Name: Établissement de modèles in vitro de culture de ganglions de la racine dorsale : approches complémentaires pour l’étude de la diaphonie cancéreux-nerf (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:10:00.000+00:00
Duration: 11 min 26 s
Description: Apprenez à établir des cultures complémentaires 3D et 2D de ganglions de la racine dorsale chez la souris pour étudier la diaphonie cancéreux-nerf. Cette méthode permet d'analyser l'invasion tumorale guidée par les neurites.

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<ol><li>Thiel, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+single+neurons+reprogrammed+by+pancreatic+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Characterization of single neurons reprogrammed by pancreatic cancer.</a> Nature. 640 (8060), 1042-1051 (2025).</li>
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<li>Zareba, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+and+risk+of+lethal+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Epidemiol+Biomarkers+Prev%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion and risk of lethal prostate cancer.</a> Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 26 (5), 719-726 (2017).</li>
<li>Fu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Worst+pattern+of+perineural+invasion+redefines+the+spatial+localization+of+nerves+in+oral+squamous+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Oncol%22%5BJournal%5D)">Worst pattern of perineural invasion redefines the spatial localization of nerves in oral squamous cell carcinoma.</a> Front Oncol. 11 (766902), (2021).</li>
<li>Hu, J., Chen, W., Shen, L., Chen, Z., Huang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crosstalk+between+the+peripheral+nervous+system+and+breast+cancer+influences+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Rev+Cancer%22%5BJournal%5D)">Crosstalk between the peripheral nervous system and breast cancer influences tumor progression.</a> Biochim Biophys Acta Rev Cancer. 1877 (6), 188828(2022).</li>
<li>Li, J., Mei, S., Zhou, S., Zhao, F., Liu, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perineural+invasion+is+a+prognostic+factor+in+stage+ii+colorectal+cancer+but+not+a+treatment+indicator+for+traditional+chemotherapy%3A+A+retrospective+cohort+study%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastrointest+Oncol%22%5BJournal%5D)">Perineural invasion is a prognostic factor in stage ii colorectal cancer but not a treatment indicator for traditional chemotherapy: A retrospective cohort study.</a> J Gastrointest Oncol. 13 (2), 710-721 (2022).</li>
<li>Schmitd, L. B., Perez-Pacheco, C., D'silva, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+density+in+cancer%3A+Less+is+better%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Bioadv%22%5BJournal%5D)">Nerve density in cancer: Less is better.</a> FASEB Bioadv. 3 (10), 773-786 (2021).</li>
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<li>Lin, Y. -T., Chen, J. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+root+ganglia+isolation+and+primary+culture+to+study+neurotransmitter+release%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Dorsal root ganglia isolation and primary culture to study neurotransmitter release.</a> J Vis Exp. (140), e57569(2018).</li>
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<li>Melli, G., Höke, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+root+ganglia+sensory+neuronal+cultures%3A+A+tool+for+drug+discovery+for+peripheral+neuropathies%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin+Drug+Discov%22%5BJournal%5D)">Dorsal root ganglia sensory neuronal cultures: A tool for drug discovery for peripheral neuropathies.</a> Expert Opin Drug Discov. 4 (10), 1035-1045 (2009).</li>
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<li>Mo, Y. J., Kim, Y. -S., Kim, M. S., Lee, Y. -I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advantages+of+adult+mouse+dorsal+root+ganglia+explant+culture+in+investigating+myelination+in+an+inherited+neuropathic+mice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Protoc%22%5BJournal%5D)">Advantages of adult mouse dorsal root ganglia explant culture in investigating myelination in an inherited neuropathic mice model.</a> Methods Protoc. 5 (4), 66(2022).</li>
<li>Nguyen, U. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+i+collagen+concentration+affects+neurite+outgrowth+of+adult+rat+drg+explants+by+altering+mechanical+properties+of+hydrogels%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biomater+Sci+Polym+Ed%22%5BJournal%5D)">Type i collagen concentration affects neurite outgrowth of adult rat drg explants by altering mechanical properties of hydrogels.</a> J Biomater Sci Polym Ed. 35 (2), 164-189 (2024).</li>
<li>Ito, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histological+effects+of+combined+therapy+involving+scar+resection%2C+decellularized+scaffolds%2C+and+human+ipsc-ns%2Fpcs+transplantation+in+chronic+complete+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+Rep%22%5BJournal%5D)">Histological effects of combined therapy involving scar resection, decellularized scaffolds, and human ipsc-ns/pcs transplantation in chronic complete spinal cord injury.</a> Sci Rep. 14 (1), (2024).</li>
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<li>Bunge, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expanding+roles+for+the+schwann+cell%3A+Ensheathment%2C+myelination%2C+trophism+and+regeneration+-+pubmed%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Expanding roles for the schwann cell: Ensheathment, myelination, trophism and regeneration - pubmed.</a> Curr Opin Neurobiol. 3 (5), 805-809 (1993).</li>
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<li>Hanani, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+changes+in+neurons+and+satellite+glial+cells+in+mouse+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Age-related changes in neurons and satellite glial cells in mouse dorsal root ganglia.</a> Int J Mol Sci. 24 (3), 2677(2023).</li>
<li>Martinelli, C., Sartori, P., Ledda, M., Pannese, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age-related+quantitative+changes+in+mitochondria+of+satellite+cell+sheaths+enveloping+spinal+ganglion+neurons+in+the+rabbit%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res+Bull%22%5BJournal%5D)">Age-related quantitative changes in mitochondria of satellite cell sheaths enveloping spinal ganglion neurons in the rabbit.</a> Brain Res Bull. 61 (2), 147-151 (2003).</li>
<li>Niwa, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+age-dependent+trophic+responses+of+nodose%2C+sensory%2C+and+sympathetic+neurons+to+neurotrophins+and+gdnf%3A+Potencies+for+neurite+extension+in+explant+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Neurochem+Res%22%5BJournal%5D)">Differential age-dependent trophic responses of nodose, sensory, and sympathetic neurons to neurotrophins and gdnf: Potencies for neurite extension in explant culture.</a> Neurochem Res. 27 (6), 485-496 (2002).</li>
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<li>Podratz, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurotoxicity+to+drg+neurons+varies+between+rodent+strains+treated+with+cisplatin+and+bortezomib%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurol+Sci%22%5BJournal%5D)">Neurotoxicity to drg neurons varies between rodent strains treated with cisplatin and bortezomib.</a> J Neurol Sci. 362, 131-135 (2015).</li>
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<li>Monje, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Roadmap+for+the+emerging+field+of+cancer+neuroscience%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Roadmap for the emerging field of cancer neuroscience.</a> Cell. 181 (2), 219-222 (2020).</li>
<li>Silverman, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer-associated+neurogenesis+and+nerve-cancer+cross-talk%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Cancer-associated neurogenesis and nerve-cancer cross-talk.</a> Cancer Res. 81 (6), 1431-1440 (2021).</li>
<li>Vermeer, P. D., Restaino, A. C., Barr, J. L., Yaniv, D., Amit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerves+at+play%3A+The+peripheral+nervous+system+in+extracranial+malignancies%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Discov%22%5BJournal%5D)">Nerves at play: The peripheral nervous system in extracranial malignancies.</a> Cancer Discov. 15 (1), 52-68 (2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td><fort>Outils</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>70 et micro ; m Crépine de cellule</td><td>Progène</td><td>71-229483-ULT</td><td>Utilisé pour la suspension de cellules filtrantes</td></tr><tr><td>Glissières à fond en verre à 8 puits</td><td>IBidi, Munich, Allemagne</td><td>80807</td><td></td></tr><tr><td>Dumont #5 - Pince fine</td><td>Fine Science Tools, Foster City, États-Unis</td><td>11254-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pince Dumont #5</td><td>Fine Science Tools, Foster City, États-Unis</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux fins</td><td>Fine Science Tools, Foster City, États-Unis</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pince à motif</td><td>Fine Science Tools, Foster City, États-Unis</td><td>91121-12</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ciseaux à ressort</td><td>Fine Science Tools, Foster City, États-Unis</td><td>91500-09</td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><fort>réactifs</fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>1x solution saline tamponnée au phosphate</td><td>Sigma, St. Louis, États-Unis</td><td>D8662-500ML</td><td>Utilisé pour dissoudre les enzymes</td></tr><tr><td>Supplément B-27 (50x)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>17504044</td><td>Utilisé à une concentration de 2 % dans les milieux F12</td></tr><tr><td>Collagène bovin de type I</td><td>Corning Incorporated, New York, États-Unis</td><td>354231</td><td>Utilisé pour le revêtement des plaques, solution de travail 50 & micro ; g/mL dans 0,01 M HCl</td></tr><tr><td>Collagénase de type IV</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>C4-BIOC</td><td>Dissoudre dans le PBS à 1,25 mg/mL, aliquoter, conserver à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Dispase II</td><td>Roche, Bâle, Suisse</td><td>4942078001</td><td>Dissoudre dans le PBS à 2,5 mg/mL, aliquoter, conserver à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Roche, Bâle, Suisse.</td><td>11284932001</td><td>Ajouté à la concentration finale de&nbsp ; 0,2 mg/mL lors de la dissociation</td></tr><tr><td>Sérum fœtal bovin (FBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>F1051</td><td>Utilisé à une concentration de 10 % dans les milieux F12</td></tr><tr><td>HBSS (solution saline équilibrée de Hank)</td><td>Sigma, St. Louis, États-Unis</td><td>H6648-500ML</td><td>Préparé avec 1 % de pénicilline-streptomycine</td></tr><tr><td>Facteur de croissance du matrigel réduit</td><td>Corning Incorporated, New York, États-Unis</td><td>356231</td><td>Décongeler à 4 &deg ; C toute la nuit, garder sur la glace</td></tr><tr><td>Mélange nutritif F-12 Jambon</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>N6658-500ML</td><td>Milieu de base pour la préparation de milieux de culture supplémentés</td></tr><tr><td>Papaïne</td><td>Roche, Bâle, Suisse.</td><td>10108014001</td><td>Dissoudre dans du PBS à 30 U/mL, aliquote, stocker à -20 &deg ; C</td></tr><tr><td>Pénicilline-streptomycine (100x)</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>P4333-100ML</td><td>Utilisé à une concentration de 1 % dans les milieux</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>Réf. T8154-100ML</td><td>Évaluer la viabilité cellulaire</td></tr><tr><td>TrypLE Express</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>12605-028</td><td>Pour la récolte de cellules cancéreuses</td></tr><tr><td><fort>Anticorps </fort></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anticorps anti-tubuline III</td><td>Abcam (Cambridge, Royaume-Uni)</td><td>AB15568</td><td>Dilution 1:200</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>A-11008</td><td>Dilution 1:2000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>A-21442</td><td>Dilution 1:2000</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>A-21245</td><td>Dilution 1:2000</td></tr><tr><td>Anticorps NeuN</td><td>Sigma-Aldrich, Saint-Louis, États-Unis</td><td>MAB377</td><td>Dilution 1:100</td></tr><tr><td><fort>Colorants fluorescents & Sondes </fortes></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Réactif ActinGreen 488 ReadyProbes (Phalloïdine)</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>Réf. R37110</td><td>Dilution 1:40</td></tr><tr><td>CellTrace Calcein Rouge-Orange</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>Réf. C34851</td><td>Traqueur cellulaire utilisé pour visualiser les neurones au microscope à fluorescence</td></tr><tr><td>Hoechst 33342</td><td>Thermo Fisher Scientific, Massachusetts, États-Unis</td><td>N° H3570</td><td>Dilution 1:5000</td></tr></tbody></table>

Établissement de modèles in vitro de culture de ganglions de la racine dorsale : approches complémentaires pour l’étude de la diaphonie cancéreux-nerf

Establishing In Vitro Models of Dorsal Root Ganglia Culture: Complementary Approaches for Investigating Cancer-Nerve Crosstalk

Notre protocole décrit l’isolement de cellules primaires dérivées de DRG de souris et l’établissement de deux modèles de culture complémentaires : les cultures DRG dissociées et les cultures DRG entières, qui nous permettent d’étudier les interactions nerf-cellule cancéreuse à différents niveaux de complexité. L’un des principaux avantages de ce protocole est que les deux types de culture peuvent être générés à l’aide de DRG isolés du même animal, ce qui minimise la variabilité inter-anim...

The contribution of the nervous system to the tumor microenvironment and the importance of neural invasion as a route for cancer dissemination are being ...

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Dans cette vidéo, nous démontrons la procédure de développement d’un modèle d’invasion de cellules cancéreuses périneurales in vitro en co-cultivant des cellules cancéreuses de la racine dorsale de souris et des cellules cancéreuses neurotropes. Le modèle peut être utilisé pour effectuer des tests de cancer, produisant des résultats rapides et reproductibles.

Établissement d’un modèle de co-culture tridimensionnelle de ganglions de la racine dorsale murine et de cellules cancéreuses : un modèle in vitro pour étudier l’invasion des cellules cancéreuses périneurales

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode in vitro de co-culture de cellules DRG et cancéreuses pour étudier le neurotropisme et l’invasion neuronale.

Modélisation de l’invasion neuronale cancéreuse in vitro : une méthode de co-culture de ganglions de la racine dorsale et de cellules cancéreuses

Les astrocytes phénotypiquement sauvages et les cellules souches neurales récoltées sur des souris modifiées avec des allèles oncogéniques conditionnels floxés et transformés par recombinaison virale médiée par Cre peuvent être utilisés pour modéliser la pathogenèse de l’astrocytome in vitro et in vivo par injection orthotopique de cellules transformées dans le cerveau de compagnons de portée syngéniques et immunocompétents.

Modélisation astrocytome pathogenèse In Vitro Et In Vivo Utilisation corticale astrocytes ou cellules souches neurales à partir de, souris génétiquement modifiées conditionnelle

modèles de culture cellulaire fournissent un contrôle détaillé sur les conditions environnementales et fournissent ainsi une plate-forme puissante pour élucider de nombreux aspects de la biologie des cellules neuronales. Nous décrivons un procédé rapide, peu coûteux et fiable afin d'isoler, de dissocier et de la culture des neurones sensoriels de l'embryon de poulet. Détails de la préparation des substrats et immunocytochimie sont également fournis.

Isolement et culture de dissocié neurones sensoriels De embryons de poulet

Ganglions de la racine dorsale (DRG) sont des structures contenant les neurones sensoriels du système nerveux périphérique. Lorsqu'ils sont dissociés, ils peuvent être co-cultivées avec des cellules souches du tissu adipeux SC-like (ASC), fournissant un modèle précieux pour étudier in vitro la régénération nerveuse et la myélinisation, imitant l'environnement in vivo au site de la lésion.

Les ganglions rachidiens neurones et les cellules souches différenciées dérivées de tissu adipeux: Un<em&gt; In Vitro</em&gt; Co-culture modèle pour étudier la régénération des nerfs périphériques

Cet article vidéo montre l’utilisation du modèle de cellules cancéreuses et ganglions de la racine dorsale (DRG)/cancer dans l’adénocarcinome canalaire pancréatique.

In Vitro Modélisation de Cancerous Neural Invasion: Le ganglion de racine dorsale Modèle

L'invasion perineural est un phénotype agressif pour les carcinomes squamous de tête et de cou de cellules et d'autres tumeurs. Le modèle de membrane chorioallantoic de poussin a été employé pour étudier l'angiogenèse, l'invasion de cancer, et la métastasie. Ici nous démontrons comment ce modèle peut être utilisé pour évaluer l'invasion perineural in vivo.

Le modèle Chick Chorioallantoic Membrane In Vivo pour évaluer l'invasion périnéale dans le cancer de la tête et du cou

Dans le système de coculture des ganglions de la racine dorsale et des cellules de Schwann, la myélinisation du système nerveux périphérique peut être étudiée. Ce modèle offre des possibilités expérimentales d’observer et de quantifier la myélinisation périphérique et d’étudier les effets des composés d’intérêt sur la gaine de myéline.

Myélinisation in vitro d’axones périphériques dans une coculture d’explants de ganglions radiculaires dorsaux de rat et de cellules de Schwann

Nous avons développé une méthodologie pour évaluer si les néoplasmes du système nerveux chez les souris génétiquement modifiées récapitulent avec précision la pathologie de leurs homologues humains. Ici, nous appliquons ces techniques histologiques, des critères pathologiques définis et des méthodologies de culture aux neurofibromes et aux tumeurs malignes de la gaine nerveuse périphérique survenant dans le modèle murin P 0-GGFβ3.

Identification, diagnostic et classification des tumeurs malignes de la gaine des nerfs périphériques dans des modèles murins génétiquement modifiés

Ce protocole fournit une technique pour récolter et cultiver le ganglion de la racine dorsale (DRG) explanté de rats Sprague Dawley adultes dans un dispositif à compartiments multiples (MC).

Récolte, intégration et culture de ganglions de la racine dorsale dans des dispositifs à compartiments multiples pour étudier les caractéristiques neuronales périphériques

Apprenez à établir des cultures complémentaires 3D et 2D de ganglions de la racine dorsale chez la souris pour étudier la diaphonie cancéreux-nerf. Cette méthode permet d'analyser l'invasion tumorale guidée par les neurites.

Établissement de modèles in vitro de culture de ganglions de la racine dorsale : approches complémentaires pour l’étude de la diaphonie cancéreux-nerf (Vidéo) | JoVE Journal

Établissement de modèles in vitro de culture de ganglions de la racine dorsale : approches complémentaires pour l’étude de la diaphonie cancéreux-nerf

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