אנו מדגימים פרוטוקולים לייצור מיכון אלסטומרי polydimethylsiloxane (PDMS) מבוססי מערכים microvalve כי אין צורך אנרגיה נוספת כדי לסגור תכונה כרכים מדויק מוגדר photolithographically. מיקסר במקביל subnanoliter נפח ומערכת משולבת זלוף microfluidic מוצגים.
הרשמה ל-JoVE נדרשת לצפייה בתוכן זה. התחברו או התחילו בגרסת ניסיון בחינם.
מאמר שיטה
שבבי microfluidic מבוקרת עם מערכים Microvalve אלסטומרי
במאמר זה
סיכום
תקציר
מערכות microfluidic מיניאטורי לספק פתרונות פשוטים ויעילים עבור עלות נמוכה נקודה של טיפול אבחון תפוקה גבוהה מבחני ביו. בקרת זרימה יציבה ואמצעי אחסון fluidic מדויק שתי דרישות קריטיות עבור יישומים אלה. פיתחנו שבבי microfluidic שמציעות אלסטומרי polydimethylsiloxane (PDMS) מערכים microvalve כי: 1) אין צורך במקור אנרגיה נוספת כדי לסגור את נתיב fluidic, ומכאן את המכשיר טעון הוא נייד מאוד, ו 2) לאפשר microfabricating עמוק (עד 1 מ"מ) ערוצים עם הצדדיים אנכי וכתוצאה מכך תכונות מאוד מדויק.
Microvalves מכשירים מבוססי PDMS מורכב משלוש שכבות: שכבה המכילה fluidic נתיבים fluidic ו microchambers בגדלים שונים, שכבה מלאה המכילה את microchannels צורך להפעיל את נתיב fluidic עם microvalves, וכן קרום דק באמצע PDMS כי הוא חייב לשלוט השכבה. שכבת Fluidic שכבות לשלוט מבוצעים על ידי דפוס העתק של PDMS מ SU-8 אדונים photoresist, ואת קרום דק PDMS נעשית על ידי ספינינג PDMS בגבהים שצוינו. שכבת השליטה הוא קשור קרום דק PDMS לאחר הפעלת חמצן של שניהם, אז התאספו עם שכבת fluidic. Microvalves סגורים במנוחה ניתן לפתוח על ידי הפעלת לחץ שלילי (למשל, אבק בית). סגירת ופתיחת Microvalve הם אוטומטיים דרך שסתומים סולנואיד נשלט על ידי תוכנת מחשב.
כאן, אנו ממחיש שני microvalve מבוססי שבבי microfluidic עבור שני יישומים שונים. השבב הראשון מאפשר לאחסון ערבוב מדויק משנה nanoliter כרכים של תמיסות מימיות על יחסי ערבוב שונים. השבב מאפשר second זלוף מבוקרת מחשב של תרביות תאים microfluidic.
המכשירים קל לפברק ופשוטה לשליטה. בשל biocompatibility של PDMS, שבבים אלה יכול להיות יישומים רחב מבחני אבחון מיניאטורי, כמו גם מחקרים בסיסיים בביולוגיה התא.
פרוטוקול
למכשיר עיצוב Microfluidic CorelDraw או באמצעות תוכנת AutoCAD
עקרון PDMS microvalves מכשירים מבוססי: מכשירים מורכבים משלוש שכבות: שכבה המכילה fluidic microchambers בגדלים שונים, מעין "שכבת שליטה" המכיל את microchannels צורך להפעיל את נתיב fluidic עם microvalves, וכן קרום דק באמצע PDMS כי הוא מחויב את שכבת שליטה. במנוחה, עקב התאימות ואת hydrophobicity של PDMS, את החותמות קרום (הפיך) כנגד המושב שלו, ולפיכך לתאי להישאר מבודדים אחד מהשני ללא השקעת אנרגיה. שסתומים ניתן לפתוח על ידי הפעלת לחץ שלילי (למשל, אבק הבית), כך הממברנה PDMS מסיט את ומפריד מפני השטח שתומך הקיר בין שני חדרי fluidic, ובכך לחבר את נתיב fluidic. סגירת Valve יכולה להיות מושגת על ידי החלפת ההגדרה הלחץ ואקום בלחץ אטמוספרי.
שכבת Fluidic שכבת דפוסי השליטה נועדו CorelDraw או באמצעות תוכנת AutoCAD. מסכות המכיל עיצובים אלה הודפסו ברזולוציה גבוהה (8,000 עד 20,000 dpi) על סרטים שקיפות באמצעות שירותים מסחריים (CAD / אמנות שירותים, Bandon, OR) (מסכות לא מוצג).
המצאה של אדונים סיליקון באמצעות photolithography סטנדרטי SU-8
- תקן SU-8 שיטות photolithography שימשו כדי ליצור SU-8 "אדונים" (SU-8 2050, MicroChem, ניוטון, MA) עבור שכבת microfluidic והשליטה שסתום שכבה cleanroom (לא רואים בסרט הזה).
- כדי להקל על שחרורו, לפני שכפול PDMS SU-8, אדונים היו silanized ידי חשיפה לאדים של fluorosilane ((tridecafluoro-1, 1,2,2,-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane (TFOCS)), תוך צנצנת ייבוש (ללא ייבוש כדורי) המחובר למקור ואקום. החדר ייבוש חייב להיות ממוקם בתוך מכסה המנוע עקב עשן כימי אופי מאכל של אדים TFOCS.
- המקום חלק קטן מגבת נייר סופג בתוך החדר ייבוש. הוסף ירידה של TFOCS אל מגבת נייר ולפנות את האוויר מן החדר. החל ואקום 1 דקות ומכבים. סגירת ואקום לאפשר 30 דקות להפקדה. שמור את המאסטרים במיכלים סגורים לשימוש עתידי.
Replica דפוס של PDMS מן המאסטרים
- השכבה fluidic ואת השכבה מלאה מיוצרים על ידי דפוס העתק של PDMS מ SU-8 אדונים.
- PDMS ערבוב ביסודיות מראש פולימר צולבות מקשר (10:01 wt. Ratio), דה בועה ייבוש למשך 10-15 דקות עד בועות ברור.
- חותכים צינורות סיליקון לתוך 1-2 חתיכות ס"מ. בחרו את הגודל המתאים של צינורות לפי בקשה. אנו משתמשים tubings 1.14 מ"מ מזהה כאן חיבור קל צינורות OD 1 / 16 אינץ מאוחר יותר.
- השתמש מלט דוקו ® כדי צינורות דבק על האזורים מפרצון של המאסטר SU-8 של שכבת שליטה. היזהר שלא להשתמש בדבק יותר מדי, כמו צינורות סיליקון עשוי מרכיבים כמו PDMS, ואת צינורות יהיה מוטבע לתוך המכשיר PDMS microfluidic, יצירת האוויר פתחי הכניסה הדוק fluidic / שקעים.
- במכשיר שלנו, אזורים כניסת נועדו על המסכות של fluidic והן שכבות שליטה, אבל צינורות פתחי הכניסה סיליקון הם רק יצוק לתוך שכבה אחת (לדוגמה, שכבת שליטה) של המכשיר. כדי ליצור פתחי הכניסה לשכבה fluidic, אנו להסיר באופן ידני או לנקב את סעיפים אחדים של קרום זה מכסה את האזורים מפרצון. לכן, לאחר יישור והרכבה, כל microchannels (אלה שנושאים לזרום כמו גם אלה השולטים שסתומים) נגישים מהחלק העליון של המכשיר, כך את פני השטח התחתונה היא מישוריים, המאפשר הדמיה של המכשיר על הבמה מיקרוסקופ רגיל.
- יוצקים בזהירות דה מבעבע PDMS על שני אדונים, סביב צינור יחידת שליטה ב-השכבה. De-הבועה שוב ייבוש. אחרי דה מבעבע תושלם, להכניס לתנור 65 ° C למשך שעה 1> בריפוי.
- הסר נרפא PDMS מכוסה אדונים מהתנור.
- גזור מכשירים בודדים המאסטרים (אב אחד מכיל שלושה מכשירים זהים) לסירוגין לקלף.
- הסרת דבק מאזורי מפרצון באמצעות מחט או זוג מלקחיים.
- קח את השליטה שכבת PDMS לתוך חדר נקי.
ייצור רזה PDMS ממברנה
- כפי עקרונית את המכשיר, את השכבה האמצעית מורכבת קרום PDMS ~ 12 מיקרומטר עבה.
- מערבבים 10:01 wt. יחס של PDMS prepolymer / תערובת סוכן ריפוי עם הקסאן (03:01 wt. היחס) על ידי vortexing.
- מעבר לחדר נקי. (סביבה ללא אבק הוא קריטי על מנת להבטיח כי ממברנות PDMS נקייה מפגמים; חלקיקי אבק עלול לגרום ממברנות המכיל חורים ו / או פגום מחויב לעצב את העתק).
- שים silanized 3 אינץ בקוטר רקיק עללזרוק את הוואקום של הצנטריפוגה Solitec. רקיק צריך להיות silanized (derivatized עם fluorosilane) לפני PDMS ספינינג כדי להקל על שחרורו של PDMS ממשטחי הסיליקון. קערת טפלון מחוץ צ'אק היה עטוף בסרט פלסטיק לניקוי קל.
- לוותר על 2-3 מ"ל של תערובת PDMS / הקסאן על גבי פרוסות סיליקון באמצעות מחט מזרק 18-מד (למזעור בועות).
- הגדרת פרמטרים ספין. ספין בסל"ד 7000 למשך 30 שניות, והתוצאה היא סרט PDMS בעובי 12 מיקרומטר ~.
- מחממים את פרוסות סיליקון ב 85 מעלות צלזיוס למשך 4 דקות על פלטה חשמלית כדי לרפא את הסרט PDMS.
מליטה Multilayer PDMS מכשיר והרכבה
- שים את השכבה מלאה של קרום PDMS לתוך תא פלזמה חמצן. הפעל פלזמה במשך 30 שניות (30 psi לחץ חמצן, קצב הזרימה 3-5 SCFH, 550W). תביאו את השכבה לשלוט במגע עם קרום PDMS מיד (תוך 5 דקות) לאחר הפעלת חמצן. הפרמטרים של המערכת, כגון לחץ חמצן, קצב הזרימה, כוח פלזמה זמן הטיפול, מוגדרים באופן אמפירי לפי יישומים שונים.
- המתן 5 דקות, ולהסיר את השכבה מלאה של פרוסות סיליקון יחד עם הממברנה.
- הסר ממברנות על שטחי פתחי הכניסה כך ששני מלאה שכבות fluidic נגישים מלמעלה באמצעות צינורות.
- יישר את השכבה מלאה (עם tubings כמו פתחי הכניסה) עם שכבת fluidic (מישורי) תחת stereoscope. מכיוון PDMS חותמות על PDMS, מליטה לא קבע נדרשת.
המחשב שבשליטת פתיחה וסגירה של microvalves PDMS ידי ואקום או לחץ
- לאחר יישור מכשיר והרכבה, להוסיף 1 / 16 אינץ OD (1 / 32 מזהה אינץ') צינורות Tygon לתוך פתחי הכניסה מזהה 1.14 מ"מ סיליקון ולחבר את פתחי הכניסה למקורות הלחץ או מאגרי fluidic.
- עבור פתיחת וסגירת השסתומים, לחצים נשלטים על ידי קו ואקום קו לחץ האוויר מחובר דרך שני הרגולטורים לחץ מערך של שלוש דרך שסתומים מיניאטוריים סולנואיד.
- שסתומים סולנואיד מחוברים חומרה הלאומי נתונים רכישת מכשירים נשלט באמצעות תוכנת LabVIEW.
- מבצע ההתקנים סטיה הממברנה הם דמיינו עם צבע מצלמת CCD (SPOT RT, כלי אבחון, סטרלינג הייטס, MI).
במקביל ערבוב של שני צבעים צבע שונה שונה כרכים nanoliter מוגדר
אנו מדגימים את פעולת המיקסר מקביל המאפשר אחסון ערבוב מדויק משנה nanoliter כרכים של תמיסות מימיות על יחסי ערבוב שונים:
- שכבת fluidic מכיל שני מערכים של microchambers: לאורך מערך, גודל microchambers פוחתת, החל השמאלי, מתוך 200 מיקרומטר x 400 מיקרומטר עד 200 מיקרומטר x 40 מיקרומטר; 10 הוא 500 x 40 מיקרומטר קאמרית מיקרומטר והוא השתמשו רק עבור החיבור fluidic במערך; בצד ימין של תא 10 היא קבוצה של תאים סימטרי הגדלת בגדלים. בתאי B של מערך נועדו כזה נפח נוסף של כל שני חדרים סמוכים בשורות שונות שווה תמיד. 0, 10r 0r 10 ו-B, B נועדו כפקדי בהתאמה פתרונות A ו-B ללא ערבוב.
- השכבה מלאה יש שתי עצמאי שבשליטת סטים של שסתומים. סט של ברזים V {1} משמש לחיבור שני מערכים קאמרית עם פתחי הכניסה שלהם, ואילו קבוצה שנייה של שסתומים {2} V משמש לחיבור כל זוג חדרים בשני מערכים.
- מלאו את microchambers ידי פתיחת שסתום להגדיר V {1} כדי לאפשר זרימה של שני פתרונות כדי לצבוע מערכים A ו-B, בהתאמה. זרימה של פתרונות ניתן להשיג גם על ידי היד או על ידי משיכת ואקום מבוקר עם שסתומי סולנואיד. אם בועות אוויר הטופס microchambers, הפתרון יכול להיות יותר דחף להוציא את בועות, או את המכשיר אפשר להשאיר למשך דקות ספורות ובועות ייעלמו בשל חדירות האוויר של PDMS.
- סגור את שסתום להגדיר V {1} לבודד כל תא במערכים שניהם.
- שסתום להגדיר פתח V {2} כדי לאפשר נוזל ערבוב בין החדרים הסמוכים מערכים שונים. ערבוב לוקח רק ~ 1-2 דקות כדי להשלים את הכרכים האלה.
- סגור V {2} כדי לדחוף את הנוזלים חזרה אל החדר כל fluidic ותאי לעוות חזרה לצורה המקורית שלהם. מאז שני מערכים fluidic נועדו עם לשכות 11 בגדלים שונים, 11 יחסי ערבוב שונים מיוצרים בשלב ערבוב אחד.
מערכת microfluidic משולב זלוף מבוקרת מחשב של תרביות תאים microfluidic
אנו מדגימים מערכת microfluidic כי הוא מסוגל זלוף האוטומטי של פתרונות מרובים תא תא בודד תרבות.פתחי הכניסה נשלטים על ידי microvalves, אשר יכול להיות מופעל בכל רצף של פתחי הכניסה יחידה, שילובים שונים, או בבת אחת. המכשיר מסוגל לייצר הדרגתיים או תערובות של פתרונות שונים.
גם מכשיר זה מורכב משלוש שכבות: שכבת fluidic, שכבת שליטה, קרום דק באמצע PDMS.
ייצור שלבים חלופיים עבור התקן זה:
- כניסה ויציאות של ערוצי fluidic ערוצי שליטה הם "אגרוף" באמצעות 1.2 מ"מ בקוטר האריס Micro-Punch (טד פלה, Inc). Tubing מחובר פתחי הכניסה באמצעות הקהה 18 מחטים מד אשר מוכנסים אל PDMS דרך שכבת שליטה. זה מאפשר אריזה צפופה של פתחי הכניסה מאשר צינורות הסיליקון. הציות של PDMS מספק חותמת הדוק סביב המחטים ביעילות לספק נוזלים או לחץ פנאומטי.
- כפי שתואר קודם לכן, מליטה של קרום דק PDMS לשכבה השליטה מושגת באמצעות חשיפה פלזמה חמצן.
- השכבה fluidic הוא הוכן על ידי דפוס עם העתק PDMS מראש פולימר צולבות מקשר ביחס של 5:01 ו חלקית ריפוי במשך 25 דקות ב 60 ° C בתנור הסעה. בשלב זה, את השכבה fluidic נרפא חלקית עדיין דביק, אך ניתן להסיר מן האדון.
- השכבה fluidic מיושר באופן ידני כדי לשלוט מראש כינס את שכבות קרום באמצעות stereoscope. המכשיר התאספו מושם אז במשך 5 דקות על פלטה חמה ב 80 º C. בשלב הבא, לשלוט על קווי שסתום מחוברים בקר אוטומטיות השסתומים הם actuated עד הממברנה מתנתק מן השכבה fluidic בכלל המושבים שסתום על ידי יישום ואקום. אחרי "ניתוק" השסתומים, בקר את המחשב מוגדר מחזור השסתומים תוך המכשיר לרפא עוד לפחות שעה 1 על פלטה חשמלית ב 80 מעלות צלזיוס.
התכונות של מערכת משולבת microfluidic שלנו: המכשיר מסוגל זלוף אוטומטי של 16 פתרונות שונים לחדר תא התרבות באמצעות תוכנית valving multiplexed. העיצוב ערוץ מבטיחה עמידות של כל פתחי הכניסה היא מאוזנת. עיצוב microvalve שלנו מבודד פתרונות בקרות שטיפה בערוצים משולבת להסרת מהירה של נוזל, אשר מגביל צולבות זיהום. מיקסר אדרה משולב יכול להיות מופעל כדי לייצר תערובות של פתחי הכניסה שונה. בנוסף, ישנם ארבעה ערוצי התנגדות משתנה כי יכול להיות מופעל כדי לשנות את קצב הזרימה.
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
דיון
היתרונות העיקריים של תכנון microvalve שלנו:
- אין מקור אנרגיה נוסף נדרש כדי לסגור את נתיב fluidic, ומכאן את המכשיר טעון הוא נייד מאוד, ו
- המכשיר יכול להיות בנוי על ידי העתקים מן PDMS photolithographically בדוגמת SU-8 תבניות, המאפשר microfabricating עמוק (עד 1 מ"מ) עם הערוצים הצדדיים אנכי (כלומר את גובה התכונות ניתן לציין בנפרד רוחב שלהם) וכתוצאה מכך מאוד תכונ...
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
תודות
עבודה זו נתמכה על ידי המכון הלאומי הדמיה ביו מענק Bioengineering # EB003307 ועל ידי פרס קרן המדע הלאומית קריירה AF
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
חומרים
| שם | חברה | מספר קטלוג | הערות | |
|---|---|---|---|---|
| פרוסות סיליקון נקיות | ציוד מתכלה | Silicon Sense Inc. | 3P0110TEST | קוטר 3-inch, P/Boron |
| "פרוסות מאסטר" המכילות תבניות SU-8 | ציוד מתכלה | יוצרו במעבדה באמצעות נהלי פוטוליתוגרפיה סטנדרטיים | ||
| מייבשים (2) | ציוד | VWR international | 24987-048 | אחד עבור סילניזציה, אחד עבור הוצאת בועות מ-PDMS. |
| מאזניים | ציוד | OHAUS Corp. | SC6010 | |
| תנור | ציוד | Sheldon Manufacturing, Inc. | 1330GM | |
| MiniVortexer | ציוד | VWR international | 58816-121 | |
| ספינר | ציוד | Headway Research Inc. | PWM32 | |
| מכשיר חריטה בפלסמה | ציוד | Plasmatic Systems, Inc. | Plasma Preen II-973 | |
| פלטה מחממת | ציוד | Torre Pines Scientific | HP30A | |
| סטריאוסקופ | מיקרוסקופ | Nikon Instruments | TMZ1500 | |
| מצלמת CCD | ציוד | Diagnostic Instruments | SPOT RT | |
| שסתומי סולנואיד | ציוד | Lee Company | LHDA0511111H | |
| כרטיס רכישת נתונים | חומרה | National Instruments | PCI 6025E, CB-50LP | |
| LabView | תוכנה | National Instruments | Version 8.0 | |
| Tridecafluoro-1,1,2,2,-tetrahydrooctyl)-1-trichlorosilane | ריאגנט | United Chemical Technologies | T2492 | יש לבצע את הסילניזציה תחת מCבּוֹת כימיים. |
| פולימר מקשר (prepolymer) ומקשר צולב של PDMS | ריאגנט | Dow Corning | Sylgard 184 | |
| הקסאן | ריאגנט | EMD Millipore | HX0295-6 | |
| צבעים | ריאגנט | Spectrum Chemical Mfg. Corp. | FD&C 110, 135, 150 | כחול #1, צהוב #5, אדום #3. |
| פיפטות העברה חד-פעמיות של 3 ml | ציוד מתכלה | Fisher Scientific | 13-711-20 | |
| נייר Kimwipes | ציוד מתכלה | Kimberly-Clark Corporation | 34155 | |
| סירות שקילה | ציוד מתכלה | VWR international | 12577-027 | |
| מוריד לשון | ציוד מתכלה | Fisher Scientific | 11-700-555 | |
| צלחות P100 | ציוד מתכלה | Fisher Scientific | 08-772E | |
| צינור סיליקון (קוטר פנימי (I.D.) של 1.14 mm) | ציוד מתכלה | Cole-Parmer | 07625-30 | |
| צינור Tygon (קוטר חיצוני 1/16 in; קוטר פנימי 1/32 in) | ציוד מתכלה | Cole-Parmer | 06418-02 | |
| דבק Duco Cement | ציוד מתכלה | Devcon Inc. | 6245 | |
| להב תער | כלים | VWR international | 55411-050 | |
| מחטים | כלים | Fisher Scientific | 0053482 (25 Gauge) | |
| פינצטה #5 | כלים | Fine Science Tools | 11251-20 | |
| מבחנה לצנטריפוגה של 50 ml | ציוד מתכלה | Fisher Scientific | 05-526B | |
| סרט איטום | ציוד מתכלה | AEP Industries Inc. | 0153877 | |
| מבחנות מיקרו-צנטריפוגה של 1.5 ml | ציוד מתכלה | Fisher Scientific | 05-406-16 | |
| מבחנות לצנטריפוגה של 15 ml | ציוד מתכלה | BD Biosciences | 352097 | |
| כפפות ניטריל סגולות ללא אבקה | ציוד מתכלה | VWR international | 40101-348 | |
| מחץ ביופסיה של Harris בקוטר 1.2 mm | כלים | Ted Pella, Inc. | 15074 |
מקורות
- Li, N., Hsu, C. H., Folch, A. Parallel mixing of photolithographically-defined nanoliter volumes using elastomeric microvalve arrays. Electrophoresis. 26 (19), 3858-3864 (2005).
- Thorsen, T., Maerkl, S. J., Quake, S. R. Microfluidic large-scale integration. Science. 298 (5593), 580-584 (2002).
הגישה מוגבלת. התחברו או התחילו תקופת ניסיון כדי לצפות בתוכן זה.
הדפסות חוזרות והרשאות
