כדי ללמוד Myxococcus xanthus התנהגות הנחיל, עיצבנו פרוטוקול זמן לשגות microcinematography כי יכול להיות שונה עבור מבחני שונות. היא מעסיקה תנאי גידול סטנדרטיים המותאמים עבור מיקרוסקופיה, ו מניבה תוצאות לשחזור על ידי שימוש, אטמי סיליקון זול לשימוש חוזר. השתמשנו בשיטה זו כדי לכמת chemotaxis תאיים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הקלטה התנהגות תאיים ב Myxococcus xanthus Biofilms באמצעות זמן לשגות Microcinematography
במאמר זה
סיכום
תקציר
נחיל של δ-proteobacterium Myxococcus xanthus מכיל מיליוני תאים לפעול כתנועה, תיאום הקולקטיבי באמצעות סדרה של אותות כדי ליצור מורכבות, דפוסי דינמי כתגובה לאותות סביבתיים. דפוסים אלה מארגנים עצמית ו מתהווה, הם לא ניתן לחזות על ידי התבוננות בהתנהגות של תאים בודדים. באמצעות זמן לשגות מעקב assay microcinematography, זיהינו דפוס מתהווה נפרדות מ xanthus בשם chemotaxis, כהגדרתו התנועה מכוונת של נחיל את שיפוע מזין כלפי מקורו 1.
כדי לאפיין ביעילות chemotaxis דרך microcinematography זמן לשגות, פיתחנו מורכב מאוד לשינוי צלחת (איור 1) ונבנה מקבץ של 8 מיקרוסקופים (איור 2), שכל אחד מהם מסוגל זמן לשגות לכידת וידאו. Assay הוא קפדני מספיק כדי לאפשר שכפול עקבי של נתונים מדידים, ואת קטעי וידאו וכתוצאה מכך מאפשרים לנו להתבונן ולעקוב אחר שינויים עדינים התנהגות נחיל. לאחר שנתפסו, קטעי וידאו המועברים למחשב ניתוח / אחסון עם מספיק זיכרון כדי תהליך ולאחסן אלפי קטעי וידאו. הגמישות של התקנה הזאת הוכיחה שימושי כמה מחברי מ xanthus הקהילה.
פרוטוקול
ציוד נחוץ:
- Klett מטר
- פיפטה וטיפים
- 2.5 microcentrifuge צינורות מ"ל
- Microcentrifuge
- CTTYE התקשורת:
- Casitone 1.0% (Difco Laboratories), תמצית שמרים 0.5% (Difco Laboratories),
- 10.0 mM טריס-HCl (pH 8.0), 1.0 מ"....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
זמן לשגות microcinematography (TM) הפכה הגישה הסטנדרטית ללימוד תנועתיות פרוקריוטים 2-7. באופן מסורתי, TM מבוצעת באמצעות פתילות נייר פילטר, רפידות אגר דקה, או לוחות אגר כמו מצעים 8-11. שיטות אלה נאותה וחסכונית כאשר נעשה שימוש כדי ליצור רצפים התמונה איורים הכללי של תנועת חיידקים. עם זאת, אם התמונה sequences חייב לגרום לדור של לשחזור נתונים קפדני כמותית, שיטות אלו זמן רב ולא אמינה למדי. לדוגמה, שינויים בשיטות אלה שנגרמו על ידי טעות אנוש עלול להוביל למגוון רחב של.......
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
מחקר זה התאפשר הודות פרס קרן המדע הלאומית קריירה (MCB-0746066, אפיון activators תעתיק המווסתים התנהגות מתהוות) כדי RDW
אנו מודים LJ Shimkus, BS גולדמן, ג'סואן, מ 'זינגר, LG וולש, KA מרפי, HG טיילור לדיונים הערות מועילות על כתב היד.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות |
|---|---|---|---|
| 1.0% Casitone | Difco Laboratories | ||
| 0.5% תמצית שמרים | Difco Laboratories | ||
| פיפטה לדגימה זעירה | Fisher Scientific | ||
| טיפ זכוכית חד-פעמי בנפח 100 μl | Fisher Scientific | ||
| אטם גומי סיליקון בעובי 0.5-mm ובמידות 2 x 2 cm | Grace Bio-Lab Inc. |
מקורות
- Taylor, R. G., Welch, R. D. Chemotaxis as an emergent property of a swarm. J Bacteriol. 190, 6811-6816 (2008).
- Curtis, P. D., Taylor, R. G., Welch, R. D., Shimkets, L. J. Spatial Organization of Myxococcus xanthus During Fruiting Body Formation. J Bacteriol. 189, 9126-91....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
