בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את התהליך של הפעלת-CD40 והרחבה של תאים B Murine מ splenocytes של C57BL / 6 עכברים, אשר יכול לשמש תא מודל אנטיגן מציג (APC) ללמוד אינדוקציה של חסינות.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
במאמר זה
סיכום
תקציר
המחקר על תאים B הוכיחו כי CD40 ההפעלה משפר את יכולת הצגת האנטיגן שלהן. כאשר מגורה עם interleukin-4 ו CD40 ליגנד (CD40L), תאים B האדם ניתן להרחיב ללא קשיים של כמויות קטנות של דם היקפיים בתוך 14 ימים על כמויות גדולות מאוד של הפערים טהור CD40-B תאים (> 10
פרוטוקול
פרוטוקול עבור הדור של CD40 המופעל בתאים Murine B (mCD40B) מ splenocytes מחולק לשני חלקים: חלק א 'מדגים את הכנת CD40 ליגנד Murine (CD40L) להביע תאים הלה (tmuCD40L הלה), אשר ישמש צלחת מחויב תאים מזין. חלק ב 'מתאר את התרבות בפועל Murine CD40-B.
א הכנת תאים מזין (tmuCD40L הלה)
הלה tmuCD40L הוא קו חסיד האנושי תא אפיתל, אשר מעולם לא צריך להיות ומחוברות לגמרי. התאים splitted ולכן פעמיים בשבוע. Culturing על יותר מ 6 שבועות לא מומלץ.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
שינויים של פרוטוקול זה אפשרי, במיוחד לגבי מקורו של הגירוי-CD40 ואת סוג של זן העכבר משמש, גם מניב בדור יעילה של תאים Murine CD40-B מופעל. אחמדי et al. הראו תוצאות דומות עבור fibroblasts העכבר transfected עם Murine-CD40 ליגנד. במצגת זו בהקשר של אנטיגן קסנו ניתן לשלול בוודאות, אך מחקרים אינטנסיביים לגבי אבטחה רעילות in vivo לא נתן סימנים לדלקת או לתגובה אוטומטית חסינות הגדרה זו באמצעות האדם תאים transfected הלה. עם זאת, החלופה הטובה ביותר מייצג Murine מסיסים-CD40 ליגנד עם הפ.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
הניסויים בוצעו בהתאם להנחיות הלאומית האירופי לשמירה על חיות מעבדה. בהתייחסו לחוק הגרמני רווחת בעלי החיים החיות נשלטו באופן סדיר על ידי הרשויות המתאימות.
תודות
אנו מבקשים להודות לד"ר קלמנס Wendtner למתן tmuCD40-ליגנד, הלה קו התא.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
א הכנת מדיה:
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| תא מזין בינוני סוג בר | תא מזין מבחר בינוני | ||
| מגיב | ריכוז | מגיב | ריכוז |
| RPMI 1640 | RPMI 1640 | ||
| L-גלוטמין | 300 מיקרוגרם / מ"ל | L-גלוטמין | 300 מיקרוגרם / מ"ל |
| FBS | 10% | FBS | 10% |
| HEPES | 10 mM | HEPES | 10 mM |
| Gentamycin | 15 מיקרוגרם / מ"ל | Gentamycin | 15 מיקרוגרם / מ"ל |
| Hygromycin B | 0.2 מ"ג / מ"ל |
| mCD40-B בינוני כביסה | mCD40-B בינוני תרבות | ||
|---|---|---|---|
| מגיב | ריכוז | מגיב | ריכוז |
| D-ממ | D-ממ | ||
| L-גלוטמין | 580 מיקרוגרם / מ"ל | L-גלוטמין | 580 מיקרוגרם / מ"ל |
| גלוקוז | 4.5 מ"ג / מ"ל | גלוקוז | 4.5 מ"ג / מ"ל |
| HEPES | 10 mM | HEPES | 10 mM |
| Gentamycin | 15 מיקרוגרם / מ"ל | Gentamycin | 15 מיקרוגרם / מ"ל |
| מ | 0.1mm (1x) | ||
| FBS | 10% |
ב שונות ריאגנטים:
| מגיב | חברה | אין סדר |
| RPMI 1640 | Invitrogen Gibco | REF 21875 |
| D-ממ | Invitrogen Gibco | REF 41965 |
| Dulbeccos PBS (10x) | PAA | חתול לא H15-011 |
| Gencin | דלתא בחר | לאמנות אין 7395800 |
| FBS | Lonza | חתול לא DE14-802C |
| HEPES הצפת | PAA | חתול לא S11-001 |
| ממ NEAA | Invitrogen Gibco | REF 11140 |
| Hygromycin B | PAA | חתול לא P02-015 |
| רקומביננטי Murine אינטרלויקין 4 | Immunotools | חתול לא 12340045 |
| ציקלוספורין | נוברטיס | חתול לא 0078-0109-01 NDC |
| טריפסין / EDTA (10x) | Invitrogen Gibco | REF 15400-054 |
ג שונות וחומרים:
| מגיב | חברה | אין סדר |
|---|---|---|
| סטרילי פיפטה טיפים | Sarstedt | |
| 6 גם צלחת | NUNC | חתול לא 140675 |
| 50 מ"ל צינור חרוטי | BD פלקון ™ | חתול לא 352070 |
| תרבות רקמות צפחת | Sarstedt | חתול לא 83.1813.002 |
מקורות
- Schultze, J. L. CD40-activated human B cells: an alternative source of highly efficient antigen presenting cells to generate autologous antigen-specific T cells for adoptive immunotherapy. J Clin Invest. 100 (11), 2757-2765 (1997).
- Wiesner, M.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
