גרורות הריאה ניסיוניים מודל CTL עכבר חיסוני לניתוח האינטראקציה תאים סרטניים תא-T In vivo.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
גרורה ניסויית חיסוני CTL המאמצת העברת דגם עכבר
* These authors contributed equally
במאמר זה
סיכום
תקציר
מודל ניסיוני עכבר גרורות גרורות הוא מודל פשוט עדיין רלוונטי מבחינה פיזיולוגית. תאים סרטניים מוזרקים לווריד (iv) לתוך הוורידים זנב עכבר ליישב הריאות, ובכך, שמזכיר את הצעדים האחרונים של גרורות תאים סרטניים ספונטנית: הישרדות extravasation ההשאלה, והקולוניזציה באיברים דיסטלי. מבחינה טיפולית של נוף, מודל ניסיוני גרורות הוא הדגם הפשוט האידיאלי מאז היעד של טיפולים היא לעתים קרובות את נקודת הסיום של גרורות: גידול גרורתי הוקמה בשנת האיבר הדיסטלי. במודל זה, תאים סרטניים מוזרקים לתוך הוורידים iv העכבר הזנב מותר ליישב ולפתח את הריאות. גידול ספציפי ההרג מוזרקים אז iv לעכבר גרורות נושאות. המספר והגודל של גרורות הריאה ניתן לשלוט במספר תאים סרטניים להיות מוזרק והזמן של הגידול. לכן, בשלבים שונים של גרורות, גרורות מן מינימלית גרורות נרחב, יכול להיות המודל. גרורות הריאה מנותחים על ידי האינפלציה בדיו, ובכך מאפשר תצפית ויזואלית יותר קל וכימות.
פרוטוקול
1. גרורה ניסויית עכבר דגם
- ביום לפני זריקות תאים סרטניים, זרע אחד T75 עם בקבוק עד 1 x 10 7 CMS4-Met תאים 10 מ"ל של מדיום RPMI המכילה 10% נסיוב להשיג בצמיחה מהירה תאים סרטניים. דגירה לילה בשעה 37 ° C.
- ביום של הזריקה, להסיר את המדיום ולשטוף את התאים פעם עם PBS, אז הקציר תאים סרטניים עם 0.05% טריפסין-EDTA על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. עצור את התגובה עם 10 מ"ל של מדיום RPMI סרום המכיל 10%. העברת התאים צינור חרוטי.
- ספין למטה התאים ב ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
עכברים נרכשו מן המכון הלאומי לסרטן (Friderick, MD) ו שוכנו הספר לרפואה של מתקן חיה ג'ורג'יה. ניסויים וטיפול / הרווחה היו בהסכם עם תקנות פדרליות ואת פרוטוקול שאושר על ידי בית הספר לרפואה של ג'ורג'יה IACUC הוועדה.
תודות
נתמך על ידי מענקים מהמוסד הלאומי לבריאות (CA133085 כדי KL) לבין האגודה האמריקנית למלחמה בסרטן (RSG-09-209-01-TBG כדי KL).
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
פתרונות:
הודו פתרון דיו (17):
- יוצקים 150 מ"ל מים מזוקקים לתוך בקבוק 250 מ"ל.
- הוסף 4 טיפות אמוניום הידרוקסיד למים מזוקקים.
- הוסף 30 מ"ל הודו דיו המניה (כלומר סנפורד דיו שחור Magic Waterproof ציור 4465 פריט 44011) לתערובת אמוניה במים.
- למעלה מן במים מזוקקים לנפח של 200 מ"ל. הפתרון הוא מוכן להזרקה.
Fekete של פתרון (17):
הפתרון של Fekete משמש אקונומיקה הודו דיו מנופח נושאות גידולים הריאות להבחין גושים סרטניים לבן רקע שחור של רקמות נורמליות.
- הוסף 350ml EtOH 95% עד בקבוק זכוכית 1 ליטר.
- מוסיפים 150 מ"ל מים מזוקקים
- הוסף 50 מ"ל פורמאלדהיד
- הוסף 25ml חומצה חומציים קרחונים
מקורות
- Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope. J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).
- Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
תגיות
