השגת איכות גבוהה וכמות נאותה של איים האנושי הוא אחד התנאים המוקדמים הבולטים איון להשתלה מוצלחת. בסרטון הזה, אנו מתארים צעד אחר צעד את נוהלי בידוד איון הלבלב האנושי (חלק II: טיהור והתרבות של איים אדם) באמצעות שיטה אוטומטית שונה.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הלבלב האנושי בידוד איילט: חלק ב: טיהור והתרבות של איי האדם
במאמר זה
סיכום
תקציר
ניהול של סוכרת מסוג 1 היא מעיקה, הן הפרט והחברה, עולה מעל 100 מיליארד דולר בשנה. למרות השימוש הנרחב של ניטור גלוקוז אינסולין ניסוחים חדשים, אנשים רבים עדיין לפתח סיבוכים משניים הרסנית. איון השתלת הלבלב יכול לשחזר ליד בקרת גלוקוז נורמלי אצל חולי סוכרת
פרוטוקול
1. טיהור איים
- כדי להתחיל בהליך טיהור איון, עומס את התיק COBE, מהדק את כל הצינורות מלבד צינור ירוק, ולהגדיר את המהירות ל 1500 ואת סופר יצא 0.
- בשכונה להגדיר את כוסות המשאבה ואת שיפוע ולחבר את צינורות אוסף הצינור הירוק.
- עכשיו הטעינה של ficoll 1.100 יכולים להתחיל: לדחוף "ספין" ואז מוסיפים 110 מ"ל של Ficoll 1.100 אל כוס הקדמי, ולהתחיל את המשאבה על מנת לטעון את התיק COBE. ככל Ficoll נטען, לחצו סופר החוצה, לעצור את המשאבה, unclamp ראש משאבה ולהגדי....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
למרות התקדמות משמעותית בשיטות של בידוד איון אדם, תשואה איון להישאר משתנה מאוד ובלתי צפוי. טיהור של רקמת לבלב מתעכל הוא חיוני כדי להתאושש מסה האי מספיק לאחר עיכול אנזימטי מוצלח להשתלה. שיטת טיהור UIC מומלץ כי התאוששות מעולה של איים אדם טהור מאוד הודגם באמצעות שיטה זו. יתר על כן, עד 50 מ"ל של רקמת מעוכל יכול להיות טעון Cobe יחיד לרוץ לטיהור, ובכך לצמצם את איסכמיה הקשורים פציעה של איים אדם על ידי קיצור הזמן הכולל המשמש לבידוד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
נתמך על ידי המייסדים מאוניברסיטת אילינוי בשיקגו, כמו גם משאבים איילט Cell מרכז NIH מענק (RFA-RR 05-003), קרן כריסטופר, קרן Efroymson, וקרן Tellabs.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| צנטריפוגה | ציוד | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| מעבד תאים Cobe 2991 | ציוד | Gambro. BCT | 2556 | טיהור איים (Islet purification) |
| מיקרוסקופיה הפוכה MZ6 TLBD4.1 | ציוד | Leica Microsystems | 4103 | |
| צלחת לתרבית תאים עם רשת של 2 מ"מ | ציוד | Nalge Nunc international | 174926 | ספירת איי לבלב |
| Digital Sight DS L1 | ציוד | Nikon Instruments | 217267 | |
| שק COBE | ציוד חד-פעמי | תמיסת O.R. | 66707003 | |
| בקבוק תרבית T175 | ציוד חד-פעמי | Sarstedt Ltd | 83.1812.500 | |
| תמיסת אוניברסיטת ויסקונסין (UW) | ריאגנט | DURAMED | 1000-46-06 | |
| הנק (Hank)’תמיסב מלחים מאוזנת (HBSS) | ריאגנט | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Ficoll 1.100 | ריאגנט | Bichrom AG | L6155 | |
| מדיום M199 (תמיסת שטיפה) | ריאגנט | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| שטיפה סופית/מצע גידול | ריאגנט | Mediatech, Inc. | 99-785-CV | |
| דיתיזון | ריאגנט | Sigma-Aldrich | D5130 |
מקורות
- Shapiro, A. M. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R. ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
