Gene Expression חיידקית ניתוח שימוש microarrays

Protocol

היפוך תגובה transcriptase

הפעל לחסום חימום 70-80 מעלות צלזיוס, 42 ° C. אמבטיות מים יכול לשמש גם בשלב זה. אם אתה משתמש חוסם חימום, לשים קצת מים, כך החום הוא אחיד.

1. תחול תגובה
   1. קח 3 מיקרוגרם של רנ"א
   2. התאם את עוצמת הקול μl 13 עם מים חינם RNase
   3. הוספת 2.5 μl של אקראיות hexamer primers (2mg/mL)....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
AA-dUTP		סיגמא-אולדריץ'	A0410	5-(3-אמינואליל)-2' deoxyuridine-5'-triphosphate
dNTP		אמרשם	27-2035-01	100 מ"מ dNTP סט PCR
כיתה פריימרים אקראיים Hexamer	אמרשם	27-2166-01	3 מ"ג/מ"ל
				L
CyDye™		Amersham	RPN5661	לאחר תיוג חבילת צבע תגובתי
QIAquick		Qiagen	28104	ערכת טיהור PCR
1 M K2HPO4
1 M KH2PO4
1 M KPO4	מאגר			ליצירת מאגר פוספט 1M (KPO4, pH 8.5-8.7) לשלב: 9.5 מ"ל 1M K2HPO4 ו-0.5 מ"ל 1M KH2PO4
מאגר שטיפת פוספט	מאגר			עבור 100 מ"ל מאגר שטיפת פוספט (5 מ"מ KPO4, pH 8.0, 80% EtOH) תערובת: 0.5 מ"ל 1 M KPO4 pH 8.5 + 15.25 מ"ל מים MilliQ + 84.25 מ"ל 95% אתנול. מאגר הכביסה יהיה מעט עכור.** חשוב: יש להכין מאגר שטיפת פוספט מדי יום.
מאגר פליטת פוספט	מאגר			דילול 1 M KPO4, pH 8.5 עד 4 מ"מ עם מים סטריליים
			נתרן פחמתי	(Na2CO3): 0.5M, pH 9.0. ממיסים 4.2 גרם NaHCO3 ב-80 מ"ל מים סטריליים ומתאימים את ה-pH ל-9.0 עם 10 N NaOH; הביאו נפח עד 100 מ"ל עם מים סטריליים. כדי ליצור תמיסה של 50 מ"מ לתגובת צימוד הצבע, יש לדלל 1:10 במים. הערה: מאגר קרבונט משנה את הרכבו עם הזמן; הפוך אותו טרי כל שבועיים עד חודש.