בסרטון זה אנו מדגימים כיצד התווית לדמיין שלפוחית יחיד exocytosis הסינפטי וסחר רשתית דג זהב תאים דו קוטבית באמצעות הקרינה הכוללת פנימי ההחזרה (TIRF) מיקרוסקופיה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הדמיה Exocytosis בתאים עם הפרעה דו רשתית מיקרוסקופית TIRF
במאמר זה
סיכום
תקציר
החזר סך פנימית הקרינה (TIRF) מיקרוסקופיה היא טכניקה המאפשרת לימוד של אירועים קורה קרום התא, על ידי הדמיה סלקטיבית של מולקולות ניאון, כי הם הקרובים ביותר חומר המדד גבוה השבירה כגון זכוכית
פרוטוקול
חלק 1: Dissection ו-Cell בידוד דו קוטבית
- הכינו פתרונות המפורטים בטבלה 2, ה-pH של האצבעות "(חיצוני) הפתרונות צריכים להיות מותאמים 7.4 עם NaOH ו-pH של התמיסה הפנימית צריך להיות מותאם עם 7.2 CsOH. הגן על פתרון פנימי מן האור עם רדיד אלומיניום ולשמור על 4 מעלות צלזיוס עד לשימוש;
- Dark-להסתגל דג זהב במשך 30 דקות לפחות לפני החיתוך;
- בעוד החיה כהה מתאים, להכין 5 מ"ל של hyaluronidase (hyaluronidase סוג V, 1100 יחידות / מ"ל Ca נמוך 2 + הצלצו....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
היתרונות של מיקרוסקופיה TIRF אובייקטיבית מסוג הן כי 1) הוא מספק חתך אופטית מעולה ידי הגבלת אור עירור לאזור צר בתוך המטוס מוקד של המטרה, ובכך לצמצם out-of-להתמקד אור; 2) מאז אור טיפות אקספוננציאלית עם המרחק תנועה בכיוון אנכי ניתן לנטר כשינוי עוצמת הקרינה, 3) אוסף אור יעיל דרך אובייקטיבית הצמצם גבוה המספרי 1,5.
החיסרון העיקרי של השיטה הוא שהיא מוגבלת לאירועים הדמיה קורה בתוך & 100 ננומטר של תא השטח, וזה שווה בערך סעיף Ultrathin במיקרוסקופ אל.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט EY 14990.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מקורות
- Axelrod, D. Total internal reflection fluorescence microscopy in cell biology. Traffic. 2, 764-774 (2001).
- Zenisek, D., Steyer, J. A., Almers, W. Transport, capture and exocytosis of single synaptic vesicles at active zones. Nature. 406, 849-854 (2000).<....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
