זה מסמכים וידאו נפח קטן (~ 1 L) סינון של ביומסה של חיידקים מעמודת המים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
עבודה מתחיל עם איסוף המים ימית החוף למען הקהילה חיידקים במורד הזרם, מנתח גז מזין עקבות. לקבלת דוגמיות הפגנה של היום נאספו סיפון ההפעלה ג'ון סטריקלנד HMS ב Inlet Saanich. זה מסמכים וידאו נפח קטן (~ 1 L) סינון של ביומסה של חיידקים מעמודת המים. הפרוטוקול הוא הרחבה של פרוטוקול גדול הדגימה נפח שתוארו קודם לכן, עם הבדל אחד משמעותי: כאן, אין שום צעד סינון מראש, ולכן כל המעמדות גודל של ביומסה נאספים עד 0.22 מיקרומטר לסנן חתוכים. דוגמאות שנאספו בדרך זו הם אידיאליים עבור ניתוח חומצות גרעין. הצעדים הגדרת, סינון, ו לנקות כל אחד לקחת על 20-30 דקות. אם באמצעות שתי משאבות peristaltic בו זמנית, עד 8 דגימות ניתן לסנן באותו זמן. כדי למנוע היווצרות biofilm בין טיולים הדגימה, כל הציוד סינון חייב להיות שטוף עם HCl לדלל במים deionized ו autoclaved מיד לאחר השימוש.
פרוטוקול
- הגדרת מנגנון סינון
- לפני סינון, תחילה למחות כל התעבות של בקבוקים מלאים ולשקול אותם
- הצב בן החיטוי בצד אחד של המשאבה, ואת בקבוק פסולת מאידך.
- אז במקום בקבוק מלא מדגם לפח החיטוי, אך לא להסיר את מכסה הבקבוק עדיין.
- במעבר דרך צינור המשאבה peristaltic כך בסוף luer של צינורות נמצא הבקבוק.
- בעזרת פינצטה, להסיר את הכ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
זה הכרחי כדי לנגב את ספסלי משאבות במגבת לחה לאחר השימוש כדי להסיר כל עקבות המתמשכת של מי מלח שאחרת לשיתוק ציוד. למרות ההליך הוא פשוט, הדרישה זמן יכול להיות נרחב תלוי בריכוז של ביומסה או פסולת במדגם להיות מסונן.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
למחברים אין ניגודי עניינים להצהיר עליהם.
תודות
ברצוננו להודות לקרן קנדית עבור חדשנות, פיתוח קולומביה הבריטית קרן ידע מדעי הלאומי וההנדסה מועצת המחקר (NSERC) של קנדה לתמיכה מחקרים מתמשכים על אזורים חמצן נמוכה של מים חופי האוקיינוס הפתוח. דאו נתמכה על ידי מלגות של NSERC, Killam ויסוד טולה מרכז מימנה עבור גיוון התפתחות חיידקים.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| משאבה פריסטלטית | Masterflex (Cole Palmer) | 77913-20, 77200-62, 77200-04 | |
| צינור Tygon LFL | Masterflex (Cole Palmer) | 06429-24 | עבור התקן הסינון |
| מהבקי צינורות | Cole-Parmer | 0683204 | עבור התקן הסינון |
| מתאמי צינורות 1/4” x 3/16” | Cole-Parmer | 31702-20 | עבור התקן הסינון |
| בית למסנן קדם מפוליפרופילן | ADVANTEC | 501200 | עבור התקן הסינון |
| מחבר luer מתכתי (קצה צינור ל-Male luer lock) | Cole-Parmer | 31507-27 | עבור התקן הסינון |
| מגנטים בגודל 2“ | עבור התקן הסינון | ||
| פקקי carboy בעלי 3 פתחים | עבור התקן הסינון | ||
| מסנני GV 0.22 μm STERIVIX | EMD Millipore | SVGV01R5 | |
| מסנני GF/D בקושי 2.7 μm וקוטר 47 mm | Whatman, GE Healthcare | 1823047 | |
| בופר ליזיס | 0.75 M sucrose, 40 mM EDTA, 50 mM Tris (pH 8.3) | ||
| 0.1 % HCl | עבור שטיפה לאחר סינון | ||
| מים שעברו אותקלוו | עבור שטיפה לאחר סינון |
הדפסות חוזרות והרשאות
