Name: Approche transconjonctivale pour l’injection dans le nerf optique du rat (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-04T14:30:00.000+00:00
Duration: 2 min 33 s
Description: Découvrez une approche transconjonctivale pour injecter dans le nerf optique du rat. Cette technique minimalement invasive permet une livraison précise de thérapies géniques pour la recherche sur la neurofibromatose de type 1.

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<ol><li>Korn, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+neuroprotective+effects+of+methylprednisolone+and+surgical+decompression+in+a+rodent+model+of+traumatic+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Eye+Res%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the neuroprotective effects of methylprednisolone and surgical decompression in a rodent model of traumatic optic neuropathy.</a> Curr Eye Res. 47 (3), 461-467 (2022).</li>
<li>Lim, J. Y., Utzschneider, D. A., Sakatani, K., Kocsis, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+attenuation+of+GABA+sensitivity+in+the+maturing+myelin-deficient+rat+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Dev+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The attenuation of GABA sensitivity in the maturing myelin-deficient rat optic nerve.</a> Brain Res Dev Brain Res. 72 (1), 15-20 (1993).</li>
<li>Singh, D., Dromel, P. C., Perepelkina, T., Baranov, P., Young, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C6+cell+injection+into+the+optic+nerve+of+long-evans+rats%3A+A+short-term+model+of+optic+pathway+gliomas%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplant%22%5BJournal%5D)">C6 cell injection into the optic nerve of long-evans rats: A short-term model of optic pathway gliomas.</a> Cell Transplant. 29, 963689720964383(2020).</li>
<li>Schwaner, S. A., Feola, A. J., Ethier, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Factors+affecting+optic+nerve+head+biomechanics+in+a+rat+model+of+glaucoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+R+Soc+Interface%22%5BJournal%5D)">Factors affecting optic nerve head biomechanics in a rat model of glaucoma.</a> J R Soc Interface. 17 (165), 20190695(2020).</li>
<li>Ellouze, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+allotopic+expression+of+the+human+mitochondrial+ND4+prevents+blindness+in+a+rat+model+of+mitochondrial+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Hum+Genet%22%5BJournal%5D)">Optimized allotopic expression of the human mitochondrial ND4 prevents blindness in a rat model of mitochondrial dysfunction.</a> Am J Hum Genet. 83 (3), 373-387 (2008).</li>
<li>Kwon, H., Park, M., Nepali, S., Lew, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia-preconditioned+placenta-derived+mesenchymal+stem+cells+rescue+optic+nerve+axons+via+differential+roles+of+vascular+endothelial+growth+factor+in+an+optic+nerve+compression+animal+model%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Hypoxia-preconditioned placenta-derived mesenchymal stem cells rescue optic nerve axons via differential roles of vascular endothelial growth factor in an optic nerve compression animal model.</a> Mol Neurobiol. 57 (8), 3362-3375 (2020).</li>
<li>Pang, I. H., Clark, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rodent+models+for+glaucoma+retinopathy+and+optic+neuropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Glaucoma%22%5BJournal%5D)">Rodent models for glaucoma retinopathy and optic neuropathy.</a> J Glaucoma. 16 (5), 483-505 (2007).</li>
<li>Raykova, K., Jones, M. V., Huang, H., Hoffman, P. F., Levy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Minimally-invasive+Technique+for+Injection+into+Rat+Optic+Nerve%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Minimally-invasive Technique for Injection into Rat Optic Nerve.</a> J Vis Exp. (99), e52249(2015).</li>
<li>Hallas, B. H., Wells, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+technique+for+mulitple+injections+into+the+mamallian+optic+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Kopf+Carrier%22%5BJournal%5D)">A novel technique for mulitple injections into the mamallian optic nerve.</a> Kopf Carrier. 54, 1-10 (2000).</li>
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<li>Han, I. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocompatibility+of+human+induced+pluripotent+stem+cell-derived+retinal+progenitor+cell+grafts+in+immunocompromised+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Biocompatibility of human induced pluripotent stem cell-derived retinal progenitor cell grafts in immunocompromised rats.</a> Cell Transplantation. 31, 1-25 (2022).</li>
<li>Tang, Y., Gutmann, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurofibromatosis+Type+1-associated+optic+pathway+gliomas%3A+Current+challenges+and+future+prospects%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Manag+Res%22%5BJournal%5D)">Neurofibromatosis Type 1-associated optic pathway gliomas: Current challenges and future prospects.</a> Cancer Manag Res. 15, 667-681 (2023).</li>
<li>Pan, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Implantation+of+biomimetic+polydopamine+nanocomposite+scaffold+promotes+optic+nerve+regeneration+through+modulating+inhibitory+microenvironment%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nanobiotechnol%22%5BJournal%5D)">Implantation of biomimetic polydopamine nanocomposite scaffold promotes optic nerve regeneration through modulating inhibitory microenvironment.</a> J Nanobiotechnol. 22 (1), 683(2024).</li>
<li>Gokoffski, K. K., Peng, M., Alas, B., Lam, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuro-protection+and+neuro-regeneration+of+the+optic+nerve%3A+recent+advances+and+future+directions%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurol%22%5BJournal%5D)">Neuro-protection and neuro-regeneration of the optic nerve: recent advances and future directions.</a> Curr Opin Neurol. 33 (1), 93-105 (2020).</li>
<li>Negishi, H., Dezawa, M., Oshitari, T., Adachi-Usami, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optic+nerve+regeneration+within+artificial+Schwann+cell+graft+in+the+adult+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Optic nerve regeneration within artificial Schwann cell graft in the adult rat.</a> Brain Res Bull. 55 (3), 409-419 (2001).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>4',6-Diamidino-2-dichlorhydrate de phénylindole (DAPI)</td><td>MilliporeSigma</td><td>D9542</td><td>Dilution 1:10 000, utilisé pour la coloration des cryosections</td></tr><tr><td>AAV particules virales Vectorbuilder</td><td></td><td>N/A</td><td>Vecteur utilisé pour l’injection du nerf optique</td></tr><tr><td>Aqua-Mount Milieu de montage</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>14-390-5</td><td>Utilisé pour le montage des cryosections colorées</td></tr><tr><td>Sérum bovin albumine&nbsp ;</td><td>Research Products International Corp</td><td>9048-46-8</td><td>Utilisé dans le processus de coloration des cryosections</td></tr><tr><td>Chèvre anti-rat Alexa Fluor 488&nbsp ;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11006</td><td>Dilution 1:1000, utilisé pour la coloration des cryosections</td></tr><tr><td>Gaz isoflorain</td><td>Primal Healthcare</td><td>66794-017-10</td><td>Gaz pour l’anesthésie</td></tr><tr><td>Système de microscope confocal vertical Leica TCS SPE&nbsp ;</td><td>Leica Microsystems</td><td>N/A</td><td>Microscope confocal</td></tr><tr><td>Seringue Luer</td> lock <td>BD</td><td>309628</td><td>Seringue injectable</td></tr><tr><td>Microm HM505E cryostat&nbsp ;</td><td>Microm</td><td>M-HM360 de Marshall Scientific</td><td>Utilisé pour la coupe d’échantillons</td></tr><tr><td>Rat anti-GFP&nbsp ;</td><td>BioLegend</td><td>338002</td><td>dilution 1:500, utilisée pour la coloration des cryosections</td></tr><tr><td>Crochet de moelle épinière</td><td>F.S.T</td><td>10162-12</td><td>Crochet utilisé pour isoler le nerf optique</td></tr><tr><td>Seringue de dix microlitres</td><td>Hamilton</td><td>CAL 803901</td><td>Seringue pour injection</td></tr><tr><td>Aiguille de trente-trois calibres</td><td>JBP</td><td>JBP3308B</td><td>Aiguille pour injection</td></tr><tr><td>Composé OCT Tissue-Tek&nbsp ;</td><td>VWR International</td><td>25608-930</td><td>Utilisé pour le traitement des cryomoules</td></tr><tr><td>Pinces dentées</td><td>Bausch et Lomb</td><td>E1809</td><td>Pinces pour saisir la conjonctive</td></tr><tr><td>Ciseaux de ténotomie incurvés Westcott</td><td>Bausch et Lomb</td><td>E3323-R</td><td>Ciseaux pour créer une péritomie</td></tr></tbody></table>

approche transconjonctivale pour l’injection dans le nerf optique du rat

Transconjunctival Approach for Injection into the Rat Optic Nerve

Des résultats expérimentaux représentatifs utilisant cette technique pour l’injection du nerf optique chez le rat sont présentés à la figure 2. Dans cet exemple, le virus adéno-associé eGFP (AAV-eGFP) a été injecté dans le nerf optique du rat en utilisant la technique transconjonctivale décrite ci-dessus avec une aiguille de 33 G reliée à une seringue de 10 μL. Ces résultats faisaient partie d’une expérience utilisant cette technique pour étudier l’injection du nerf optique dans le cadre d’un objectif ultime visant à utiliser l’AAV pour fournir une correction CRISPR aux nerfs optiques dans un modèle de rat de neurofibromatose 1 (NF1). Une combinaison de colorant et de vecteur AAV a été utilisée pour développer la technique d’injection. Les animaux ont été sacrifiés sept jours après l’injection dans le nerf optique. Les nerfs ont ensuite été disséqués et marqués avec des anticorps anti-GFP pour permettre l’imagerie du nerf optique par microscopie confocale afin de confirmer que le matériau avait réussi à pénétrer dans la gaine du nerf optique et à pénétrer dans le nerf optique. L’introduction réussie de matériel dans le nerf optique a été confirmée par la coloration des anticorps, et il est apparu vert à la microscopie confocale, comme le montre la figure 2A. Dans les cas où la pénétration à travers la gaine du nerf optique n’était pas complète, ou s’il y avait un efflux de matière à partir de la trace de l’aiguille, une coloration a été observée le long du bord de la gaine du nerf optique plutôt qu’à l’intérieur du tissu nerveux, comme le montre la figure 2C.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig01.jpg"> 
Figure 1 : Séquence des étapes chirurgicales. (A) La conjonctive est saisie à l’aide d’une pince dentée et des ciseaux Westcott sont utilisés pour créer une péritomie limbique. (B) Une fois que le fascia du tenon est ouvert et disséqué brutalement, l’orbite est exposée à l’aide de ciseaux Westcott. (C) Un crochet de moelle épinière est inséré et utilisé pour isoler le nerf optique. (D) Après dissection contondante du tissu orbitaire sus-jacent, le nerf optique est exposé à l’aide du crochet de la moelle épinière. (E) Une aiguille de 33 G est utilisée pour percer la gaine du nerf optique et injecter un adénovirus ou un colorant dans le nerf optique. (F) Le globe est déposé dans l’orbite et la conjonctive est repositionnée sur le site de la péritomie. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig01large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68048/68048fig02.jpg"> 
Figure 2 : Image panoramique confocale fluorescente représentative du nerf optique du rat 7 jours après l’injection réussie d’AAV-eGFP (vert) dans laquelle le vecteur a transduit les neurones près du chiasma optique. (A) Les noyaux du nerf optique sont marqués avec du DAPI (bleu). ONH avec une flèche désigne la tête du nerf optique ou l’extrémité orbitale du nerf, tandis que l’extrémité du chiasma optique est étiquetée comme « chiasma ». (B) Photographie d’un nerf optique de rat de l’orbite au chiasma encastré dans un bloc de cryosection congelé. Le nerf est injecté avec de l’encre de Chine immédiatement en arrière de l’orbite (site d’injection indiqué par une flèche noire) afin d’orienter le nerf optique. (C) Image fluorescente panoramique du nerf optique du rat 7 jours après l’injection infructueuse d’AAV-eGFP (vert) dans laquelle la majeure partie de la suspension du vecteur s’est probablement échappée du tractus nerveux, transductant la gaine optique. Les noyaux du nerf optique sont marqués avec du DAPI (bleu). ONH désigne la tête du nerf optique immédiatement en arrière de la rétine neurale et le site d’injection indiqué par une flèche blanche. Le chiasma et la flèche blanche se délimitent vers le chiasma optique. Barres d’échelle = 400 μm en (A) et 200 μm en (C). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68048/68048fig02large.jpg" target="_blank">Veuillez cliquer ici pour voir une version agrandie de cette figure.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Variable</td>
			<td colspan="3">Approcher</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Transconjonctival</td>
			<td>Supérieur</td>
			<td>Latéral</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incision cutanée</td>
			<td>Non</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Oui</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Incision conjonctivale</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Non</td>
			<td>Non</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Oui</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Transection du muscle orbitaire supérieur</td>
			<td>Non</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Non</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture de traction</td>
			<td>Non</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Oui</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Crochet de moelle épinière</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Non</td>
			<td>Non</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture cutanée</td>
			<td>Non</td>
			<td>Oui</td>
			<td>Oui</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>
Tableau 1 : Comparaison avec les techniques précédemment publiées pour isoler le nerf optique du rat pour l’étude expérimentale. Les variables, y compris la nécessité d’une incision cutanée, d’une incision conjonctivale, d’un microscope opératoire, d’une section du muscle orbitaire supérieur, d’une suture de traction, d’un crochet de moelle épinière et d’une suture cutanée, sont comparées à l’aide des approches transconjonctivale, supérieure et latérale.

Approche transconjonctivale pour l’injection dans le nerf optique du rat

The rat serves as an important model for studying disorders of the optic nerve, including heritable, traumatic, neoplastic, and autoimmune conditions. ...

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