Xenopus עובריים epithelia הם מערכת מודל אידיאלי ללמוד התנהגויות התא כגון פיתוח הקוטביות ולשנות צורה במהלך המורפוגנזה אפיתל. היסטולוגיה מסורתית של דגימות קבוע ויותר כהשלמה הדמיה לחיות תאים confocal. כאן אנו מדגימים שיטות לבודד ברקמות הצפרדע לדמיין לתאי האפיתל לחיות לחיות cytoskeleton שלהם באמצעות תאים מיקרוסקופיה confocal.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
Live-תא הדמיה וניתוח כמותי של תאים אפיתל עובריים ב Xenopus laevis
במאמר זה
סיכום
תקציר
תאים אפיתל עובריים לשמש מודל אידיאלי ללמוד המורפוגנזה שבו רב הסלולר רקמות עוברים שינויים בגיאומטריה שלהם, כגון שינויים באזור תא השטח גובה התא, שבו התאים עוברים מיטוזה ו לנדוד. יתר על כן, בתאי אפיתל יכול גם לווסת את תנועות המוךפו"גנטי שהולך ברקמות סמוכות
פרוטוקול
לפני שתתחיל
- לסנתז mRNA כתרים מתבנית DNA המקודד את החלבון לינארית מתויג fluorescently ו-mRNA לטהר על ידי שיטות סטנדרטיות (ערכת AmpliCap תמלול; ביוטכנולוגיות Epicentre, Madison WI). mRNA צריך להיות aliquoted לשימוש פעם אחת ב 0.2 צינורות צנטריפוגה מ"ל ומאוחסנים ב -80 ° C.
- שיטות סטנדרטית להשיג ביצים, הפריה חוץ גופית, והסרה של המעיל ביצה תוארו בעבר 2. הליך להשיג ביצים צפרדע Xenopus laevis נקבה הודגמה 3 קודם לכן. להפרות ביציות ב....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
הצגנו פרוטוקולי הניסוי השתמשו בקביעות במעבדה שלנו cytoskeleton תמונה דינמית משתנה בקליפת התא apical ו נדנוד קרום התא של תאים אפיתל בעוברים Xenopus. אחד צריך להשתמש הפרוטוקולים הללו כנקודת פתיחה עבור הדמיה חיה של צורות תא אפיתל, אופטימיזציה של פרוטוקול זה הוא חיוני וחלק ההגדרות ישתנו בהתאם לסוג המערכת מיקרוסקופ יש ואת סוג של חלבונים אחד הוא מעוניין הדמיה . יחד, את הצעדים פרוטוקול (בידוד explant, הדמיה והמחשה של רכיבים סלולריים המשנה הסלולר, ומתודולוגיה כימות) לספק הליך מקי.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי מכוני הבריאות הלאומיים (R01-HD044750), מענק הקריירה מן הקרן הלאומית למדע, ותמיכה של איגוד הלב האמריקני (החל גרנט-in-Aid). המחברים מודים דוידסון חברי המעבדה: HY קים, מ 'פון Dassow וג' ג'ואו (לעזרה עם אחריות מעבדה יומי), ואת לין זאנג לסיוע שלה בביולוגיה מולקולרית mRNA סינתזה. אנו מכירים מאמצים ניסויית מכל המעבדות צפרדע (בעיקר ריי קלר של ודאג של DeSimone) שתרמו חלק של פרוטוקול זה, על ידי פיתוח ובדיקה של שיטות שונות לאורך השנים. אנו מודים ריצ'רד הרלנד וג'ון שוולינגפורד מתנות מהסוג שלהם מ-GFP ו-GFP moesin פלסמידים בהתאמה.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
מקורות
- Ninomiya, H., Winklbauer, R. Epithelial coating controls mesenchymal shape change through tissue-positioning effects and reduction of surface-minimizing tension. Nat Cell Biol. 10 (1), 61-61 (2008).
- Kay, B. K., Peng, H. B. Xenopus laevis: Practical Uses in Cell and Molecular Biology. , Academic Press. New York. (1991).
- Cross, M. K., Powers, M.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
