Name: In Vitro Analyse fonctionnelle des lymphocytes T régulateurs : accent sur la prolifération et la différenciation (Vidéo) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-06-09T14:05:00.000+00:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Découvrez une analyse fonctionnelle des cellules T régulatrices in vitro pour étudier la prolifération et la différenciation des lymphocytes T effecteurs chez la souris. Cette méthode permet d'évaluer la polarisation Th1 et Th17 par cytométrie en flux.

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<table><tbody><tr><td>1.5 mL centrifuge tube</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>3457IW</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>12.5 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420043</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>1250 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420813</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>15 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339650</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>200 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420318</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>48-well plates</td><td>Corning Incorporated</td><td>3548</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>5 mL syringe piston</td><td>Shifeng Medical</td><td>SB2-061(A)</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>50 mL Conical Centrifuge Tubes</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>339652</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>50 &mu;L Filtered Pipette Tips</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>94420258</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>70 &mu;m cell strainer</td><td>Biosharp Life Sciences</td><td>BS-70-CS</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD28 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0015-1</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD3 antibody</td><td>BioXcell</td><td>BE0001-1</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse CD4 PerCP-Cy5.5 (RM4-5)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>45-0042-82</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse Foxp3 PB (FJK-16s)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>48-5773-82</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse IFN-gamma PE (XMG1.2)</td><td>BioLegend</td><td>505808</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Anti-mouse IL-17A PE-Cy7 (eBio17B7)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-7177-82</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Beckman CytoFLEX S Flow Cytometer</td><td>Beckman Coulter</td><td>N/A</td><td>pour l'acquisition de données cytométriques en flux des échantillons de cellules immunitaires</td></tr><tr><td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2064</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>C57BL/6 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>SM-001</td><td>pour l'isolement des lymphocytes primaires et des sous-ensembles de cellules T</td></tr><tr><td>CD25 Monoclonal Antibody (PC61.5), PE</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-0251-83</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>CD4+CD25+ Regulatory T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-091-041</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>CD4+CD62L+ T Cell Isolation Kit, mouse</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-106-643</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>CD45.1 mice</td><td>Shanghai Model Organisms Center, Inc</td><td>NM-KI-210226</td><td>pour l'isolement des lymphocytes primaires et des sous-ensembles de cellules T</td></tr><tr><td>CD45.1 Monoclonal Antibody (A20), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0453-85</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>CD45.2 Monoclonal Antibody (104), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>47-0454-82</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>CD62L (L-Selectin) Monoclonal Antibody (MEL-14), FITC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11-0621-85</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td><td>BD Biosciences</td><td>554714</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>eBioscience Cell Proliferation Dye eFluor 450</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>65-0842-90</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>ethylenediamine tetraacetic acid (EDTA)</td><td>Solarbio Life Sciences</td><td>E1170</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A5669701</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>FlowJo 10.6.2</td><td>BD Biosciences</td><td>N/A</td><td>logiciel pour l'analyse des données de cytométrie en flux</td></tr><tr><td>Golgi-Plug Protein Transport Inhibitor</td><td>BD Biosciences</td><td>555029</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Human TGF-beta1</td><td>PEPROTECH</td><td>100-21C</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Ionomycin calcium salt</td><td>Millipore Sigma</td><td>I3909</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>LD Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-901</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>L-Glutamine (200 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25030081</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>LS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>MS Columns</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>OctoMACS Separators</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-109</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>PBS, pH 7.4</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>10010049</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>PE Rat IgG1, &kappa; Isotype Ctrl Antibody</td><td>BioLegend</td><td>400408</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>PE/Cyanine7 Rat IgG2a kappa Isotype Control Antibody</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25-4321-82</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15140122</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>PMA</td><td>Millipore Sigma</td><td>P8139</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Purified anti-mouse CD16/32 Antibody</td><td>BioLegend</td><td>101302</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>QuadroMACS Separator</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-090-976</td><td>pour le tri cellulaire</td></tr><tr><td>Recombinant mouse IL-12 p70</td><td>PEPROTECH</td><td>210-12</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Recombinant Mouse IL-6</td><td>R&amp;D Systems</td><td>406-ML</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Red Blood Cell Lysis Buffer (ACK Lysing Buffer)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A1049201</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>RPMI 1640 medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875093</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Sodium Pyruvate (100 mM)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>Trypan Blue Solution, 0.4%</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>ou équivalent</td></tr><tr><td>UltraComp eBeads Compensation Beads</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>01-2222

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Découvrez une analyse fonctionnelle des cellules T régulatrices in vitro pour étudier la prolifération et la différenciation des lymphocytes T effecteurs chez la souris. Cette méthode permet d'évaluer la polarisation Th1 et Th17 par cytométrie en flux.

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