Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
השערת הניסוי היא שבפרוסות קצות השורש שטופלו בנוקודזול, כימיקל המפריע לפילמור מיקרו-צינורי, כל התאים ייעצרו באותו שלב של מחזור התא וכי בפרוסות קצה בצל לא מטופלות יודגמו כל השלבים השונים של מחזור התא. השערת האפס היא שלא יהיו הבדלים במיטוזה בין שתי הקבוצות וכי יוצגו שלבים שונים במחזור התא. כדי להתכונן לניסוי זה תשתמשו בבצל שהונח במים במשך מספר ימים עד שהחלו לנבוט קצות שורש לבנים חדשים.
השתמש בסכין גילוח כדי לחתוך חתיכה של סנטימטר אחד מקצה אחד מקצות השורש. מניחים את פרוסת הבצל לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה המסומן N למצב הנוקודאזול. לאחר מכן חותכים חתיכה שנייה של סנטימטר אחד של קצה שורש בצל ומניחים בצינור מיקרוצנטריפוגה המסומן C למצב הבקרה.
הוסף שני מיקרוליטר של חמישה מיליגרם למיליליטר נוקודזול למיליליטר אחד של מים בצינור המיקרו-צנטריפוגה המסומן N ומיליליטר אחד של מים לצינור המסומן C. השאירו את הצינורות המכילים את קצות השורש לדגור למשך 12 שעות ונגבו את סביבת העבודה עם 70% אתנול. בסיום הדגירה הגדר גוש חום ל 60 מעלות צלזיוס. שטפו את הקצוות שטופלו בנוקודאזול במים ולאחר מכן שאפו את הנוזל.
חזור על שטיפה זו פעמיים בסך הכל שלוש כביסות. מלאו את שני הצינורות במיליליטר אחד של חומצה הידרוכלורית רגילה אחת. דגרו את הצינורות בבלוק חום של 60 מעלות צלזיוס למשך 12 עד 15 דקות, ואז השליכו את החומצה לבקבוק פסולת והוסיפו מיליליטר אחד של מים מזוקקים בחוכמה לצינורות לפחות שלוש פעמים כדי לשטוף את הדגימות.
כעת הוסף מיקרוליטר אחד של כתם DAPI ל-10 מיליליטר של מי מלח חוצץ פוספט. לאחר מכן הניחו 50 מיקרוליטר מכתם ה- DAPI המדולל לכל צינור והשאירו אותם בטמפרטורת החדר לדגירת למשך 12 דקות. לאחר מכן שלוש שטיפות מים מזוקקים כפי שהודגם זה עתה.
סמן שקופית מיקרוסקופ אחת כקונטרול ואחרת כ-Nocodazole. העבירו את השורשים המוכתמים לשקופיות המיקרוסקופ שלהם והוסיפו טיפת מים למגלשת הבקרה וטיפה של נוקודאזול למגלשת הנוקודאזול. השתמש בסכין הגילוח כדי להסיר את החלקים הלא מוכתמים של כל קצה שורש והנח פתק כיסוי זכוכית מעל כל דגימה.
לחץ בזהירות כלפי מטה על כל פתק כיסוי עם קצה אצבע עטוי כפפה ולאחר מכן תן לשקופיות לשבת במשך 10 דקות. לבסוף, צפה בשקופיות תחת המטרה פי 40 של מיקרוסקופ אור או פלואורסצנטי וצלם תמונות של תכשירי תאי קצה השורש שלך. לפני שתאים יכולים לעבור את כל שלבי מחזור התא ישנם מספר מחסומים שהם חייבים לעבור.
נקודות ביקורת אלה מוסדרות על ידי חלבוני קינאז תלויי ציקלין וציקלין, או CDKs. אם הציקלינים וה-CDKs יקבעו שאירועים תאיים קודמים לא הושלמו כראוי, הם יעצרו את התאים בשלב זה וימנעו מהם להתרבות. בתאי סרטן אחד או כמה מהמעצורים המולקולריים הללו לוויסות חלוקת התאים הולכים לאיבוד וזה מאפשר לתאים הפגועים לברוח מבקרת התפשטות התאים.
תאים חריגים אלה מתפתחים לגידולים שהם מסות של תאים מתרבים בלתי מבוקרים המפריעים לתפקוד התקין של הגוף. שימו לב כיצד לפני שהוא מתחלק התא הסרטני הזה מתעגל ושובר אור חזק מאוד תחת מיקרוסקופ האור. הסיבה לכך היא שלא כל תאי הסרטן מתחלקים בהצלחה לתאי בת לאחר כל סבב של מיטוזה.
משמעות הדבר היא שלעתים קרובות הם מכילים עודף של אברונים ו-DNA ועלייה זו בתכולת התאים פירושה שהם ישברו אור בעוצמה רבה יותר מאשר תאים רגילים. כעת, לאחר שכל הנתונים נאספו, בואו נסתכל על התוצאות שלנו. אילו מבני תאים ניתן לזהות בפרוסת קצה הבצל שטופלה בנוקודזול?
האם יש תאים שעוברים מיטוזה? אילו שלבים של חלוקת תאים אתם רואים? רשום את אחוז התאים בכל שלב של מיטוזה בטבלה.
לאחר מכן תסתכל על פרוסת קצה הבצל הלא מטופלת. אילו מבני תאים אתה יכול לזהות? האם יש תאים שעוברים מיטוזה?
אילו שלבים של חלוקת תאים אתם רואים? רשום את אחוזי התאים בכל שלב של מיטוזה בטבלה. שמתם לב שרוב התאים בפרוסת הבצל המטופלת בנוקודאזול נמצאים באותו שלב של מיטוזה עקב התכונות המשבשות של המיקרו-צינוריות של המגיב המונעות את היווצרות סיבי הציר והפרדת הכרומוזומים וחלוקת התאים לאחר מכן.
עם זאת, שלבים רבים ושונים של מיטוזה נראים בתאים של הפרוסה הלא מטופלת, שכן מיטוזה היא תהליך מתמשך באורגניזמים בריאים.
