מאמר שיטה

ניתוח של ביטוי גנים בורר אש אמרלד ( Agrilus planipennis) באמצעות Real Time-PCR כמותי

DOI:

10.3791/1974

⸱

4 במאי 2010

 ,  ,  , 
1Department of Entomology, The Ohio State University

במאמר זה

סיכום

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

כמותי בזמן אמת PCR (qRT-PCR) היא כלי יעיל לאבחון רמות ה-mRNA ברקמות חרקים שונים, שלבי התפתחות. בדוח זה אנו מציגים את השימוש qRT-PCR כדי לברר רמות ה-mRNA ברקמות הזחל שונים שלבי ההתפתחות של מינים פולשניים חרקים, דקור ברקת אפר.

תקציר

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אמרלד אפר דקור (EAB,

פרוטוקול

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הפרוטוקול המלא עם השלבים השונים מתואר בתרשים הזרימה באיור 1. צעדים בודדים המהווים לנתיחה, מיצוי RNA, סינתזה סטרנד ראשון cDNA qRT ו-PCR מפורטים להלן.

I. Dissection הזחל

  1. לפני תחילת הליך זה, מקום אמרלד אפר דקור, או EAB, זחלים על נייר לח עד והניתוחים מבוצעים. שמור טרי פוספט 1X מוכן שנאגרו מלוחים, או PBS, על קרח כדי לשמור על קור חיץ לאורך כל הניתוח.
  2. כדי להתחיל, לתקן את הזחלים EAB על הצלחת דיסקציה עם סיכות לנתיחה בסדר. לאחר מכן....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

דיון

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

מחזורי הסף (CT) מתקבל ערך למדגם כל צלחת qRT-PCR. להכנת עקומת תקן, ערך ה-CT שהתקבלו עבור כל אחד מהם היה דילול זממו נגד ביומן של ריכוז שלה. ערכי ה-CT של דגימות הניסוי היו זממו אז על זה עקומת סדרה דילול סטנדרטי. כמויות יעד חושבו מתוך עקומות תקן נפרד שנוצר עבור כל ניסוי כלומר רקמות ואת הביטוי ההתפתחותי. ערכים הביטוי יחסית (סיבובים) נקבעו אז על ידי חלוקת כמויות רצף היעד של עניין (במקרה זה AP-PERI1) עם כמות המתקבלים על הבקרה הפנימית (AP-RP1). עבור חישובים של משמעות, הי.......

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

גילויים

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

תודות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

אנו מכירים את העזרה המסופק על ידי דלתא לורדס Arrueta Antequera (המחלקה לאנטומולוגיה, אוהיו סטייט / OARDC, ווסטר, OH) של ההתקנה של הניסויים. אנו מודים ד"ר תרז פולין (USDA, שירותי יער, NRS) עבור לשלוח דגימות EAB הזחל. עזרה מסופק על ידי ד"ר לואיס סימון קאניאס ו נוריס M אקוסטה עם ההתקנה מיקרוסקופ מוערכת. המימון לפרויקט זה סופק על ידי קרנות המדינה הפדרלי השתלט על החקלאי אוהיו מרכז מחקר ופיתוח, אוניברסיטת מדינת אוהיו.

....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

מקורות

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lehane, M. J. Peritrophic matrix structure and function. Annu Rev Entomol. 42, 525-550 (1997).
  2. Mittapalli, O., Sardesai, N., Shukle, R. H. cDNA cloning and transcriptional expression of a peritrophin-like gene in the Hessian fly, Mayetiola dest....

הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

RNACFX 96

מאמרים קשורים