Name: Le blanchiment itératif étend la multiplicité grâce à l’utilisation de l’automatisation de la coloration pour les installations centrales (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: Découvrez la méthode IBEX pour l'imagerie tissulaire en neurosciences en utilisant des colorateurs automatisés et l'amplification du signal à la tyramide. Cette approche améliore la sensibilité de détection et la reproductibilité des analyses histologiques.

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<ol><li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+an+iterative+immunolabeling+and+chemical+bleaching+method+for+high-content+imaging+of+diverse+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protoc%22%5BJournal%5D)">IBEX: an iterative immunolabeling and chemical bleaching method for high-content imaging of diverse tissues.</a> Nature Protoc. 17 (2), 378-401 (2022).</li>
<li>Radtke, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IBEX%3A+A+versatile+multiplex+optical+imaging+approach+for+deep+phenotyping+and+spatial+analysis+of+cells+in+complex+tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">IBEX: A versatile multiplex optical imaging approach for deep phenotyping and spatial analysis of cells in complex tissues.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 117 (52), 33455-33465 (2020).</li>
<li>Prichard, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Overview+of+automated+immunohistochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Pathol+Lab+Med%22%5BJournal%5D)">Overview of automated immunohistochemistry.</a> Arch Pathol Lab Med. 138, 1578-1582 (2014).</li>
<li>Stack, E. C., Wang, C., Roman, K. A., Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplexed+immunohistochemistry%2C+imaging%2C+and+quantitation%3A+a+review%2C+with+an+assessment+of+Tyramide+signal+amplification%2C+multispectral+imaging+and+multiplex+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Multiplexed immunohistochemistry, imaging, and quantitation: a review, with an assessment of Tyramide signal amplification, multispectral imaging and multiplex analysis.</a> Methods. 70, 46-58 (2014).</li>
<li>Speranza, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+differences+in+immune+dynamics+during+SARS-CoV-2+infection+in+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci+Alliance%22%5BJournal%5D)">Age-related differences in immune dynamics during SARS-CoV-2 infection in rhesus macaques.</a> Life Sci Alliance. 5, 4(2022).</li>
<li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Procedural+requirements+and+recommendations+for+multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+assays+to+support+translational+oncology+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancers+%28Basel%29%22%5BJournal%5D)">Procedural requirements and recommendations for multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification assays to support translational oncology studies.</a> Cancers (Basel). 12 (2), 255(2020).</li>
<li>Hoyt, C. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiplex+immunofluorescence+and+multispectral+imaging%3A+forming+the+Basis+of+a+clinical+test+platform+for+immuno-oncology%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Mol+Biosci%22%5BJournal%5D)">Multiplex immunofluorescence and multispectral imaging: forming the Basis of a clinical test platform for immuno-oncology.</a> Front Mol Biosci. 8, 674747(2021).</li>
<li>Bankhead, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((QuPath%3A+Open+source+software+for+digital+pathology+image+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">QuPath: Open source software for digital pathology image analysis.</a> Sci Rep. 7, 16878(2017).</li>
<li>Feng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+analysis+with+SPIAT+and+spaSim+to+characterize+and+simulate+tissue+microenvironments%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Spatial analysis with SPIAT and spaSim to characterize and simulate tissue microenvironments.</a> Nat Commun. 14, 2697(2023).</li>
<li>Meyer, L., Eling, N., Bodenmiller, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((cytoviewer%3A+an+R%2FBioconductor+package+for+interactive+visualization+and+exploration+of+highly+multiplexed+imaging+data%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">cytoviewer: an R/Bioconductor package for interactive visualization and exploration of highly multiplexed imaging data.</a> BMC Bioinformatics. 25, 9(2024).</li>
<li>Windhager, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+end-to-end+workflow+for+multiplexed+image+processing+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">An end-to-end workflow for multiplexed image processing and analysis.</a> Nat Protoc. 18 (11), 3565-3613 (2023).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>Kits TSA Alexa pour réactifs de tache </td><td>ThermoFisher</td><td></td><td>Des colorants TSA alternatifs si les filtres de microscopie opale ne sont pas disponibles. Parmi ceux-ci figurent Alexa Fluor 488 (canal bleu/vert), Alexa Fluor 555 ou 568 (canal rouge), Alexa Fluor 647 (canal rouge lointain), Alexa Fluor 750 (proche infrarouge, si équipé de filtres appropriés).</td></tr><tr><td>Anticorps Arg1</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>93668</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:100</td></tr><tr><td>Lames matérielles </td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Ou encore, un profil élevé ou bas dépendra du type de tissu</td></tr><tr><td>Anticorps CD11b</td><td>Abcam</td><td>ab133357</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:2000</td></tr><tr><td>Anticorps CD163</td><td>Abcam</td><td>ab182422</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:500</td></tr><tr><td>Anticorps CD31</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>77699S</td><td>Utilisé dans la Figure 2 à 1:100</td></tr><tr><td>Anticorps CD3e</td><td>Dako</td><td>A045201-2</td><td>Utilisé dans la Figure 1 à 1:100</td></tr><tr><td>Tool Pot de Coplin</td><td>Fischer Scientific</td><td>01-816-21</td><td>Ou quelque chose de similaire</td></tr><tr><td>Enbains de couverture matériels </td><td>VWR</td><td>v48393-026</td><td>Ou quelque chose de similaire</td></tr><tr><td>Anticorps CX3CR1</td><td>Abcam</td><td>ab308613</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:450</td></tr><tr><td>Stain DAPI</td><td>Akoya</td><td>FP1490</td><td></td></tr><tr><td>Software FIJI</td><td></td><td></td><td>Utilisé pour mesurer l’intensité du signal</td></tr><tr><td>Slide Glissades Fisher Superfront</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-246</td><td>Ou quelque chose de similaire</td></tr><tr><td>Software HALO</td><td>Indica Labs</td><td></td><td>Exemple de logiciel d’analyse d’image disponible commercialement. Utilisé pour aligner et analyser des images.</td></tr><tr><td>Anticorps Iba1</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>17191</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:800</td></tr><tr><td>Software inForm</td><td>Akoya</td><td></td><td>Utilisé pour mesurer l’intensité du signal</td></tr><tr><td>Anticorps iNOS</td><td>Abcam</td><td>ab283655</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:400</td></tr><tr><td>Instrument Leica Bond Rx (ou RXm)</td><td>Leica Biosystems</td><td>21.2201</td><td>Appelé « Autostainer 1 » dans le texte. Assurez-vous que tous les réactifs associés sont également disponibles, y compris les boîtes de coloration et les solutions en vrac.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Reagent LiBH4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>62460-5G-F</td><td>Conserver dans un environnement anhydre</td></tr><tr><td>Claquement de mantra Instrument </td><td>Akoya</td><td></td><td>Un microscope multispectral à fluorescence est nécessaire pour déverrouiller les colorants. Exemple de microscope pouvant être utilisé pour détecter des colorants d’opale.</td></tr><tr><td>Tool Microtome</td><td>Leica Biosystems</td><td></td><td>Ou un modèle similaire avec des accessoires préférés comme des pinceaux</td></tr><tr><td>Kit de réactif de coloration Opal IHC 480</td><td>Akoya</td><td>FP1500001KT</td><td>Utilisé dans la Figure 4</td></tr><tr><td>Kit Plex Opal IHC 6-plex réactif de coloration </td><td>Akoya</td><td>NEL821001KT</td><td>Les 520 et 620 ne blanchissent pas, comme on les utilise dans les figures 1, 2 et 4</td></tr><tr><td>Kit Reactif de coloration Opal IHC 780</td><td>Akoya</td><td>FP1501001KT</td><td>Utilisé dans la Figure 4</td></tr><tr><td>Tool Four</td><td>Millipore Sigma</td><td>Z683329</td><td>Ou similaire, cela peut aussi se faire sur autostainer</td></tr><tr><td>Anticorps Pancytokératine</td><td>Abcam</td><td>ab9377</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:50</td></tr><tr><td>Réactif PBS (optionnel)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AAJ61196AP</td><td></td></tr><tr><td>Instrument PhenoImager</td><td>Akoya</td><td></td><td>Imagerie multispectrale de diapositives entières avec démélange spectral embarqué intégré au logiciel</td></tr><tr><td>Reagent ProLong Gold Antifade</td><td>Fisher Scientific</td><td>P36961</td><td>Ou des supports de montage aqueux similaires</td></tr><tr><td>Anticorps ProSP-C n-terminal (ProSPC)</td><td>Bioréactifs des Sept Collines</td><td>WRAB-9337</td><td>Utilisé dans la Figure 4 à 1:250</td></tr><tr><td>RAGE < ANTICORPS/></td><td>R& D</td><td>MAB1179</td><td>Utilisé dans les figures 1 et 2 à 1:50</td></tr><tr><td>Tampon réactif </td><td>Roche</td><td>NC1895692</td><td>Pour une utilisation avec l’autostainer Ventana</td></tr><tr><td>Anticorps SARS-CoV-2-N</td><td>Signalisation cellulaire</td><td>68344</td><td>Utilisé dans la Figure 2 à 1:1000</td></tr><tr><td>Lames TOMO Lames CC d’adhérence CC - WH</td><td>Avantik</td><td>SKUSL6519-1</td><td>Si l’adhérence tissulaire est préoccupante</td></tr><tr><td>Instrument Ventana Discovery Ultra</td><td>Roche</td><td></td><td>Appelé « Autostainer 2 » dans le texte. Assurez-vous que tous les réactifs associés sont également disponibles, y compris les boîtes de coloration et les solutions en vrac.&nbsp ;</td></tr><tr><td>Tampon de lavage réactif </td><td>Leica Biosystems</td><td>AR9590</td><td>Pour une utilisation avec Leica Bond autostainer</td></tr><tr><td>Réactif Eau</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-230-147</td><td>Le DI est le meilleur, pas le millipore</td></tr><tr><td>Bain d’eau Tool </td><td>Leica Biosystems</td><td>140607020C1</td><td>Ou quelque chose de similaire</td></tr></tbody></table>

le blanchiment itératif étend la multiplicité grâce à l’utilisation de l’automatisation de la coloration pour les installations centrales

Iterative Bleaching Extends Multiplicity with Use of Staining Automation for Core Facilities

Le blanchiment itératif étend la multiplicité grâce à l’utilisation de l’automatisation de la coloration pour les installations centrales

Iterative Bleaching Extends Multiplicity (IBEX) is a highly sensitive tyramide signal amplification (TSA)-based multi-round fluorescence imaging technique ...

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