Développement d’un modèle d’inhalation préclinique pour tester les distillats de cannabis vaporisés

Nous explorons l’impact des produits de vapotage de cannabis inhalés sur la physiologie pulmonaire, en combinant des techniques de biologie moléculaire traditionnelles et des techniques informatiques émergentes pour mieux comprendre comment le vapotage modifie la fonction pulmonaire. Nous avons montré que la vapeur de cannabis provoque des changements transcriptionnels dans les cellules épithéliales pulmonaires, similaires à la fumée de cannabis, suggérant des dommages. De plus, des connaissances mécanistes sur les lésions pulmonaires liées au vapotage émergent, en particulier avec les produits à base de THC contenant de l’acétate de vitamine E. La plupart des études sur les produits contenant du THC reposent sur des méthodes sans inhalation, telles que le gavage oral et les injections, qui offrent des informations précieuses, mais diffèrent de l’utilisation humaine typique. Notre objectif est de modéliser l’exposition au cannabis d’une manière plus pertinente sur le plan physiologique, avec l’inhalation. La puissance des nouveaux produits à base de cannabis pose des défis en matière de dosage. Nous voulons imiter les modèles d’utilisation humaine et obtenir des doses physiologiquement pertinentes sans effets indésirables chez la souris. Nous établissons une dose d’exposition standardisée qui délivre des doses physiologiquement pertinentes de THC aux souris sans effets comportementaux indésirables.

[Instructeur] Pour commencer, assemblez tous les composants du système. Insérez un tube fermé dans la chambre tampon de la pompe de soufflage pour éviter les fuites. Mettez le système sous tension et lancez le logiciel. Sélectionnez le module Sessions d’expérimentation. Sélectionnez Nouvelle étude pour commencer une nouvelle session expérimentale. Définir les groupes d’expérimentation et les sujets à étudier. Choisissez ensuite le modèle expérimental qui correspond au régime d’exposition souhaité. Dans la fenêtre des propriétés de la session, remplissez la section opérateur pour documenter l’utilisation de l’équipement. Pour l’étalonnage, sélectionnez le canal souhaité dans le logiciel. Suivez les étapes décrites dans le logiciel d’exploitation. Ensuite, sélectionnez la pompe souhaitée dans le logiciel. Effectuez le test de débit du système en suivant les instructions du logiciel d’utilisation. Vérifiez que le débit est dirigé vers le rotamètre. Annulez toutes les invites permettant de démarrer l’enregistrement des données si l’expérience n’est pas prête à commencer. Pour la préparation des animaux, acclimater progressivement le mâle et la femelle C57 BL6 pendant trois jours au système d’exposition. Pour commencer l’acclimatation, placez chaque souris dans une contrainte douce. Initier un flux d’air polarisé de deux litres par minute avec l’air ambiant pendant une durée équivalente à leur exposition expérimentale de 10, 20 ou 30 minutes. Rétractez complètement le composant en maille du dispositif de retenue. Tenez ensuite l’ensemble de la retenue devant la souris et laissez la souris entrer toute seule dans le composant du piston. Vérifiez que le nez de la souris est visible dans la section du piston. Fixez une pince à reliure juste derrière la souris pour éviter tout mouvement vers l’arrière. Lorsque vous manipulez des souris de sexes ou de génotypes différents, utilisez des pinces à reliure à code couleur pour les identifier et les distinguer. Placez six souris immobilisées dans la tour d’exposition du nez du système. Amorcez le flux de polarisation à deux litres par minute avec de l’air ambiant pour assurer un flux d’air suffisant à travers la chambre. Dans le docker de tâche, faites un clic droit sur le profil d’e-cigarette créé et sélectionnez les propriétés de la tâche. Sous la fréquence des bouffées, entrez l’intervalle de bouffées souhaité, par exemple 30 secondes pour un régime de deux bouffées par minute. Cliquez sur OK lorsque vous êtes invité à confirmer les modifications. Suivez les instructions à la fin de la séance pour enregistrer le régime de bouffées comme modèle pour une utilisation future. Lorsque vous êtes prêt à commencer l’exposition, double-cliquez sur le profil de l’e-cigarette modifié pour le démarrer. Démarrez simultanément une minuterie pour suivre la durée d’exposition. Testez l’intensité variable en maintenant une exposition de 10 minutes et en augmentant la fréquence des bouffées à une, deux et quatre bouffées par minute. Une fois l’exposition terminée, redémarrez le flux de polarisation avec de l’air ambiant. Pour libérer les animaux des entraves, retirez d’abord la pince à reliure. Rétractez complètement le treillis vers le piston et laissez l’animal sortir de la contention par lui-même. Si nécessaire, tirez doucement sur la queue pour encourager le mouvement vers l’arrière. Les concentrations sériques de THC-COOH ont considérablement augmenté en fonction du temps avec 10, 20 et 30 minutes d’exposition à la vapeur de THC à raison d’une bouffée par minute. L’augmentation de la fréquence des bouffées pendant une exposition de 10 minutes a entraîné une augmentation dose-dépendante des taux sériques de THC-COOH pour une, deux et quatre bouffées par minute. Les souris exposées à la vapeur de THC pendant 10 minutes à raison de deux bouffées par minute et de quatre bouffées par minute ont présenté une hypolocomotion significative, la distance parcourue étant réduite à 0,29 et 0,05 mètre respectivement.