מאמר שיטה

טיהור פלסמיד דנ"א מ מושבות חיידקים באמצעות Miniprep Qiagen Kit

36.4K צפיות

DOI:

10.3791/247

29 ביולי 2007

במאמר זה

תקציר

טיהור פלסמיד דנ"א מן החיידק היא טכניקה הליבה של שיבוט מולקולרי. טיהור בקנה מידה קטן (miniprep) מתוך פחות מ 5 מ"ל של תרבית החיידקים הוא דרך מהירה לצורך אימות לשבט או בידוד ה-DNA, ואחריו עוד תגובות אנזימטיות (שרשרת פולימראז התגובה אנזים העיכול הגבלה). הנה, אנחנו וידאו מוקלט הנהלים הכללי של miniprep באמצעות ערכת QIAprep של QIAGEN Miniprep 8, במטרה להציג את הטכניקה היעילה ביותר על כללי למתחילים טכניקות הביולוגיה המולקולרית. ההליך כולו מבוסס על תמוגה אלקליין של תאים E. coli ואחריו ספיחה של ה-DNA על סיליקה בנוכחות מלח גבוהה. הוא מורכב משלושה שלבים: 1) הכנה וניקוי של lysate חיידקי, 2) ספיחה של ה-DNA על הממברנה QIAprep, 3) כביסה elution של DNA פלסמיד. כל הצעדים נעשים ללא שימוש פנול, כלורופורם, CsCl, ברומיד ethidium, ללא משקעים אלכוהול. בדרך כלל לוקח פחות מ 2 שעות כדי לסיים את ההליך כולו.

גילויים

למחברים אין הצהרות לגבי ניגודי עניינים.

הדפסות חוזרות והרשאות

בקש הרשאה לשימוש חוזר בטקסט או באיורים של מאמר JoVE זה

בקש הרשאה

תגיות

DNAprepQIAprep MiniprepDNAP1 P2 P3DNA

מאמרים קשורים