Implantation intracrânienne de canules pour des perfusions de lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique (CAR) locorégional en série chez la souris

Ce protocole reproduit un système de cathéter intraventriculaire utilisé dans les essais cliniques en cours pour tester l’administration régionale locale de la thérapie par cellules CAR-T dirigée contre les tumeurs du système nerveux central. Le principal avantage de cette technique est la possibilité de fournir plusieurs doses répétées de thérapie régionale locale par cellules CAR-T sans effectuer plusieurs interventions chirurgicales invasives. Ce système pourrait être utilisé pour étudier différentes thérapies dans différents sites d’administration, et pourrait donc fournir un aperçu d’une myriade de domaines de recherche en neurosciences.

Pour commencer, placez la souris anesthésiée à la tête rasée sur la table d’opération et ouvrez doucement le bas du bras stéréotaxique à l’aide d’une spatule. Insérez la canule avec une pince et fixez-la en serrant la vis sur le bras jusqu’à ce que la moitié aux deux tiers de la partie en plastique blanc et cinq millimètres de la canule dépassent du bas de l’ouverture. Insérez et fixez les dents supérieures de la souris dans la barre de morsure de l’appareil stéréotaxique.

Tirez le cône nasal vers l’avant et serrez-le, en veillant à ce que la souris inhale l’isoflurane. Ensuite, montez la souris sur l’appareil stéréotaxique chauffé à l’aide de poignets ou de barres d’oreille, en évitant une pression excessive. Désinfectez le site chirurgical et faites une coupe parallèle au crâne comme décrit dans le manuscrit.

Utilisez des cotons-tiges pour repousser le fascia. Identifiez les repères, le bregma et le lambda sur le crâne correspondant aux marques antérieures et postérieures où les plaques crâniennes se rencontrent. Pour créer une surface pour attacher l’acrylique, faites doucement plusieurs fentes sur le crâne à l’aide d’un scalpel.

À l’aide du bras stéréotaxique, localisez la canule au point de repère d’intérêt. Soulevez la pointe de la canule d’un à deux millimètres au-dessus de la surface du crâne et déplacez-vous vers les coordonnées souhaitées. À l’aide d’une aiguille de calibre 18 ou d’une perceuse chirurgicale, faites deux trous de vis sur le crâne exposé loin de l’endroit où la canule entre, en assurant suffisamment d’espace pour la canule.

Tournez la perceuse à travers le trou de vis jusqu’à ce qu’elle se fixe au crâne. À l’aide d’un tournevis à embout plat, insérez et fixez deux vis dans les trous. Ensuite, tirez doucement la vis vers le haut pour vous assurer qu’elle est bien fixée.

Pour insérer une canule, créez un trou dans le crâne aux coordonnées identifiées à l’aide d’une aiguille de calibre 18 ou d’une perceuse chirurgicale. À l’aide du bras stéréotaxique, abaissez la canule à la coordonnée DV souhaitée. À environ 0,3 gramme de poudre de résine acrylique et 10 à 15 gouttes de liquide dans une plaque de porcelaine à 12 puits, chargez le matériau visqueux préparé de couleur blanche dans une seringue d’un millilitre.

Enduisez le crâne et remplissez les espaces autour de la canule et vissez. Desserrez la vis du bras stéréotaxique pendant que le ciment est flexible. Utilisez doucement une spatule pour libérer la canule du support à l’ouverture inférieure et retirez le bras stéréotaxique de la souris.

Une fois le ciment séché, insérez la canule factice dans la canule de guidage et tournez dans le sens des aiguilles d’une montre pour la fixer hermétiquement. Une fois la procédure terminée, remettez la souris dans sa cage domestique chauffée pour la récupérer. Pour préparer la canule de traitement, insérez son dessus dans le tube PKG.

Ensuite, remplissez la seringue de traitement avec une suspension de cellules CAR-T et insérez-la à travers l’autre extrémité du tube PKG, recouvrant le dessus de la canule de traitement. Après avoir anesthésié la souris, fixez la canule de guidage à la base à l’aide d’une pince. Dévissez et retirez la canule factice pour permettre l’accès à la canule de guidage.

Infuser les cellules CAR-T pendant une minute et maintenir la canule de traitement en place pendant une minute supplémentaire. Après avoir retiré la canule de traitement, revissez fermement une canule factice. Ensuite, administrer le méloxicam par voie sous-cutanée pour le contrôle de la douleur.

La thérapie par cellules CAR-T dirigée par GPC2 a induit une régression tumorale significative dans le médulloblastome et une survie significativement prolongée dans le modèle de gliome thalamique diffus à mi-ligne. Lors de l’insertion de la canule guide dans un emplacement intratumoral, il est important de comprendre que les coordonnées dorso-ventrales peuvent être plus superficielles que l’injection tumorale afin de tenir compte des longueurs de projection du mannequin et de la canule de traitement.