מאמר זה מתאר את הפרוצדורות המשמשים להכנת זנב גידים עכברוש ללימודי biomechanical ו mechanobiological. מספר תכונות של שלבים עיקריים בהכנת הם הפגינו, עם תחילת החילוץ, חתך מדידת שטח, שטיפה וטעינה החדרה bioreactor.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
הכנת הגידים זנב עכברוש ללימודי biomechanical ו Mechanobiological
במאמר זה
סיכום
תקציר
זנב עכברוש גידים (RTTs) הם מודל ביולוגי נפוץ בשימוש ניסיוני במבחנה בתחומי הפיזיולוגיה tendinopathy הגיד. עבודה עם רקמות אלה הוא מאתגר כי הם שבירים מאוד, עד עכשיו לא היה פרוטוקול מפורט בקפדנות על הבידוד שלהם.
כדי להתמודד עם האתגרים הללו, פיתחנו שיטות וכלים כדי להקל על מניפולציה של RTTs ורקמות לשלוט הכדאיות, עקרות ויושרה. מאמר זה מתאר את הפרוצדורות המשמשים להכנת RTTs ללימודי biomechanical ו mechanobiological. העבודה שלנו מחולק לארבעה שלבים עיקריים: מיצוי, חתך מדידת שטח, שטיפה וטעינה החדרה bioreactor.
בכל שלב, כל הנהלים, חומרים מניפולציות מוצגים בפירוט, כך שהם יכולים לשכפל בקלות. יתר על כן, המכשירים ספציפית שפותחה מוצגים: צלחת מניפולציה בשימוש להפריד RTTs, מיקרומטר אופטיים לתפקיד רקמות במהלך המדידה חתך את האזור מערכת עיגון לצרף את RTTs על bioreactor.
לבסוף, אנו מתארים את התוצאות שהתקבלו לאחר בדיקות מרובות כדי לאמת את השיטות שלנו. הערכות כדאיות, עקרות ויושרה להוכיח כי הנהלים שלנו קפדנית דיה מניפולציות של רקמות שביר כגון גידים זנב חולדה.
פרוטוקול
לפני מניפולציה כלשהי, עליך לזהות את קבוצת גידים לשמש תלוי בניסוי שבו אתה מנהל את המנגנון על מזגו של האדם. לענייננו, גידים הגחון נבחרו משום שהם קטנים יותר, ולכן קל יותר לתמרן, כאשר מדידת שטח חתך והתאמת אותם לתוך תא bioreactor.
שים לב כי כל המכשירים הם autoclaved או מעוקר עם אתנול 70%. יתר על כן, בקבוק ספריי המכיל 70% אתנול ממוקם ליד כל תחנת עבודה לעקר את הכפפות הנסיינים לפני כל פעולה.
חלק 1: Extraction
לאחר כריתה, הזנב הוא מניפ....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
על ידי יישום אותן הפרוצדורות, אנחנו יכולים לנהל מגוון רחב של במבחנה על סוג זה של רקמות. כמו למשל, מחקר על ניוון הרקמה בוצע על ידי יישום של גירוי מתחת ל RTTs לתקופה של עשרה ימים. כל יום, הערכנו תכונות הרקמה מכני שאינו הרסני בדיקות הרפיה מתח. בסוף, הצלחנו לשמור וריאציה מתח RTT ובכך לנתח את ההתקדמות של תכונות מכניות.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
גילויים
אין ניגודי אינטרסים הכריז.
תודות
מאמר זה היה נתמך על ידי NSERC גרנט # 299280, IRSST כמו מלגה להורה ג'FRSQ כמו בפרס מחקר לתואר ראשון סטודנט מ 'סיר. אנו מודים יואן Lemieux-Laneville עבור ביצוע מניפולציות מוקלט על וידאו.
....הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| D-PBS | ריאגנט | Wisent Inc. | 311-410-CL | תמיסת סליין |
| גלוקוז | ריאגנט | Wisent Inc. | 609-037-EL | תמיסת סליין 1g/L |
| אנטיביוטיקה-אנטימיקוטים | ריאגנט | Invitrogen | 15240-062 | תמיסת סליין 1% |
| DMEM | ריאגנט | Invitrogen | 12800-017 | תמיסת תרבית |
| נתרן ביקרבונט | ריאגנט | Wisent Inc. | 600-105-CG | תמיסת תרבית 3.7g/L |
| FBS | ריאגנט | Wisent Inc. | 090150 | תמיסת תרבית 10% |
| אנטיביוטיקה-אנטימיקוטים | ריאגנט | Invitrogen | 15240-062 | תמיסת תרבית 1% |
| מיקרומטר אופטי | כלי | הכנה עצמית | ||
| לוחית מניפולציה | כלי | הכנה עצמית | ||
| תא ביו-ריאקטור | כלי | הכנה עצמית |
מקורות
- Bennett, M. B., Ker, R., Dimery, N., Alexander, R. Mechanical properties of various mammalian tendons. J. Zool. Lond. A209, 537-548 (1986).
- Dupuis, D. Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mé....
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
