בידוד מונוציטים מדם שלם על ידי ברירה שלילית אימונומגנטית

תקציר

מקור: Plaisance-Bonstaff, K., et al. בידוד, טרנספקציה ותרבות של מונוציטים אנושיים ראשוניים. J. Vis. Exp. (2019)

בסרטון זה אנו מדגימים בידוד של מונוציטים מדם אנושי שלם על ידי הפרדה אימונומגנטית שלילית. המונוציטים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

פרוטוקול

כל ההליכים המערבים משתתפים אנושיים בוצעו בהתאם להנחיות המוסדיות, הלאומיות והבינלאומיות לרווחת האדם ונבחנו על ידי ועדת הבדיקה המוסדית המקומית.

1. בידוד מונוציטים אנושיים ראשוניים על ידי ברירה שלילית אימונומגנטית

1. לאסוף 40 מ"ל של דם מלא אנושי טרי (מחולה ^HIV+ או מקבוצת ביקורת בריאה) בארבע שפופרות ואקום של 10 מ"ל חומצה אתילאנדיאמין טטראצטית (EDTA) (10 מ"ל דם לכל צינור). באמצעות טכניקות סטריליות תחת ארון בטיחות ביולוגית, להעביר את כל 40 מ"ל של דם לתוך צינור אחד 50 מ"ל פרופילן חרוטי.
2. בהתאם לפרוטוקול היצרן עבור ערכת בידוד המונוציטים האנושית שנבחרה (טבלה של חומרים), יש להוסיף 2 מ"ל ש....

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.5 מיליון EDTA	Invitrogen	AM9260G
צינורות איסוף דם פלסטיק BD Vacutainer עם K2EDTA	BD Biosciences	366643
מגנט Easy 50 EasySep	טכנולוגיות StemCell	18002
ערכת בידוד מונוציטים אנושית ישירה Easy Sep	טכנולוגיות StemCell	19669
PBS	גיבקו	20012027
RPMI 1640 עם L-גלוטמין	קורנינג	10040CVMP