Évaluation Doppler par onde pulsée de la dysfonction diastolique dans le modèle ZSF-1 Rat de l’hypertension pulmonaire due à une maladie cardiaque gauche

Nos recherches portent sur l’insuffisance cardiaque avec une fraction d’éjection préservée et les différences significatives entre les sexes que la maladie manifeste. La dysfonction diastolique est une caractéristique de la HFpEF avec des indices qui peuvent être évalués par échographie Doppler sans échocardiographie 2D, qui est coûteuse et nécessite un équipement sophistiqué. Pour commencer, allumez la tablette connectée au pad de traçage ECG.

Sélectionnez le moniteur RS parmi les applications disponibles. Puis activez le pad ECG en appuyant sur le bouton rond à l’avant. Appuyez sur les paramètres dans le coin inférieur droit de l’interface utilisateur.

Sélectionnez les préréglages dans le menu des paramètres expérimentaux. Tapez sur le menu déroulant sous préréglages sauvegardés, puis choisissez Rat CV et cliquez sur OK en bas à droite. Ensuite, nettoyez le tampon ECG avec de l’alcool éthylique à 70 % pour éliminer tout résidu de gel ECG.

Obtenez un gel d’électrodes hautement conducteur pour l’électrocardiogramme et un gel hydrosoluble hypoallergénique pour le Doppler. Placez l’animal anesthésié en position couchée sur le coussinet ECG non invasif, le nez étant positionné dans le cône nasal de taille appropriée avec une sortie de vaporisateur réglée à 1,5 à 2 %. À l’aide d’un applicateur à pointe de coton, appliquez une petite quantité de gel d’électrodes sur la face dorsale des quatre pattes et sur le côté plantaire des pattes postérieures. Fixez les pattes avec du ruban adhésif sur la surface de contact de l’électrode du coussinet ECG, en assurant un contact suffisant entre le gel et le coussinet.

Ensuite, utilisez une crème dépilatoire douce pour enlever les poils de la poitrine et de l’abdomen. Essuyez toute crème résiduelle pour éviter les irritations cutanées. Assurez-vous que la ligne de base isoélectrique ainsi que les formes P, QRS et T sont clairement affichées sur l’écran de l’ordinateur.

Créez un nouveau dossier identifiant l’animal et les données d’intérêt. Allumez le dispositif d’émette-récepteur Doppler à impulsions à l’aide des interrupteurs d’alimentation à l’avant et à l’arrière de la grande boîte bleue. Ensuite, active le processeur de signal Doppler.

Ensuite, ouvrez le logiciel de station de travail de traitement du signal Doppler. Cliquez sur Configurer et sélectionnez Configuration système. Sélectionnez la fréquence de sonde de 20 mégahertz pour l’expérience.

Branchez la sonde de 20 mégahertz lors de l’enquête sur un jeune rat ou une souris. Utilisez une sonde de 10 mégahertz pour les rats plus âgés, plus grands ou obèses. Si les deux sondes sont connectées, utilisez l’interrupteur à bascule à l’avant du module émette-récepteur pour passer d’une fréquence à l’autre selon les besoins.

Assurez-vous que le transducteur sonde portatif est connecté à la prise du canal A ou B du module émetteur. Sélectionnez le canal correspondant pour faire fonctionner la sonde portatif. Réglez l’interrupteur de direction sur TWD pour afficher le débit vers la sonde au-dessus de la ligne de base de débit nul.

Ensuite, ajustez la plage à 2,5 à 3,5 millimètres pour les souris ou quatre à six millimètres pour les rats. Régler le filtre à 15 pour lisser la sortie de vitesse phasique vers un signal amorti. Appuyez sur go en haut à gauche de l’interface utilisateur.

Dans la fenêtre contextuelle, saisissez les informations pertinentes sur l’acquisition, y compris le type d’animal, le sexe, la date de naissance, l’âge à la date d’acquisition et le poids. Sélectionnez le dossier pré-créé souhaité dans le menu déroulant du répertoire et cliquez sur OK. Ajustez la ligne de base de l’ECG en faisant monter ou descendre la barre d’échelle de l’axe jusqu’à ce que les ondes R soient clairement visibles. Pour effectuer des mesures Doppler, appliquez d’abord une petite quantité de gel à ultrasons sur la région sous-sternale et épigastrique de la poitrine et de l’abdomen de l’animal anesthésié.

Placez la sonde Doppler sur la ligne médiane sous le diaphragme juste sous le sternum, la tête pointant le céphale vers l’oreille gauche de l’animal. Scannez lentement le flux sanguin en déplaçant la sonde en petits mouvements circulaires avec un rayon croissant. Maintenez une pression douce de la sonde contre la peau sous le diaphragme en permanence.

Si le flux mitral n’est pas détecté, ajustez la molette de portée par incréments de 0,5 millimètre jusqu’à ce que la forme d’onde transmettrice soit identifiée. Assurez-vous que la forme d’onde Doppler et l’électrocardiogramme sont affichées simultanément à l’écran. Créez des instantanés à l’aide de la pédale une fois le bon débit identifié, puis répétez jusqu’à obtenir une qualité optimale des données.

Arrêtez l’acquisition de données en cliquant sur arrêter lorsque vous êtes satisfait de la qualité des données. Cliquez sur Fichier et sélectionnez Ouvrir dans le menu déroulant. Choisissez le fichier de données de la plus haute qualité dans le dossier précréé pour analyse.

Appuyez sur Analyse puis sur Mode Analyse. Choisissez la deuxième étape, la configuration générale et réglez le type de données sur Doppler. Ensuite, réglez le signal sur l’entrée mitrale.

Sélectionnez le modèle animal approprié et sélectionnez tous les noms de mesure sous les noms de mesure par défaut. Sélectionnez l’étape cinq, l’éditeur R-peak dans le menu déroulant des contrôles d’analyse. Activez les marqueurs de battement et de pic R et cliquez sur calcul automatique.

Ensuite, choisissez l’étape six, l’éditeur de beats dans le menu déroulant des contrôles d’analyse. Activez les marqueurs de temps d’affichage et de pic R et cliquez sur sélectionner tous les temps. Ensuite, choisissez l’étape sept, éditeur de marqueurs.

Cliquez sur marqueurs d’analyse d’affichage et choisissez le paramètre souhaité sous le marqueur actuel sélectionné. Assurez-vous que les paramètres donnés sont disponibles pour assurer l’exhaustivité des données. Sélectionnez l’étape huit, résultats de la mesure.

Cliquez sur copier les résultats dans le presse-papiers pour copier les données dans un fichier Excel et les enregistrer. Retirez le ruban des pattes de l’animal après avoir éteint le vaporisateur. Ensuite, retirez l’animal de la plaque électrode.

Nettoyez toute crème dépilatoire restante et gel électrode de l’animal. Ensuite, il remet l’animal dans sa cage avec un accès libre à l’eau et à la nourriture pour la récupération. Pour une évaluation la plus précise de la fonction diastolique, les schémas d’écoulement antérigrade et rétrograde liés à l’ouverture et à la fermeture de la valve mitrale et aortique doivent être visualisés au sein d’un même cycle cardiaque sur plusieurs cycles.

Plusieurs indices ont été déterminés à partir du schéma d’écoulement transmisseur biphasique, incluant le pic de remplissage précoce, le pic de contraction auriculaire, le rapport entre ces deux pics et le temps de décélération du pic de remplissage précoce. Le temps de relaxation isovolumique, ou IVRT, était un bon indicateur d’un dysfonctionnement diastolique chez les rongeurs. La TRIV a augmenté au fil du vieillissement dans le modèle ZS F1 de l’hypertension pulmonaire et de la maladie cardiaque gauche.

Ce changement pouvait être détecté dès l’âge de 16 semaines. Les rats mâles obèses âgés de 24 semaines ont montré une IVRT plus élevée comparée aux moments antérieurs dans les témoins maigres. Ce protocole permet à l’investigateur d’étudier les indices échocardiographiques établis de la HFpEF, y compris le rapport E/A, la IVT ou le temps de décélération des ondes E.

Cette technique ne permet pas de visualisation 2D du cœur, et certains marqueurs de la fonction diastolique dépendent de la charge, une condition difficile à contrôler. Il s’agit d’une technique peu coûteuse qui détecte de manière fiable la progression de la maladie dans le temps dans les maladies cardiopulmonaires qui manifestent un dysfonctionnement diastolique.