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DOI: 10.3791/68552-v
Larissa C. B. Oliveira1, Erica R. Pereira1,2, Brandy D. Hyndman1, Bryanna Thomson1, Juliana M. Serpeloni2, Lois M. Mulligan1
1Division of Cancer Biology and Genetics, Sinclair Cancer Research Institute, and Department of Pathology and Molecular Medicine,Queen's University, 2Laboratory of Mutagenesis and Oncogenetics, Department of General Biology - Center for Biological Science,State University of Londrina
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Ce protocole décrit les méthodes d’établissement de cultures entières et dissociées de ganglions de la racine dorsale (DRG) de souris et leur utilisation pour évaluer les interactions tumeur-nerf.
Notre recherche se concentre sur l’diaphonie cancéreux-nerfs, en utilisant des explants 3D de ganglions de la racine dorsale ou DRG et des cultures dissociées en 2D pour quantifier la migration tumorale neuroguidée et tester des stratégies moléculaires pour limiter leur interaction. Avec ce protocole, nous avons établi des cultures DRG 3D et 2D complémentaires, optimisé la croissance des neurites et démontré une augmentation de l’invasion des cellules cancéreuses le long des extensions des neurites. Nous avons remédié au manque de modèles reproductibles qui capturent à la fois des interactions complexes au niveau cellulaire et une architecture nerveuse intacte en créant des cultures DRG 2D et 3D complémentaires à partir d’une seule souris.
Notre protocole produit des explants 3D appariés et des cultures de neurones 2D à partir d’une seule souris, préservant ainsi la texture angulaire, permettant une imagerie à haut contenu, réduisant l’utilisation d’animaux et nous permettant d’obtenir des données au niveau des tissus et des cellules uniques en une seule expérience. Notre modèle a soulevé des questions sur les facteurs créés par DRG à l’origine de l’invasion, sur la façon dont l’activité neuronale, l’âge et le génotype la façonnent, et sur la question de savoir si le ciblage des récepteurs des facteurs neurotrophiques pouvait réduire la propagation du cancer guidé par les neurites. Pour commencer, posez une souris euthanasiée sur son abdomen.
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