un modèle d’hypoxie hypothroïque pulmonaire d’hypertension artérielle pulmonaire. Les procédures présentées ici sont des résultats importants pour les chercheurs intéressés par la racine IV de la plateforme d’administration de composés pour développer un traitement de l’hypertension artérielle primaire.

Les chercheurs peuvent utiliser cette méthode d’injection de bolus de la veine jugulaire pour le criblage de composés de développement de médicaments dans n’importe quel modèle de maladie chez la souris. Une injection de bolus IV réussie et des mesures de la pression artérielle nécessitent beaucoup de pratique. Pour commencer, retirez la souris de la chambre d’anesthésie.

Placez la souris anesthésiée en position couchée sur une plate-forme d’injection sous un microscope de dissection. Maintenez l’anesthésie via un cône nasal avec 1,5% d’isoflurane, et retenez doucement les quatre jambes avec du ruban adhésif pour immobiliser le corps. Frottez doucement la zone chirurgicale trois fois avec trois cycles alternés de solution de povidone iodée et d’éthanol à 70 %.

Après avoir fait une coupe longitudinale de 0,5 centimètre, utilisez une pince pour séparer le muscle et les tissus adipeux et localiser la veine jugulaire externe droite. Insérez ensuite une aiguille stérile de 28 G dans la veine jugulaire. Avec le biseau de l’aiguille vers le haut.

Appuyez lentement sur le piston de la seringue pour injecter le composé dans la veine. Laissez l’aiguille rester dans la veine pendant 10 secondes supplémentaires pour éviter le reflux. Retirez l’aiguille et utilisez un coton-tige pour appliquer une pression sur le site d’injection afin d’éviter les saignements.

Suturez la peau avec une suture 5/0 et placez l’animal dans une cage de récupération avec le fond de la cage recouvert d’une serviette en papier sans litière. Tout d’abord, mesurez la distance entre le site d’insertion du cathéter et l’emplacement souhaité de l’extrémité du cathéter. Marquez deux marques de distance de cathéter pour fournir une indication visuelle de la profondeur d’insertion, appliquez la pommade vétérinaire directement sur la surface oculaire des yeux de la souris pour éviter la sécheresse.

Placez la souris en position couchée sur une plateforme d’injection sous un microscope de dissection. Après avoir incisé la peau de la mandibule au sternum, séparez les glandes salivaires et exposez la trachée. Mettez 0,5 millilitre de PBS dans la cavité pour ralentir le développement des spasmes vasculaires tout en manipulant l’artère carotide.

Isolez soigneusement une section de cinq millimètres de l’artère carotide droite en plaçant un morceau de papier blanc sous le vaisseau comme arrière-plan. L’utilisation d’un 8-0 suturer, faire un nœud permanent pour fermer l’extrémité crânienne du vaisseau. Ensuite, faites le premier nœud lâche pour obstruer temporairement le flux sanguin de l’aorte.

Ensuite, faites le deuxième nœud lâche entre les deux premières sutures. À l’aide d’une aiguille de 25 G, faites un petit trou suffisamment grand pour faire passer le cathéter dans l’alignement du vaisseau entre le nœud permanent et le deuxième nœud lâche. Tenez le cathéter à 1,5 pouce de l’extrémité et insérez doucement l’extrémité du cathéter dans le trou de l’artère.

Serrez le deuxième nœud lâche autour du cathéter et du vaisseau qui permet encore le passage du cathéter. Relâchez doucement le premier nœud lâche. Continuez à insérer le cathéter vers l’aorte ascendante selon le repère sur le cathéter jusqu’à ce que l’analyse de la pression montre un profil de pression artérielle.

Enregistrez les données de pression artérielle systémique à l’aide du système et du logiciel d’acquisition de données. Desserrez le nœud de suture moyen pour permettre au cathéter d’être retiré. Ensuite, fixez le premier nœud lâche pour éviter les saignements et retirez le cathéter de l’artère carotide.

Isolez soigneusement la veine jugulaire externe droite du tissu conjonctif environnant. L’utilisation d’un 8-0 suturez, ligaturez toutes les petites branches et faites un nœud permanent pour fermer l’extrémité crânienne du vaisseau. Ensuite, faites un nœud lâche à l’extrémité caudale du récipient.

Utilisez une aiguille de 25 G pour faire un petit trou à proximité du nœud permanent. Tenez le cathéter et insérez le cathéter dans la coupe de la veine et serrez le nœud caudal autour du cathéter et du vaisseau. Poussez lentement le cathéter dans le cœur droit.

Surveillez la profondeur de l’extrémité du cathéter en fonction de la marque du cathéter. Évaluez la position de l’extrémité du cathéter en fonction du tracé des ondes de pression dans le logiciel. Lorsque l’extrémité du cathéter est dans le ventricule droit, le moniteur affichera un tracé typique de la pression systolique ventriculaire droite.

Gardez le cathéter stable et recueillez les données pendant cinq minutes. Une fois l’enregistrement terminé, retirez délicatement le cathéter et observez qu’il n’y a pas d’enregistrement de pression. Faites le nœud caudal autour du récipient.

Remettez le cathéter dans la solution PBS. Lors du cathétérisme du ventricule droit chez une souris C57 black six contrôlée par normoxie, un accès réussi à la chambre ventriculaire droite a été obtenu, comme le montre le changement de la forme d’onde hémodynamique dans différentes régions du système veineux. La pression artérielle systémique et la pression systolique ventriculaire droite ont été mesurées chez une souris à poitrine fermée quatre semaines après l’exposition à l’hypoxie ou à la normoxie.

Par rapport au groupe normoxie, la pression systolique ventriculaire droite était significativement augmentée dans le groupe hypoxie. Le traitement avec le composé de micro-ARN 7C1/let-7 a entraîné une diminution significative de la pression systolique ventriculaire droite par rapport au groupe hypoxie, tandis que la pression artérielle systémique n’a changé dans aucun groupe. L’évaluation de la pression systolique du ventricule rouge chez les souris à poitrine fermée est un défi en raison de l’anatomie complexe du ventricule rouge.

Les investigateurs doivent éviter les tentatives prolongées et répétées de cathétérisme du ventricule rouge. Notre procédure de dosage jugulaire et bolus peut être utilisée pour le criblage de composés de développement de médicaments dans n’importe quel modèle de maladie chez la souris. Nous pouvons utiliser la racine IV de la plateforme d’administration de composés pour développer un traitement de l’hypertension artérielle pulmonaire.