Method Article

אבי העורקים Assay טבעת

DOI:

10.3791/1564

November 24th, 2009

In This Article

Summary

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנגיוגנזה, מצמיח כלי דם בכלי הדם קיימים, קשור גם בתהליכים טבעיים פתולוגי. כאן אנו מדגימים assay טבעת אבי העורקים המאפשר potentiators angiogenic ומעכבי להתווסף ישירות טבעות אבי העורקים בתרבות. להנבטה ו תולדה neovessel ניתן לקבוע באמצעות בדיקת מצלצל אבי העורקים על פני תקופה של 6-12 ימים.

Abstract

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנגיוגנזה, מצמיח כלי דם בכלי הדם preexisting קשורה בשני תהליכים טבעיים פתולוגי. מבחני אנגיוגנזה שונים לערב את המחקר בתאי האנדותל של הפרט בתנאים תרבות (1). Assay טבעת אבי העורקים הוא מודל אנגיוגנזה המבוסס על תרבות איברים. ב assay זה, כלי angiogenic לצמוח מתוך קטע של אבי העורקים (שונה מ - (2)). בקצרה, אבי העורקים החזי העכבר הוא נכרת, שכבת שומן adventitia מוסרים, וטבעות כ 1 מ"מ באורך מוכנים. טבעות אישיות המוטבעים אז בכיפה מוצק קטן של תמצית מרתף מטריקס (BME), יצוק בתוך בארות בודדים של צלחת 48-באר. גורמים angiogenic ו מעכבי אנגיוגנזה ניתן להוסיף ישירות את הטבעות, מעורבת שיתוף התרבות של טבעות אבי העורקים ואת סוגי תאים אחרים יכול להיות מועסק לחקר תופעות angiogenic אוטוקריני. להנבטה היא נצפתה על ידי בדיקה תחת stereomicroscope על פני תקופה של 6-12 ימים. בשל השונות הגדולה הנגרמת על ידי אי סדרים במגזרים אבי העורקים, ניסויים 6-plicates מומלץ בחום. תוצאה Neovessel מנוטר במהלך הניסוי צילמו באמצעות מיקרוסקופ שלב, ואת supernatants נאספים למדידת גורמים angiogenic ואנטי angiogenic רלוונטי, מוות של תאים סמנים הניטריט.

Protocol

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

יום אחד לפני הניסוי:

  1. אפשר BME (גורם גדילה מופחת, Cultrex, Trevigen) להפשיר על הקרח או על 4 מעלות צלזיוס; מופשר פעם לשמור על הקרח כדי למנוע מחדש לחיזוק.

יום של הניסוי:

  1. עכברים (6-7 שבועות) יש הרדים ודימם.
  2. אבי העורקים החזי הסר לתוך צלחת פטרי מלאות קר סטרילי PBS.
  3. בצע ניקוי מכני של ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Assay טבעת אבי העורקים הוא כלי מועיל בדרך להעריך angiogenic כמו גם נגד גורמים angiogenic. כלי שגדלים מתוך תאים טבעות אבי העורקים לגייס שרירים חלקים pericytes לקשר עם צינור תא האנדותל, כלומר שהם דומים מבחינה אנטומית neovessels in vivo. יתר על כן, אבי העורקים עכבר assay הטבעת מחזיקה את היתרון של מערך עצום של כלים מהונדס זמין עבור מין זה. עם זאת, יש כמה חסרונות ל assay את הטבעת אבי העורקים. ראשית, כלי תולדה in vivo מתרחשת מתוך microvessels ולא מכלי מרכזיים כגון אבי .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

References

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Goodwin, A. M. In vitro assays of angiogenesis for assessment of angiogenic and anti-angiogenic agents. Microvascular Research. 74, 172-183 (2007).
  2. Masson, V., Devy, L., Grignet-Debrus, C., Bernt, S., Bajou, K., Blacher, S., Roland, G., Chang, Y., Fong, T., Carmeliet, P., Foidart, J. M., Noel, A.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Aortic Ring AssayAngiogenesis ModelMouse AortaBasement Matrix ExtractVessel SproutingPhase MicroscopySterile Technique48 Well PlateAngiogenic FactorsSupernatant Collection

Related Articles