תכונה אחת של מחלת אלצהיימר היא העלאת Aβ 1-42 פפטיד. כאן אנו מספקים פרוטוקול להכנת Aβ סינתטי 1-42 Oligomers, אשר פוגע בהיפוקמפוס potentiation לטווח ארוך, הסלולר לתאם של זיכרון. הליך זה שימושי לחקר מנגנוני סינון פתולוגיה התרופה Aβ-Induced.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנת Oligomeric β עמילואיד 1-42 ו אינדוקציה של ירידת ערך הפלסטיות הסינפטית על Slices בהיפוקמפוס
במאמר זה
סיכום
תקציר
ירידת ערך של קשרים סינפטיים צפוי בבסיס השינויים בשכחה עדין המתרחשים בשלבים המוקדמים של מחלת אלצהיימר (AD). β עמילואיד (Aβ), פפטיד המיוצר בכמויות גבוהות לספירה, ידוע להפחית הגברה לטווח ארוך (LTP), הסלולר לתאם של למידה וזיכרון. אכן, פגיעה הנגרמת על ידי LTP Aβ היא פרדיגמה ניסויית שימושי לחקר תפקוד סינפטי במודלים לספירה עבור תרופות ההקרנה מסוגל מקלים או מביטול ליקויי הסינפטי כאלה. מחקרים הראו כי Aβ מייצרת את שיבוש LTP מועדף באמצעות טופס oligomeric שלה. כאן אנו מספקים פרוטוקול מפורט עבור LTP פגיעה על ידי טפטוף של oligomerized סינתטי Aβ1-42 פפטיד על פרוסות בהיפוקמפוס חריפה. בסרטון זה, אנו המתאר הליך צעד אחר צעד להכנת Aβ oligomeric
פרוטוקול
Resuspending β עמילואיד פפטיד
לפני תחילת העבודה יש להכין:
- Aβ 1-42 (אבקת lyophilized)
- 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP)
- נמוך מחייב microcentrifuge צינורות פוליפרופילן (1.5 מ"ל)
- GasTight המילטון מזרק עם להפסיק לצלול טפלון (250 μl)
- Dimethylsulfoxide (DMSO) <....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
כפי שתואר לעיל, מספר בעיות בהכנת Aβ oligomeric עלול לגרום LTP נפגמה. אחת הדרכים להעריך אם Aβ השפלה או חוסר oligomerization Aβ ייתכן שאירעו היא להעריך את הכנת Aβ באמצעות טריס-PAGE Tricine / ניתוח סופג המערבי ultracentrifugation אנליטית (לא תיארו בפרוטוקול זה). כאשר דגימות סופג המערבי מוכנים בתנאים non-denaturing/non-reducing, הכנה מוצלחת יש ליצור חתימה סופג המערבי בהשתתפות להקות המתאים מונומרים ו oligomers שונה 3. סוגיה המתרחשים לעתים קרובות הוא חוסר יציבות פפטיד במהלך ה.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
ניסויים בבעלי חיים בוצעו בהתאם להנחיות והתקנות שנקבעו על ידי אוניברסיטת קולומביה IACUC.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי NIH המכון הלאומי להפרעות נוירולוגיות ושבץ (NINDS) (NS049442).>
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| Aβ 1-42 (ליופיליזציה) | American Peptide | 62-0-80 | |
| 1,1,1,3,3,3-Hexafluoro-2-Propanol (HFIP) | Fluka | 52517 | |
| Dimethylsulfoxide (DMSO) | Biotium, Inc. | 90082 | |
| מבחנות צנטריפוגה מפוליפרופילן 50mL | Corning | 05-538-67 | |
| מיקרו-מבחנות MaxyClear 1.5ml לשחזור מקסימלי | Axygen Scientific | MCT-150-L-C | |
| Phosphate-Buffered Saline pH 7.4 | Invitrogen | 10010-023 | |
| מזרקי GASTIGHT 250 μL | Hamilton Co | 1725 | |
| מכשיר סוניקציה (Bath sonicator) | Branson | 3510 | |
| מערכת ריכוז Savant SpeedVac | Various | SC 110A |
מקורות
- Stine, W. B. Jr, Dahlgren, K. N., Krafft, G. A., LaDu, M. J. In vitro characterization of conditions for amyloid-beta peptide oligomerization and fibrillogenesis. J Biol Chem. 278, 11612-11622 (2003).
- Vitolo, O. V.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
