Method Article

שיטות מניפולציות ניסויית, לאחר חיתוך רוחב עצב הראייה של מערכת העצבים המרכזית היונקים

DOI:

10.3791/2261

⸱

May 12th, 2011

 ,  , 
1Department of Surgery, University of Toronto

* These authors contributed equally

In This Article

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיתוך רוחב עצב הראייה הוא מודל בשימוש נרחב של פגיעה במערכת העצבים המרכזית מבוגר. מודל זה הוא אידיאלי עבור ביצוע מספר מניפולציות ניסיוני כי היעד של הרשתית גלובלי או ישירות ליעד אוכלוסייה של תאים עצביים נפצעו הגנגליון ברשתית.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

בתאי גנגליון רשתית (RGCs) הם נוירונים במערכת העצבים המרכזית, כי פלט מידע חזותי מהרשתית אל המוח, באמצעות עצב הראייה. העצב האופטי ניתן לגשת בתוך מסלולו של העין transected לחלוטין (axotomized), חיתוך האקסונים של האוכלוסייה RGC כולו. חיתוך רוחב עצב הראייה הוא מודל לשחזור של מוות תאים אפופטוטיים נוירונים ב CNS הבוגרת 1-4. מודל זה הינו אטרקטיבי במיוחד מאחר קאמרית הזגוגית של העין פועלת כמו כמוסה עבור משלוח הסמים אל הרשתית, המתיר מניפולציות ניסיוני באמצעות זריקות התוך עיני. דיפוזיה של חומרים דרך הנוזל הזגוגי מבטיחה כי הם פועלים על האוכלוסייה RGC כולו. וקטורים ויראליים, פלסמידים או RNAs התערבות קצר (siRNAs) יכול גם להיות מועברת לתא זגוגי על מנת להדביק תאים ברשתית או transfect 5-12. כמיהות גבוהה של Adeno-Associated Virus (AAV) וקטורים מועילה RGCs היעד, עם שיעור זיהום מתקרב 90% של תאים ליד הזריקה 6, 7, 13-15. יתר על כן, RGCs ניתן transfected סלקטיבי על ידי יישום siRNAs, פלסמידים, או וקטורים ויראליים לסוף חתך של עצב הראייה 16-19 או וקטורים הזרקה לתוך היעד שלהם colliculus מעולה 10. הדבר מאפשר לחוקרים לבחון מנגנונים אפופטוטיים באוכלוסייה העצבית נפגע ללא תופעות בלבול על נוירונים אחרים או עובר אורח גליה שמסביב. RGC אפופטוזיס יש מאפיין זמן כמובן לפיה מוות של תאים מתעכב postaxotomy 3-4 ימים, אחרי אשר התאים להידרדר במהירות. זה מספק חלון מניפולציות ניסיוני נגד מסלולים מעורב אפופטוזיס. מניפולציות ישירות היעד RGCs מן הגדם transected עצב הראייה מבוצעים בזמן axotomy, מיד לאחר חיתוך העצב. לעומת זאת, כאשר חומרים מועברים דרך המסלול התוך עיני, הם יכולים להיות מוזרק לפני הניתוח או בתוך 3 הימים הראשונים לאחר הניתוח, שלפני תחילת אפופטוזיס RGCs axotomized. במאמר הנוכחי, אנחנו מדגימים כמה שיטות ניסיוניות מניפולציות לאחר חיתוך רוחב עצב הראייה.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. טכניקה כירורגית

  1. ניסויים אמור להתבצע באמצעות הטכניקה aseptic ובעקבות השימוש בבעלי חיים פרוטוקולים של המוסד הספציפי שלך. כלים וחומרים (פתרונות, חומרים הבדיקה, קליעים נותבים, מחטים וכו '), לבוא במגע עם רקמה חיה חייב להיות סטרילי כדי למנוע זיהום משפיע לרעה על רווחת בעלי החיים ואת ההשפעות השליליות האפשריות של המחקר.

2. הרדמה

  1. חולדות יהיה מורדם באמצעות מערכת אידוי isoflurane וטרי....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

חיתוך רוחב עצב הראייה הוא מודל לשחזור ביותר של אפופטוזיס CNS מבוגר נוירון. מניפולציות הניסוי הפגינו כתב היד הזה היתר חקר מנגנוני אפופטוזיס RGC לאחר פציעה.

זריקות תוך עיניות שימושיים המיקוד העולמי של הרשתית. הליך זה דורש קצת תרגול, כפי שהוא קריטי לא לפצוע את העדשה עם קצה פיפטה מזכוכית. נזק עדשה הוכח לגרום לשחרור גורמי צמיחה, שינוי הישרדות התא התחדשות 20, 21. זה חשוב גם בזהירות להוסיף למשוך את פיפטה זכוכ.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PDK נתמך על ידי מענק ההפעלה CIHR (MOP 86523)

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Stereotaxic FrameStoelting Co.
מסכת גז עכברושStoelting Co.
מערכת הרדמהVetEquip901806
איזופלורן (PrAErrane)בקסטר אינטרנשיונל בע"מDIN 02225875
מיקרוסקופ כירורגיWPI, Zeiss, Leica
Alcaine טיפות עינייםAlcon
Tears Naturale P.M.Alcon
Fine tip Dumont מלקחייםFine Science Tools11252-00
10 μ l מזרק המילטון (1701RN; 26s/2”/2)Hamilton Co80030
1/16 אינץ' אביזרי דחיסהHamilton Co55751-01
1/16 אינץ' OD, 0.010 אינץ' ID, PEEK TubingSupelco, Sigma-AldrichZ226661
מצמד זכוכית RN כפולHamilton Co55752-01
ערכת תחול שמן מינרלי: כולל מזרק, מחטים, מחיצותגומיהמילטון ושותPRMKIT
'

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Bahr, M. Live or let die - retinal ganglion cell death and survival during development and in the lesioned adult CNS. Trends Neurosci. 23, 483-4890 (2000).
  2. Isenmann, S., Kretz, A., Cellerino, A. Molecular deter....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Erratum

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: Methods for Experimental Manipulations after Optic Nerve Transection in the Mammalian CNS
Posted by JoVE Editors on 5/31/2011. Citeable Link.

null

Tags

Optic Nerve TransectionRetinal Ganglion CellsIntraocular InjectionOptic Nerve StumpVitreous ChamberHamilton SyringeGlass MicropipetteRetrograde TransportApoptotic Neuronal DeathCNS Neuron Model

Related Articles