מערכות חיסון ומרכיביהן

בסרטון זה אנו מדגימים בידוד של מונוציטים מדם אנושי שלם על ידי הפרדה אימונומגנטית שלילית. המונוציטים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף במורד הזרם.

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד של תאי קופפר או מקרופאגים בכבד מהכבד של העכבר. הכבד מחורר בתמיסת עיכול ואחריה הפרדה הדרגתית של צפיפות. תאי קופפר הדבקים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף.

סרטון זה מדגים פרוטוקול נטול אנזימים לבידוד מקרופאגים מגנגליון שורש גבי של עכבר (DRG) באמצעות טכניקת דיסוציאציה מכנית. לאחר הומוגניזציה של רקמת DRG שזה עתה נאספת, נוגדנים כנגד קולטני פני התא על המקרופאגים משמשים לסימון התאים באופן פלואורסצנטי, ולאחר מכן ביצוע ציטומטריית זרימה כדי לאשר את נוכחותם של מקרופאגים בדגימה.

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של לימפוציטים ממדבקה של עכבר שנקטף. הלימפוציטים המבודדים יכולים לשמש לניתוח נוסף.

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של תאי דם חד-גרעיניים היקפיים, PBMCs, המכילים מונוציטים ולימפוציטים ממעטפת באפי אנושית על ידי צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות. ניתן להשתמש במרכזיות המבודדות לניתוח נוסף.

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד של תאי B מדם היקפי אנושי באמצעות נוגדנים ביוטיניליים ספציפיים לתאים שאינם מסוג B ומיקרו-כדוריות מגנטיות מצומדות סטרפטווידין.

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד והתרבית של תאי סטרומה ממח עצם מהעצמות הארוכות של עכברים. ניתן להשתמש ב- BMSCs הדבקים המבודדים לניתוח נוסף.

סרטון זה מדגים בידוד תאי T מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMCs) באמצעות טכנולוגיית מיון תאים המופעלים על ידי ציפה פונקציונלית (BACS). טכניקת הבידוד כוללת בחירה חיובית של תאי CD3+ T על ידי תיוג התאים עם נוגדנים אנטי CD3 biotinylated והפרדת התאים הקשורים נוגדנים באמצעות microbubbles הקשורים streptavidin.

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול להפעלת תאי T ראשוניים אנושיים. הדגירה של תאי T נאיביים עם חרוזים מגנטיים המצופים בנוגדנים נגד CD3 ונגד CD28, ולאחר מכן טיפול באינטרלוקין-2 או אינטרלוקין-15, מובילה להפעלת תאי T נאיביים ולהתמיינותם והתפשטותם לתאי T משפיעים או זיכרון.

בסרטון זה, אנו מדגימים את הבידוד של לויקוציטים בכבד מכבד עכבר על ידי זילוח מאולץ.

סרטון זה מדגים בידוד של לימפוציטים, כולל תאי הרג טבעיים או תאי NK, מרקמת כבד אנושית לצורך התרחבות סלקטיבית. עיכול אנזימטי ומכני, ואחריו הפרדת שיפוע צפיפות, מקדם בידוד לימפוציטים, כולל תאי NK. הלימפוציטים שנאספו יכולים לשמש עוד יותר להרחבה סלקטיבית של תאי NK.

סרטון זה מדגים טכניקה להרחבת תאי הרג טבעי (NK) ישירות מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים (PBMCs) באמצעות קו תאי הזנה. PBMCs מתורבתים יחד עם תאים מזינים לימפובלסטואידים מהונדסים גנטית המבטאים אינטרלוקין-21 הקשור לקרום (mIL-21), ולתרבית מתווספים הציטוקינים אינטרלוקין-2 (IL-2) ואינטרלוקין-15 (IL-15). יחד, קוקטייל זה של ליגנדות מוביל להתרחבות ממושכת של תאי NK עם טוהר גבוה.

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד של תאי סרטולי מצינוריות זרע של עכברים, מרכיב באשכים. עיכול אנזימטי ושטיפות חוזרות ונשנות מקדמים את שחרורם של תאי סרטולי לתמיסה, אשר ניתן לגדל בתרבית נוספת לצורך התרבות וצמיחה.

סרטון זה מדגים פרוטוקול לבידוד מבוסס תיוג מגנטי של אוכלוסייה בריכוז נמוך של תאי T CD4+Vδ1+γδ מתאי דם חד-גרעיניים היקפיים אנושיים (PBMCs). באמצעות שילוב של נוגדנים מצומדים נגד Vδ1 FITC, מיקרו-חרוזים מגנטיים נגד FITC וחרוזים על-פאראמגנטיים מצופים נוגדנים נגד CD4, תאי T CD4+Vδ1+ יכולים להיות מטוהרים בהצלחה מאוכלוסיית PBMC.

בסרטון זה אנו מדגימים את הבידוד של נויטרופילים ציטוטוקסיים בצפיפות גבוהה ונויטרופילים בצפיפות נמוכה מדמו של עכבר נושא גידול על ידי צנטריפוגה הדרגתית לא רציפה של סוכרוז.

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד של רשת תאי החיסון של חניכיים ממודל עכבר. העיכול האנזימטי משחרר את רקמת החניכיים מהשיניים והעצם המצורפות, אשר מתעכלת באופן מכני נוסף, ומשחרר תאים חיסוניים מהחניכיים. התאים המבודדים מוכנים לניסויים אימונולוגיים.

סרטון זה מדגים שיטת שטיפת הצפק לבידוד תאי פיטום בוגרים מסוג רקמת חיבור מחלל הצפק של עכברים בוגרים. עם בידוד תערובת של תאי חיסון ראשוניים מחלל הצפק, מתבצעת התרבות סלקטיבית של תאי פיטום בתנאי תרבית מתאימים.

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול לבידוד תאי CD11b, כולל מיקרוגליה, ממוחות של גורי עכברים באמצעות מיון תאים המופעל באמצעות מגנטית. רקמות המוח הומוגניות כדי לקבל תרחיפים חד-תאיים, אשר מודגרים עם מיקרו-חרוזים מצופים נוגדנים נגד CD11b, ולאחר מכן הפרדה מבוססת עמודה מגנטית כדי לטהר את אוכלוסיית התאים CD11b+.

סרטון זה מדגים את הליך הבידוד הכירורגי של בלוטת הלימפה המתנקזת מפשעתית מדגם עכבר. חתך באזור הבטן מספק גישה לבלוטת הלימפה המפשעה, אשר נקטף בניתוח. בלוטת הלימפה השקופה שנקטפה יכולה לשמש למחקרים אימונולוגיים.

סרטון זה מדגים טכניקת דיסקציה לקצירת בלוטות לימפה מנקזות פופליטליות מהרגליים האחוריות של העכבר. בלוטות הלימפה ממלאות תפקיד קריטי בגישור בין מערכת החיסון המולדת והנרכשת, וקצירת בלוטות לימפה שלמות – עם מבנה רקמה שמור ויכולת קיום תאית – יכולה לסייע בחקר תגובות חיסוניות מקומיות וסיסטמיות.

סרטון זה מדגים את הפרימיום של מונוציטים ראשוניים למקרופאגים. מונוציטים אנושיים ראשוניים יכולים להיות מבודדים ומובחנים לפנוטיפ פרו-דלקתי דמוי M1 באמצעות גורם מגרה מושבת גרנולוציטים-מקרופאגים (GM-CSF) או לפנוטיפ אנטי-דלקתי דמוי M2 באמצעות גורם מגרה מושבת מקרופאגים (M-CSF).

סרטון זה מתאר שיטה במבחנה ליצירת מקרופאגים מתאי גזע פלוריפוטנטיים המושרים על ידי בני אדם (iPSCs). יצירת מקרופאגים מתאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים מתרחשת בשלושה שלבים: (i) צבירה של תאי גזע פלוריפוטנטיים מושרים בתרחיף ליצירת גופים עובריים תלת-ממדיים (EBs) המתמיינים לתאים מזודרמליים, (ii) היווצרות תאים מקדימים של מקרופאגים מה-EBs המתמיינים, ו-(iii) התמיינות של התאים המקדומים של המקרופאגים למקרופאגים בוגרים ומתפקדים.

בסרטון זה, אנו מדגימים הליך לגרימת התמיינות וקיטוב של מונוציטים היקפיים שמקורם בדם למקרופאגים M1 או M2. דגירה עם גורם מגרה מושבת גרנולוציטים-מקרופאגים, ליפופוליסכריד ואינטרפרון-גמא מניבה מקרופאגים M1 מעודדי דלקת, ואילו דגירה עם גורם מגרה מושבת מקרופאגים ואינטרלוקין-4 גורמת לייצור מקרופאגים אנטי-דלקתיים מסוג M2.

סרטון זה מדגים בדיקת מבחנה ליצירת תאים דנדריטיים פלסמקיטואידים (pDCs) מתאי אב לימפואידים נפוצים (CLPs). לאחר תרבית משותפת של CLPs מטוהרים עם תאי הזנה מוקרנים γ בנוכחות ליגנד טירוזין קינאז-3 דמוי FMS (FL), CLPs מתמיינים ל-pDCs שאינם דבקים, שנוכחותם מאושרת באמצעות ציטומטריית זרימה.

סרטון זה מדגים את יצירתם של תאים דנדריטיים לא בוגרים, בוגרים וסובלוגניים, או DCs, ממונוציטים אנושיים. הדגירה של מונוציטים עם גורמי גדילה וציטוקינים מובילה לייצור DCs לא בוגרים. בתגובה למולקולות ויסות חיסוניות, DCs לא בשלים מתמיינים ל-DCs סובלרוגניים ובוגרים.

סרטון זה מדגים את ההתמיינות של תאי סטרומה ממח עצם (BMSCs) לאדיפוציטים. בתהליך הדו-שלבי, בנוכחות גורמי גדילה והורמונים ספציפיים, BMSCs בלתי ממוינים מתמיינים תחילה לפראדיפוציטים. השלב השני הכולל טיפול בגלוקוז ואינסולין מוביל להיווצרות אדיפוציטים בוגרים עם טיפות שומנים מרובות.

סרטון זה מדגים טכניקה להבדלה של מגה-קריוציטים והיווצרות טסיות דם. תאי גזע המטופויטיים - שבודדו מדם טבורי אנושי - מתמיינים למגה-קריוציטים בוגרים בנוכחות טרומבופויטין. המגה-קריוציטים הבוגרים מייצרים שלוחות ציטופלזמיות הנקראות טסיות דם, אשר מעוררות טסיות בודדות.

סרטון זה מדגים פרוטוקול ליצירת תאי T פונקציונליים ספציפיים לאנטיגן מתאי T לא בוגרים שמקורם ב-iPSC באמצעות מערכת תרבית תימית תלת-ממדית. תרבית משותפת של תאי T לא בוגרים שמקורם ב-iPSC עם עכברים אנדוגניים מדולדלי לימפוציטים, אונות תימיות עובריות, הביאה להבשלה מוצלחת של תאי T ליצירת CD8αβ+ MHC class I+ iPSC שמקורם במהגרים תימיים (iTEs).

בסרטון זה, אנו מתארים פרוטוקול לטיהור טסיות דם מדם שלם מורין והפעלתן לאחר מכן עם טרומבין אגוניסט טסיות. כאשר מנתחים אותם באמצעות ציטומטריית זרימה, טסיות המנוחה המטוהרות מאופיינות על סמך הביטוי של סמן פני השטח של התא CD41, בעוד שטסיות מופעלות מטוהרות מבטאות יחד את סמני פני השטח CD41 ו- CD62P.

סרטון זה מדגים טכניקה במבחנה ליצירת ובידוד מלכודות נויטרופילים חוץ-תאיות (NETs). נויטרופילים מבודדים מדם היקפי ומעוררים באמצעות phorbol myristate acetate (PMA) כדי לייצר NETs. במהלך הדגירה, הנויטרופילים עוברים תהליך של מוות תאי (NETosis) כדי לשחרר NETs המורכבים מכרומטין מעובה מעורבב עם חלבונים ציטופלזמיים גרגיריים.

סרטון זה מדגים את התמיינות החוץ גופית של גרנולוציטים-מקרופאגים-גורם מגרה מושבה או תאי T מסייעים מייצרי GM-CSF (THGM). תאי T נאיביים מבודדים עוברים גירוי לצורך התמיינות ל-THGM, אשר מאושר על ידי זיהוי ייצור GM-CSF תוך-תאי גבוה וביטוי נמוך של ציטוקינים ספציפיים אחרים לתאי T עוזרים.

סרטון זה מדגים בדיקה קולורימטרית כדי לקבוע את פעילות הגרגיר של תאי פיטום. האנזים המשוחרר על ידי תאי הפיטום מבצע הידרוליזה של המצע ומייצר תוצר צבעוני. פעילות הפירוק של תאי הפיטום נמדדה כאחוז השחרור של אנזימים מחוץ לתא מנורמל עם תכולת האנזימים הכוללת בתא.

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול למיון מבוסס ציטומטריה של זרימה של תאי B נאיביים, תאי זיכרון B ותת-אוכלוסיות של תאי פלזמה פלסמה פלסמבלאסטים מתאי דם היקפיים אנושיים מסוג B. ניתן להבחין בין תת-האוכלוסיות השונות של תאי B בהתבסס על קשירת נוגדנים מבוססי פלואורופור לקולטני CD19, CD27 ו-CD38 המבוטאים על פני השטח של תאי B, ולאחר מכן מיון תאים.

סרטון זה מדגים את השימוש בבדיקת ELISpot כדי להעריך את תפקודם של תאי B מפרישי נוגדנים, ASC. הנוגדנים המופרשים על ידי ASCs אינטראקציה עם מקטעי נוגדנים רב-שבטיים הקשורים לקרום, אשר מזוהים על ידי נוגדני IgG או IgM מצומדים אנזים. הכתם הצבעוני שנוצר בכל באר מעיד על נוכחות איזוטיפ של הנוגדן הספציפי, אשר נמצא בקורלציה עם פעילות ההפרשה של תאי B.

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול לבידוד תאים בודדים מבלוטות לימפה מנקזות לבלב מורין (PDLNs) ואפיון תאי T רגולטוריים (Tregs) מאוכלוסיית התא הבודד באמצעות ציטומטריית זרימה. Tregs מזוהים על סמך הביטוי החיובי של סמני פני התא CD4, CD25 ו-Nrp1, יחד עם גורמי השעתוק הגרעיניים Foxp3 ו-Helios.

מקור: Bello-Gamboa, A. et al., Imaging the Human Immunological Synapse.J. Vis. Exp.(2019)
סרטון זה מדגים את המחקר במבחנה של היווצרות סינפסות אימונולוגיות בין תא מציג אנטיגן ולימפוציטים מסייעים מסוג T באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי. קולטני תאי T של לימפוציטים מסייעים מסוג T מתקשרים עם קומפלקס אנטיגן-MHC-II בתאים מציגי אנטיגן ויוצרים סינפסות אימונולוגיות, ולאחר מכן תנועות שלפוחית הפרשה לכיוון הסינפסה, אשר מודגמת על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

בסרטון זה אנו מדגימים טכניקה מבוססת ציטומטריית זרימה כדי לקבוע את חלקם של תאי T רוצחים הנגרמים על ידי ציטוקינים, תאי CIK, שהורחבו מתרבית תאים חד-גרעיניים היקפית בדם.

סרטון זה מדגים שיטת הדמיה להמחשת אינטרפרון-גמא באתרו (IFN-γ) בטחול העכבר. בעקבות זיהום חיידקי והשראת הצטברות IFN-γ בתוך תאי T ותאי הרג טבעיים, הטחול נקצר מהעכבר. עם קבלת קטעי רקמות, immunostaining מבוצע כדי לדמיין IFN-γ בתוך התאים.

בסרטון זה אנו מתארים פרוטוקול להדמיה מבוססת מיקרוסקופ חיסוני וקונפוקלי של מלכודות חוץ-תאיות של מקרופאגים (METs) ברקמת הריאה של מורין. מקרופאגים שוכני רקמות מאופיינים בביטוי של סמן הגליקופרוטאין הספציפי למקרופאגים F4/80, בעוד METs מאופיינים על ידי סימון סמני MET metalloproteinase 9, היסטון ציטרולינאט H3 וכרומטין.

סרטון זה מדגים טכניקת הומוגניזציה יעילה ליצירת תחליב אנטיגן-אדג'ובנטי כדי לגרום לאנצפלומיאליטיס אוטואימונית ניסיונית (EAE) במודל מורין. התחליב מכיל אנטיגן עצמי - גליקופרוטאין אוליגודנדרוציטים מיאלין (MOG) - בשלב המים, מוקף בשלב שמן רציף הכולל חיידק פתוגני בלתי פעיל. האמולסיה מבטיחה שחרור מתמשך של אנטיגנים לתגובה חיסונית ממושכת.

סרטון זה מדגים הדמיה של לימפוציטים תוך-אפיתליאליים γδ (IELs) בעכברים טרנסגניים באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי. ההליך הכירורגי כולל יצירת קו ניקוב וביצוע חתך אורכי כדי לחשוף את רירית המעי ואת villi. העכברים הטרנסגניים מבטאים חלבוני כתב באופן בלעדי ב-γδ IELs, מה שמאפשר מעקב אחריהם. הדמיה תוך-חיונית לוכדת את התנועה הדינמית של γδ IEL ירוק המסומן בפלואורסצנטיות לאורך קרום המרתף של תא האפיתל של המעי.

סרטון זה מדגים את היצירה והבידוד של מיקרו-חלקיקים שמקורם בלימפוציטים מסוג T, LMPs, מלימפוציטים מסוג T לאחר טיפול באקטינומיצין-D.

סרטון זה מתאר פרוטוקול לבידוד תאי CD8+ T ספציפיים לאנטיגן נדיר באמצעות תאים מציגי אנטיגן מלאכותיים מבוססי ננו-חלקיקים מגנטיים (aAPCs) המתפקדים עם MHC-Igs אנטיגני ונוגדנים נגד CD28. אינטראקציה של aAPCs עם תאי CD8+ T המבטאים באופן ספציפי את קולטני תאי T הממוקדים בפפטידים, ולאחר מכן התרחבותם במבחנה, מביאה להעשרה והרחבה של אוכלוסיית תאי CD8+ T זו.

סרטון זה מדגים הפרדת נויטרופילים מהפרשות קנה הנשימה באמצעות מכשיר מיקרופלואידי עם תעלות ספירליות. המכשיר משיג הפרדה יעילה על בסיס גודל התא על ידי שימוש בעוביים משתנים ותעלות בצורת טרפז. יחסי הגומלין בין הכוחות גורמים לכך שנויטרופילים גדולים מצטברים ליד הקיר הפנימי בעוד אריתרוציטים ואגרגטים מוצין נשארים ליד הקיר החיצוני, מה שמבטיח הפרדה יעילה של נויטרופילים.

בסרטון זה, אנו מדגימים את תיוג הרדיו התוך-תאי של תאי T עוזרים באמצעות נוגדנים חד-שבטיים מצומדים באיזוטופים רדיואקטיביים להדמיית טומוגרפיה לא פולשנית של פליטת פוזיטרונים.