Visualisation non invasive de la morphologie microvasculaire du lit de l’ongle chez la souris par capillaroscopie

L’un des intérêts de notre laboratoire est la dysfonction vasculaire dans les maladies neurodégénératives. Notre objectif est de détecter et de surveiller la pathologie microvasculaire périphérique par capillaroscopie afin de mieux comprendre son rôle potentiel dans les maladies du système nerveux central. La détection d’un dysfonctionnement microvasculaire chez les animaux est souvent invasive, réalisée ex vivo ou coûteuse. Grâce à ce protocole, les chercheurs peuvent facilement et à moindre coût évaluer la microvascularisation du lit de l’ongle et traduire les résultats cliniques de la capillaroscopie du pli de l’ongle en modèles animaux. Nous introduisons un nouvel emplacement pour visualiser le miroir de la microvascularisation périphérique, le lit de l’ongle. Par rapport à la capillaroscopie du pli de l’ongle, la capillaroscopie du lit de l’ongle offre une plus grande zone pour une meilleure observation de la morphologie et de la structure microvasculaires.

[Instructeur] Pour commencer, positionnez la souris anesthésiée sur la table d’opération pour la procédure. Appliquez ensuite un gel lubrifiant pour les yeux ou une pommade ophtalmique stérile non médicamenteuse sur les deux yeux pour éviter que la cornée ne se dessèche. Ensuite, en maintenant l’animal sous anesthésie à l’aide d’un cône nasal, appliquez une quantité généreuse de crème dépilatoire sur toute la patte à l’aide d’un applicateur. Assurez-vous d’une couverture complète des zones des pattes et du lit de l’ongle. Après avoir laissé la crème pendant deux minutes, nettoyez soigneusement la crème dépilatoire avec un mouchoir propre et lavez la patte dans de l’eau tiède et stérile. 24 heures après l’épilation, installez l’appareil de capillaroscopie dans une pièce à température contrôlée maintenue entre 21,5 et 22,5 degrés Celsius. Connectez le capillaroscope à un ordinateur portable via une connexion USB. Ouvrez l’application logicielle vidéo Debut sur l’ordinateur portable. Une fois que la souris est correctement anesthésiée, appliquez un gel lubrifiant pour les yeux ou une pommade ophtalmique stérile non médicamenteuse sur les deux yeux. Placez du ruban adhésif de laboratoire blanc ou un matériau de fond similaire sous la patte pour améliorer le contraste et la visualisation des vaisseaux. Positionnez maintenant la patte arrière côté palmaire vers le haut sur la plate-forme de ruban de laboratoire, sous l’objectif. Écartez doucement les orteils pour séparer les ongles sous l’objectif du microscope à l’aide d’un applicateur. Assurez-vous que les lits des ongles sont clairement séparés pour une imagerie optimale des vaisseaux. Visualisez ce qui est magnifié par le capillaroscope et concentrez-vous sur le lit de l’ongle en ajustant les ajusteurs des étages X et Y et la molette de grossissement pour obtenir une image claire. Pour réduire l’éblouissement et améliorer la concentration, appliquez généreusement de l’huile d’immersion sur la patte, assurant une couverture complète de l’ongle. Concentrez-vous sur l’ongle du deuxième doigt de la patte arrière, car il s’agit du plus gros ongle et le plus facile à imager chez la souris. Ajustez les ajusteurs des étages X et Y et la molette de grossissement pour mettre au point le réseau de vaisseaux. Ajustez l’objectif pour minimiser l’éblouissement et mettre en évidence le réseau de vaisseaux de l’ongle. Pour enregistrer une vidéo, appuyez sur le bouton rouge Enregistrer dans Début. Enregistrez chaque vidéo dans le dossier de projet approprié et étiquetez chaque vidéo en conséquence. Ensuite, ouvrez le logiciel ImageJ et faites glisser le fichier dans l’interface du logiciel pour charger l’image. Pour régler la luminosité et le contraste, sélectionnez l’image, puis Ajuster et Luminosité/Contraste. Cet outil permet de modifier le contraste des images pour mieux visualiser la morphologie des vaisseaux. Une fois l’image ajustée, cliquez sur Définir dans l’outil Luminosité/Contraste. Enfin, allez dans Fichier, Enregistrer sous, et sélectionnez Tiff pour enregistrer l’image. La morphologie vasculaire du lit de l’ongle a été imagée avec succès à l’aide de la méthode de capillaroscopie. Le système vasculaire typique du lit de l’ongle de souris se composait d’un vaisseau afférent, d’un vaisseau efférent et d’un réseau de capillaires reliant les deux. Le réseau capillaire du lit de l’ongle était cohérent entre différentes souches de souris, comme démontré chez les souris de type sauvage sur un fond SV129/S6 et un fond C57/B6J.