הכנת לוח מיקרופלואידי עם תאים חיידקיים

תקציר

מקור: סוטלייף, א. ל. ואחרים. ניתוח תאים חיים של מאמץ גזירה על Pseudomonas aeruginosa באמצעות מערכת מיקרופלואידית אוטומטית עם תפוקה גבוהה יותר. J. Vis. Exp. (2019).

סרטון זה מדגים את הכנת לוח מיקרופלואידי למחקרי מאמץ גזירה בתרביות חיידקים. לאחר פריימר התעלות במדיה, תאי חיידק מוכנסים לתעלה הניסיונית ומודגרים לצורך הצמדה. המדיה והתרבות שנותרו מוסרים כדי להכין את המערכת לניסויי מאמץ גזירה עתידיים.

פרוטוקול

1. הכנה למדיה

1. הכינו מדיום מינימלי (MM) עם 0.25% גלוקוז. כדי לייצר 1 ליטר של MM עם גלוקוז 0.25%, מוסיפים 200 מ"ל תמיסת מלח סטרילית M9, 2 מ"ל סולפט מגנזיום סטרילי 1 מ' (MgSO₄), 100 מיקרוליטר סידן כלוריד סטרילי 1 מ' (CaCl₂), ו-12.5 מ"ל גלוקוז סטרילי של 20% (עם גלוקוז) למים (dH₂O) בנפח סופי של 1 ליטר.
2. העברת המדיה הנדרשת לבקבוק סטרילי באמצעות טכניקות סטריליות. הכינו את הכמות הנדרשת בהתאם למספר הערוצים בהם משתמשים. בדרך כלל, כל ערוץ דורש 200 מיקרוליטר לפריימינג, 300 מיקרוליטר לזריעה ו-1300 מיקרוליטר לניסוי של 24 שעות.
3. הנח את הבקבוק באינקובטור או באמבט מים בטמפרטורה הניסויית. המדיה צריכה להיות בטמפרטורת הניסוי לפני השימ....

תוצאות

איור 1: רכיבים בודדים של מערכת המיקרופלואיד. הרכיבים הבודדים מפורטים משמאל לימין: 1. מצלמת CCD, 2. מיקרוסקופ הפוך ברזולוציה גבוהה עם שלב אוטומטי, מודול פלואורסצנציה אוטומטי, ומודול פוקוס אוטומטי, 3. שלב לוחה, 4: ממשק מערכת הדמיה, 5: בקרת של.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
כלוריד אמוניום, ACS	VWR	BDH9208-500G	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
BioFlux 1000 48 באר עם פלטת גזירה נמוכה	ביוסיינס פלוקסיון	910-0047
מערכת ההדמיה המיקרופלואידית BioFlux 1000Z	ביוסיינס פלוקסיון	BF 1000Z
סידן כלוריד דיהידריד, דרגת ACD	VWR	97061-904	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
דקסטרוז, אנהידרוס, ACS	VWR	BDH9230-500G	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
דרגת מגנזיום סולפט ACS	VWR	EM-MX0070-1	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
אשלגן פוספט מונובסיסי, דרגת ACS	VWR	BDH9268-500G	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
פסאודומונאס אאורגינוסה GFP	ATCC	15692GFP	זן חיידקי Pseudomonas aeurinosa PA01 עם שינוי GFP שימש למחקר זה.
כלוריד נתרן, ACS	VWR	BDH9286-500G	חלק מההרכב המינימלי של המדיה
נתרן פוספט, מונובסיסי, אנהידרוסי, דרגת ריאגנט	VWR	97061-942	חלק מההרכב המינימלי של המדיה