Transplantation orthotopique du poumon gauche chez le rat

Mes recherches ont porté sur le développement d’un modèle standardisé et reproductible de transplantation du poumon gauche afin d’étudier les complications post-greffe, en particulier le rejet chronique, et de mieux comprendre le mécanisme à l’origine de l’échec à long terme de la greffe. Notre protocole offre une courbe d’apprentissage plus courte, une capacité opérationnelle unique et une reproductibilité supérieure par rapport aux techniques existantes. Notre modèle standardisé de transplantation pulmonaire directe fournit une plate-forme fiable pour étudier les complications après une transplantation pulmonaire et peut accélérer la recherche translationnelle pour améliorer la survie des greffons.

À l’avenir, notre laboratoire se concentrera sur l’étude du rejet chronique après une transplantation pulmonaire afin d’améliorer le taux de survie à long terme des receveurs de greffe pulmonaire. Pour commencer, procurez-vous des cathéters et des lames intraveineuses de calibre 14 et 16. Coupez les cathéters en un brassard avec une queue avec une lame.

Divisez ensuite chaque brassard en un corps et une queue, chacun d’environ deux à trois millimètres de long. À l’aide d’un scalpel, créez des égratignures superficielles sur le corps du brassard pour augmenter la friction pour la fixation de la suture. Pour prélever le poumon du donneur, rétractez la langue d’un rat anesthésié vers l’extérieur et vers le haut à l’aide d’une pince.

Placez une lampe chirurgicale à l’avant du cou pour éclairer clairement l’ouverture de la glotte. Maintenant, insérez une canule intraveineuse de calibre 14 dans les voies respiratoires à travers la glotte. Réglez le ventilateur en mode contrôlé par pression.

Ensuite, entrez les paramètres de poids, ajustez la pression à 15 centimètres d’eau et connectez le ventilateur. Observez la montée et la descente de la poitrine pour assurer la synchronisation avec la fréquence du ventilateur. Ensuite, fixez les membres et la tête à l’aide de ruban adhésif ou de contraintes.

Faites une incision médiane le long de la paroi abdominale. Injectez de l’héparine à travers la veine péritonéale exposée, puis laissez la circulation systémique pendant trois minutes pour assurer une héparinisation complète. Coupez le diaphragme et ouvrez la cavité thoracique à partir de la ligne médiane du sternum.

Ensuite, fixez la paroi thoracique des deux côtés avec des hémostatiques. Retirez le thymus pour exposer les organes de la cavité thoracique. Séquentiellement, coupez la veine cave supérieure, la veine cave inférieure et les auricules gauche et droit.

Maintenant, injectez une solution saline froide dans la racine de l’artère pulmonaire à l’aide d’une seringue de 20 millilitres pendant une minute pour une perfusion à basse pression jusqu’à ce que le poumon du donneur devienne complètement blanc. Coupez les tissus reliant le poumon du donneur et extrayez le cœur et le poumon du donneur en bloc. Faites tremper le bloc cœur-poumon du donneur dans une solution saline pré-refroidie.

Placez le bloc cœur-poumon sur de la glace à l’aide d’un microscope. Saisissez la trachée avec un hémostatique et fixez-la dans de la pâte à modeler. Couvrez les poumons avec du papier pour lentille stérile humide.

Maintenant, utilisez des pinces pour séparer l’artère pulmonaire, les bronches et la veine pulmonaire au microscope. Lister la bronche près du poumon à l’aide de sutures chirurgicales 6-0. Utilisez des ciseaux à ressort pour couper l’artère pulmonaire, les bronches et la veine pulmonaire.

Extrayez l’artère pulmonaire, les bronches et la veine pulmonaire des brassards respectifs fabriqués à partir de cathéters d’indentation de calibre 16, 14 et 16. Fixez les parois du tube au brassard avec 8-0 sutures chirurgicales. Conservez les poumons du donneur dans une solution saline et remettez-les sur de la glace jusqu’à l’implantation.

Épiler la région thoraco-dorsale gauche de l’animal receveur. Positionnez l’animal dans la posture de décubitus latéral droit sur une table d’opération thermostatique. Maintenant, faites une incision à travers la peau et la paroi thoracique au point de l’impulsion apicale dans le quatrième espace intercostal pour accéder à la cavité thoracique.

Utilisez un écarteur de paupière pour ouvrir la cavité thoracique. Ensuite, poussez doucement le poumon gauche de côté à l’aide d’un coton-tige humide pour exposer et transecter brusquement le ligament pulmonaire inférieur. Ensuite, saisissez le poumon gauche avec une pince et rétractez-le à l’extérieur de la cavité thoracique.

Fixez le hile avec un hémostat, puis stabilisez-le avec de la pâte à modeler. Maintenant, disséquez le hile pulmonaire pour séparer l’artère pulmonaire, la veine pulmonaire et les bronches. Clamp les extrémités proximales de l’artère pulmonaire, de la veine pulmonaire et des bronches à l’aide de clamps vasculaires.

Pré-attachez l’artère pulmonaire, les bronches et la veine pulmonaire du receveur avec 8-0 sutures chirurgicales pour l’anastomose rapide. Coupez une plate-forme sur le poumon gauche clampé du receveur pour faciliter la mise en place du poumon du donneur. Faites de petites incisions aux extrémités distales de l’artère pulmonaire, de la veine pulmonaire et des bronches.

Rincez l’artère pulmonaire et la veine pulmonaire avec une solution saline héparinée pour éviter la formation de caillots. Ensuite, prenez le poumon du donneur de la glace et placez-le sur la plate-forme préparée du poumon gauche du receveur. À l’aide d’une pince, soulevez un côté de l’ouverture coupée, puis implantez et ligaturez séquentiellement les brassards de l’artère pulmonaire, de la veine pulmonaire et de la bronche chez le receveur.

Ouvrez le clip micro-hémostatique et observez le poumon du donneur passer du blanc au rouge. Inspectez les sites anastomotiques pour tout signe de saignement. Maintenant, retirez le poumon gauche du receveur et renvoyez le poumon du donneur dans la cavité thoracique.

Essuyez la cavité thoracique avec un coton stérile. Ensuite, fermez la cavité thoracique couche par couche. Attendez la récupération respiratoire spontanée avant de retirer le ventilateur.

Au bout d’une heure, les destinataires étaient libres de manger. Six mois après la transplantation, l’imagerie par tomodensitométrie a montré que la ventilation des poumons transplantés était comparable à celle du groupe fictif, indiquant une fonction pulmonaire préservée. L’aspect macroscopique des poumons ne différait pas visiblement entre les groupes simulés et transplantés, ne montrant aucun signe de détérioration ou d’anomalie.

La coloration à l’hématoxyline et à l’éosine des tissus pulmonaires n’a révélé aucun changement pathologique significatif dans les poumons transplantés par rapport au groupe placebo, avec des structures alvéolaires préservées et une absence d’infiltration inflammatoire.